For the construction of nuclear gen

For the construction of nuclear genomic libraries, nuclear-enriched DNA was isolated from 40 g of young fresh leaf tissue.
This was cut in small pieces, soaked for 2 rain in cold diethylether, and ground with a Waring blender homogenizer (5 x 3 s,low speed) in 100 ml of extraction buffer [0.4 M sucrose, 0.05 M
Tris-HC1 pH 8, 2mM CaC12, 0.03% ~ mercaptoethanol (v/v)l.
The resulting suspension was filtered through a 150-pm-mesh nylon net, then through a 48 gm~mesh nylon net, and finally centrifuged for 10min at 400g.
The pellet was gently resuspended in 10 ml of buffer A (0.25 M sucrose, 0.05 M Tris-HCl pH 8, 2 mM CaC12). The solution was carefully layered over 3 vol of a sucrose buffer (2 M sucrose, 0.05 M Tris-HC1 pH 8, 2 mM CaCla) contained in a soft Teflon tube.
Ultracentrifugation was performed in a swing rotor for 45 rain at 30,000 g.
The resulting pellet was dispersed in 10 ml of buffer A with a smooth brush, and the suspension was centrifuged for 10rain at 1,600 g.
All the previous steps were performed at 4 ~ Nucleus enrichment was checked by microscopic examination after DAPI (4',6-diamidino-2-phenyl-indole) staining

Kết quả (Việt) 1:

Xây dựng thư viện hạt nhân gen, ADN hạt nhân làm giàu được phân lập từ 40 g lá tươi trẻ mô.Điều này đã được cắt miếng nhỏ, ngâm cho 2 mưa lạnh dietylête và mặt đất với một homogenizer máy xay sinh tố Waring (5 x 3 s, tốc độ thấp) trong 100 ml của khai thác đệm [0.4 M sucrose, 0,05 MTris-HC1 pH 8, 2mM CaC12, 0,03% ~ l mercaptoethanol (v/v).Đình chỉ kết quả đã được lọc qua một 150-am-lưới nylon net, sau đó thông qua một gm 48 ~ lưới nylon net, và cuối cùng ly cho 10 phút 400 g. Miếng được nhẹ nhàng resuspended trong 10 ml đệm A (0,25 M sucrose, 0,05 M Tris-HCl pH 8, 2 mM CaC12). Các giải pháp đã được cẩn thận tầng trên vol 3 một Sucroza đệm (2 M sucrose, 0,05 M Tris-HC1 pH 8, 2 mM CaCla) chứa đựng trong một ống Teflon mềm. Ultracentrifugation được thực hiện trong một rotor swing cho 45 mưa 30.000 g. Kết quả hạt được phân tán trong 10 ml đệm A với một bàn chải mịn, và hệ thống treo được ly cho 10rain tại 1.600 g. Tất cả các bước trước đó đã được thực hiện tại 4 ~ làm giàu hạt nhân đã được kiểm tra bởi vi kiểm tra sau khi DAPI (4', 6-diamidino-2-phênyl-indole) nhuộm

Kết quả (Việt) 2:

Đối với việc xây dựng thư viện gen hạt nhân, DNA hạt nhân làm giàu đã được phân lập từ 40 g mô lá tươi trẻ.
Điều này đã được cắt ra từng mảnh nhỏ, ngâm trong 2 mưa trong diethyl ether lạnh, và mặt đất với một máy xay sinh tố đồng hóa Waring (5 x 3 s , tốc độ thấp) trong 100 ml dung dịch đệm chiết [0,4 M sucrose, 0,05 M
Tris-HC1 pH 8, 2mm CaC12, 0,03% ~ mercaptoethanol (v / v) l.
Việc đình chỉ kết quả được lọc qua một nylon 150-am-lưới net, sau đó thông qua một 48 gm ~ lưới nylon ròng, và cuối cùng là ly tâm cho 10min tại 400g.
các viên đã nhẹ nhàng lơ lửng trong 10 ml dung dịch đệm A (0,25 M sucrose, 0,05 M Tris-HCl pH 8, 2 mM CaC12). Giải pháp đã được lớp cẩn thận hơn 3 vol của một bộ đệm sucrose (2 M sucrose, 0,05 M Tris-HC1 pH 8, 2 mM CaCla) chứa trong một ống Teflon mềm.
Siêu ly tâm đã được thực hiện trong một cánh quạt xoay 45 mưa ở 30.000 g.
các viên kết quả đã được phân tán trong 10 ml dung dịch đệm A với một bàn chải mịn, và hệ thống treo được ly tâm cho 10rain tại 1.600 g.
Tất cả các bước trước đó đã được thực hiện tại 4 ~ Nucleus làm giàu được kiểm tra bằng kính hiển vi sau DAPI (4 ', 6 -diamidino-2-phenyl-indol) nhuộm