A subset of representative isolates

A subset of representative isolates from the strain
collection was selected for plasmid profiling using a
modified method from Birnboim & Doly (1979). A
cell pellet of 3 mL of overnight LB broth culture was
harvested, washed in STE buffer and resuspended in
250 lL of ice-cold solution of 50 mm glucose,
25 mm Tris and 10 mm EDTA, pH 8.0 containing
10 lg mL)1 RNase A. A further 250 lL of freshly
prepared lysis solution (0.2 N sodium hydroxide
and 1% SDS) at room temperature was added and
mixed by gentle inversion. Next, 250 lL of ice-cold
3 m potassium acetate pH 4.8 solution was added,
mixed well and stored on ice for 5 min. The lysate
was clarified by centrifugation for 10 min and the
supernatant transferred to a new tube. An equal
volume of room temperature isopropanol was added
to the cleared lysate and centrifuged for 10 min. The
DNA pellet was washed in 0.5 mL of 70% ethanol,
air-dried and dissolved overnight in 100 lL ofTE at
4 C before running the samples. Plasmid samples
were stored long term at )20 C. A 0.7% agarose
gel (Gibco) was prepared in fresh 1· TAE buffer
containing 0.25 lg mL)1 ethidium bromide.
Samples of 30 lL of plasmid DNA were run
at 60 V in conjunction with reference plasmid
markers of Escherichia coli strain 39R 861, and
E. coli V517. DNA bands were visualized under UV
illumination.

Kết quả (Việt) 1:

Một tập hợp con của đại diện cô lập từ sự căng thẳng
bộ sưu tập đã được chọn cho plasmid profiling bằng cách sử dụng một
lần phương pháp từ Birnboim & Doly (1979). Một
di động viên 3 ml qua đêm LB canh văn hóa là
thu hoạch, rửa sạch trong bộ đệm STE và resuspended ở
250 lL của các giải pháp lạnh của 50 mm glucose,
25 mm Tris và 10 mm EDTA, pH 8,0 có
10 lg mL) 1 RNase A. Một thêm 250 lL của tươi
chuẩn bị các giải pháp lysis (cách 0.2 N natri hydroxit
và 1% SDS) ở nhiệt độ phòng đã được bổ sung và
phối khí bởi nhẹ nhàng đảo ngược. Tiếp theo, 250 lL băng lạnh
3phút kali axetat pH 4.8 giải pháp đã được bổ sung,
trộn tốt và được lưu trữ trên băng cho 5 phút. Các lysate
được làm rõ bởi số cho 10 phút và các
supernatant chuyển sang một ống mới. Ngang
khối lượng nhiệt độ phòng isopropanol đã được bổ sung
để xóa các lysate và ly cho 10 phút. Các
DNA miếng được rửa sạch trong cách 0.5 mL 70% ethanol,
qua đêm máy sấy khô và hòa tan trong 100 lL ofTE tại
4 C trước khi chạy các mẫu. Plasmid mẫu
đã được lưu trữ dài hạn tại) 20 C. Một agarose 0,7%
gel (Gibco) đã được chuẩn bị trong tươi 1· TAE đệm
có 0,25 lg mL) 1 ethidium bromua.
mẫu của 30 lL plasmid DNA đã được điều hành
tại 60 V kết hợp với tài liệu tham khảo plasmid
đánh dấu Escherichia coli căng 39R 861, và
E. coli V517. Ban nhạc DNA đã hình dung theo UV
chiếu sáng.

Kết quả (Việt) 2:

Một tập hợp con các chủng đại diện của dòng
bộ sưu tập đã được chọn để plasmid hồ sơ sử dụng một
phương pháp sửa đổi từ Birnboim & Doly (1979). Một
viên tế bào của 3 ml đêm LB văn hóa nước thịt được
thu hoạch, rửa sạch trong STE đệm và lơ lửng trong
250 lL các giải pháp băng lạnh 50 mm glucose,
25 mm và 10 mm Tris EDTA, pH 8,0 chứa
10 lg mL) 1 RNase A. Hơn 250 lL tươi của
giải pháp chuẩn bị ly giải (0.2 N sodium hydroxide
và 1% SDS) ở nhiệt độ phòng được thêm vào và
trộn bởi đảo nhẹ nhàng. Tiếp theo, 250 lL băng lạnh
3 m pH kali axetat 4,8 giải pháp đã được thêm vào,
trộn đều và lưu trữ trên băng trong 5 phút. Các lysate
được làm sáng tỏ bằng cách ly tâm trong 10 phút và
nổi chuyển sang một ống mới. Một bằng
khối lượng của nhiệt độ phòng isopropanol được thêm
vào lysate xóa và ly tâm trong 10 phút. Các
viên DNA được rửa trong 0,5 ml dung dịch ethanol 70%,
không khí khô và hòa tan đêm tại 100 sẽ ofte ở
4 ° C trước khi chạy mẫu. Mẫu plasmid
được lưu trữ lâu dài tại) 20 C?. Một agarose 0,7%
gel (Gibco) đã được chuẩn bị tươi 1 · TAE đệm
chứa 0,25 lg mL) 1 ethidium bromide.
Mẫu 30 lL của DNA plasmid được chạy
với tốc độ 60 V kết hợp với các tài liệu tham khảo plasmid
dấu hiệu của Escherichia coli chủng 39R 861, và
E. coli V517. Ban nhạc DNA được hình dung dưới tia cực tím
chiếu sáng.