To detect the virus, a 1-tube RT-PC

To detect the virus, a 1-tube RT-PCR was performed by
amplifying 433 base pairs (bp) of ORF 7. The primers
(1010PLS/1010PLR) used were described previously,2 with
the exception of a 5 addition of a G on the upstream primer.
This primer set was reported as being specific for the ORF
7 region of both North American and European strains. The
RT-PCR was carried out in a 25-l reaction mix containing
2 mM MgCl2,
e 0.2 mM of each dNTP,e 0.4 U/L RNase
inhibitor,e 1.0 U/l MuLV reverse transcriptase,e 0.05 U/l
Taq DNA polymerase,e 0.1 M of each primer,f and 2 l of
template. A PCR System 9600 thermocyclere was used with the following thermocycling programs: cDNA synthesis at
42 C for 20 min, inactivation of reverse transcriptase and
denaturation at 95 C for 3 min, 35 cycles of denaturation at
95 C for 20 sec, primer annealing at 60 C for 15 sec; and
primer extension at 72 C for 20 sec, final extension at 72 C
for 7 min, holding at 4 C. The PCR product was detected
by electrophoresis in a 1.5% agaroseg gel stained with ethidium
bromide

Kết quả (Việt) 1:

Để phát hiện các virus, một ống 1 RT-PCR được thực hiện bởikhuyếch đại 433 cặp cơ sở (bp) của ORF 7. Các chất nền, mồi(1010PLS/1010PLR) được sử dụng đã mô tả trước đây, 2 vớiNgoại trừ một bổ sung 5 g trên mồi thượng nguồn.Điều này đặt mồi đã được báo cáo như là cụ thể cho ORF7 khu vực của Bắc Mỹ và châu Âu. CácRT-PCR được thực hiện tại có chứa hỗn hợp phản ứng 25-l2 mM MgCl2,e cách 0.2 mM mỗi dNTP, e 0.4 U/L RNasechất ức chế, e 1.0 U/l MuLV ngược, e 0,05 U/lTaq ADN polymerase, e 0.1 M mỗi mồi, f và 2 l củamẫu. Thermocyclere Đảng Cộng sản Romania hệ thống 9600 được sử dụng với các chương trình thermocycling sau: cDNA tổng hợp tại42 C trong 20 phút, ngừng hoạt động của reverse transcriptase vàdenaturation tại 95 C cho 3 phút, các chu kỳ 35 của denaturation tại95 C trong 20 giây, mồi ủ 60 c trong 15 giây; vàmồi phần mở rộng tại 72 C trong 20 giây, phần mở rộng cuối cùng tại 72 Ctrong 7 phút, đang nắm giữ tại 4 C. Sản phẩm PCR được phát hiệnbởi electrophoresis trong một agaroseg 1,5% gel màu với ethidiumbromua

Kết quả (Việt) 3:

Phát hiện virus, một 1-tube RT-PCR tiến hànhPhóng to 433 một cặp cơ bản (CA) ORF 7.Mồi(1010pls / 1010plr) sử dụng đã được miêu tả, 2Ở thượng nguồn tư liệu trong G - 5 ngoại lệ.Đây là nhóm tư liệu báo cáo cụ thể hóaBắc Mỹ và châu Âu căng thẳng khu vực 7 người.Cái nàyRT-PCR ở 25 lít hỗn hợp tiến hành phản ứng2 mm clorua magiê,0.2 mm mỗi dNTP E, e 0.4 U / LCác chất ức chế, E - 1 u / L MuLV phiên mã ngược 0.05 U / LTaq DNA polymerase, 0 m mọi tư liệu F và 2 LMẫu.9600 thermocyclere PCR là dùng hệ thống chương trình nghiên cứu tổng hợp của giáp các đô thị: cDNA42 C cho 20 phút, một loại enzyme phiên mã ngược và hoạtThoái hóa của C trong 95 cho 3 phút, 35 một giai đoạn thoái hóa95 C cho 20 giây, Mồi ủ trong 60 C là 15 giây; vàMồi kéo dài trong 72 C cho 20 giây, cuối cùng mở rộng trong 72 C7 phút, giữ ở 4 C thực hiện phát hiện sản phẩm PCRỞ 1.5% agaroseg điện di gel dùng nhuộmBromide