Purified KBV isolates were obtained

Tinh khiết KBV chủng đã thu được từ khác nhauđịa điểm và các loài côn trùng. Cô lập KBV 14(từ mật ong ong ở Úc, chính xác vị trí không rõ)16 (từ con ong kêu vo vo ở Auckland, mớiZealand) và New Zealand KBV (từ mật ong ong ở Auckland,New Zealand). Chuẩn bị tinh khiết virus khácvà nhiễm vi rút ong và nhộng đã được cung cấpbởi Rothamsted nghiên cứu (Anh), USDA (Mỹ)và HDLGN (Đức). Ong bị nhiễm mẫuđã được vận chuyển ở các nhiệt độ môi trường xung quanh trong 70%ethanol, và được lưu trữ tại –20 ˚C trước khi phân tích.2.2. thời gian thực Đảng Cộng sản Romania mồivà TaqMan thăm dò thiết kếTrình tự dữ liệu cho áo protein gen từKBV và tê liệt cấp tính liên quan chặt chẽvirus (ABPV) đã được tải về từ EMBLcơ sở dữ liệu để so sánh liên và nội virus Chuỗibiến đổi. Nhiều thứ tự sắp xếpđã được thực hiện bằng cách sử dụng các thuật toán CLUSTAL Vtrong gói MegAlign (DNASTAR inc.,Madison, Mỹ). Thời gian thực Đảng Cộng sản Romania chất nền, mồi và mộtthăm dò đã được thiết kế (mồi ExpressTM phần mềm,Áp dụng Biosystems, Branchburg, Hoa Kỳ) đến một khu vựccác chuỗi (sử dụng gia nhập AF263725) bảo tồnở KBV nhưng riêng biệt từ ABPV. Các khảo nghiệmđã được thử nghiệm cho cross-reaction chống lại ABPV và cácnữ hoàng ong virus khác đen di động virus (BQCV),Sacbrood virus (NHNN), mây cánh virus (CWV),Chậm tê liệt virus (SPV), Deformed cánh virus(DWV), tình trạng tê liệt mãn tính virus (CPV) và API óng ánhvirus (AIV).Thời gian thực Đảng Cộng sản Romania chất nền, mồi và thăm dò một được thiết kếđể con ong 18S rRNA gene của API mellifera(AJ307465) để phục vụ như là một điều khiển tích cực nội bộ(IPC) để đánh giá nucleic acid khai thác thống -ciency. Các 5' phóng viên nhà ga thuốc nhuộm cho các đầu dòđã là 6-carboxyflurorescin (FAM) và JOETM và3' quencher là tetra-methylcarboxyrhodamine(TAMRA) (Tab. I).

Nước tinh khiết KBV phân lập được lấy từ khác nhau
địa điểm và các loài côn trùng. Cô lập KBV 14
(từ ong mật tại Úc, chính xác địa điểm không rõ)
16 (từ ong bumble ở Auckland, New
Zealand) và KBV NZ (từ mật ong ong ở Auckland,
New Zealand). Các chế phẩm khác tinh khiết vi rút
và ong bị nhiễm virus và nhộng đã được cung cấp
bởi nghiên cứu Rothamsted (Anh), USDA (Mỹ)
và HDLGN (Đức). Mẫu ong nhiễm
được vận chuyển ở nhiệt độ môi trường xung quanh trong 70%
ethanol, và bảo quản ở -20 C trước khi phân tích.
2.2. Real-time PCR mồi
và TaqMan? thăm dò thiết kế
dữ liệu trình tự gen cho protein áo từ
KBV và tình trạng tê liệt cấp tính liên quan chặt chẽ
virus (ABPV) đã được tải về từ các EMBL
cơ sở dữ liệu để so sánh trình tự của virus liên và nội
biến. Nhiều sự sắp xếp trình tự
đã được thực hiện bằng cách sử dụng thuật toán CLUSTAL V
trong gói MegAlign (DNASTAR inc.,
Madison, Mỹ). Mồi PCR thời gian thực và một
đầu dò được thiết kế (phần mềm Primer ExpressTM,
Applied Biosystems, Branchburg, USA) đến một khu vực
của chuỗi (sử dụng nhập AF263725) được bảo tồn
trong KBV nhưng khác biệt từ ABPV. Xét nghiệm này
đã được thử nghiệm cho phản ứng chéo với ABPV và
virus ong khác vi rút di động Đen hoàng hậu (BQCV),
vi rút Sacbrood (NHNN), virus cánh mây (CWV),
vi rút chậm tê liệt (SPV), virus cánh Deformed
(DWV), Virus mãn tính tê liệt (ĐCSVN) và Apis óng ánh
virus (AIV).
mồi PCR thời gian thực và một đầu dò được thiết kế
để các rRNA gene của Apis mellifera ong 18S
(AJ307465) để phục vụ như là một chứng dương nội
(IPC) để đánh giá axit nucleic khai thác effi-
tính hiệu. 5 'thuốc nhuộm phóng thiết bị đầu cuối cho các đầu dò
là 6-carboxyflurorescin (FAM) và JOETM và
3' là thức uống tetra-methylcarboxyrhodamine
(Tamra) (Tab. I).