Portuguese patients.H. pylori was c

Portuguese patients.H. pylori was cultured from specimens from 20 of these
patients, who had duodenal ulcer disease. The remaining 15 biopsy specimens
were from patients with functional dyspepsia and were not used for culture but
were used directly for PCR. Surgical specimens were obtained from 20 consecutive Portuguese patients with gastric carcinoma and were processed directly for
PCR.
Biopsy specimens were transported in Portagerm medium (BioMe´rieux,
Marcy l’Etoile, France) and were stored at 270°C. In all cases parallel biopsy
specimens were processed for routine histopathological examination and/or the
CLO test (Delta-West, Bentley, Australia).
Culture of H. pylori from gastric biopsy specimens.Gastric biopsy specimens
were collected from the transport medium and were plated onto agar medium
(Gelose; BioMe´rieux), and the plates were incubated at 35°C under micro aerobic
conditions (5% O2, 15% CO
2, 80% N
2
) for 5 days.
Isolates of H. pyloriwere identified by Gram staining as well as by oxidase,
catalase, urease, gamma-glutamyltransferase, and nitrate reductase reactions
(Rapidec pylori; BioMe´rieux) and were stored at270°C in Trypticase soy broth
containing 15% glycerol.
DNA isolation.DNA was isolated from the cultured bacteria by harvesting
cells from a plate in phosphate-buffered saline followed by centrifugation. The
pelleted cells were resuspended in 200ml of proteinase K solution (10 mM
Tris-HCl [pH 7.8], 5 mM EDTA, 0.5% sodium dodecyl sulfate [SDS], 50 mg of
proteinase K per ml), and the mixture was incubated at 55°C for 30 min. The
DNA was extracted with phenol-chloroform-isoamyl alcohol by standard procedures (26). DNA was precipitated by the addition of 1/10 volume of 3 M sodium
acetate (pH 5.2) and 2 volumes of ethanol. After centrifugation, the DNA pellet
was washed with 70% ethanol and was dissolved in 50ml of TE buffer (10 mM
Tris-HCl [pH 8.3], 0.1 mM EDTA).
Gastric biopsy specimens were homogenized in 200ml of proteinase K solution
with a sterile micropestle (Eppendorf, Hamburg, Germany). DNA was isolated
from the homogenate by the same protocol described above for the cultured
isolates.
PCRs.PCRs were performed in a volume of 100ml containing 10 mM TrisHCl [pH 9.0], 50 mM KCl, 2.5 mM MgCl2, 0.01% gelatin, 0.1% Triton X-100, a
200mM concentration of the deoxynucleoside triphosphates, 0.25 U of SuperTaq
(SphaeroQ, Leiden, The Netherlands), and 10 to 50 pmol of both forward and
reverse primers. The reaction mixtures were covered with mineral oil, and PCR
was performed in a BioMed-60 thermocycler, comprising 2 min of preincubation
at 95°C, followed by 40 cycles of 1 min at 95°C, 1 min at 50°C, and 1 min at 74°C.
Final extension was performed for 5 min at 74°C.vacAtyping with allele-specific
PCR primers was performed as described earlier (3). PCR products were visualized by electrophoresis on 2% agarose gels by standard procedures (26).
PCR primers.For analysis of thevacAs region, the following primers were
used for PCR (see also Table 1 and Fig. 1). Primers VA1F and VA1R have been
described earlier (3) and generate a fragment of 259 bp for s1a/b variants and a

Kết quả (Việt) 1:

Bệnh nhân Bồ Đào Nha. H. pylori được nuôi cấy từ mẫu từ 20 số nàybệnh nhân có bệnh loét tá tràng. Còn lại 15 làm sinh thiết mẫutừ các bệnh nhân với chức năng khó tiêu và không được sử dụng cho nền văn hóa nhưngđược sử dụng trực tiếp cho Đảng Cộng sản Romania. Phẫu thuật mẫu vật được thu được từ 20 liên tiếp tiếng Bồ Đào Nha với bệnh nhân ung thư dạ dày và đã được xử lý trực tiếpĐẢNG CỘNG SẢN ROMANIA.Làm sinh thiết mẫu được vận chuyển trong môi trường Portagerm (BioMe´rieux,Marcy l'Etoile, Pháp) và được lưu trữ ở 270 ° C. Trong mọi trường hợp song song sinh thiếtmẫu vật đã được xử lý để thường xuyên kiểm tra histopathological và/hoặc cácCLO test (Delta-Tây, Bentley, Úc).Văn hóa của H. pylori từ dạ dày làm sinh thiết mẫu vật. Dạ dày làm sinh thiết mẫuđược thu thập từ các phương tiện vận tải và được mạ lên agar vừa(Gelose; BioMe´rieux), và các tấm được ủ tại 35 ° C dưới vi aerobicđiều kiện (5% O2, 15% CO2, 80% N2) cho 5 ngày.Cô lập của H. pyloriwere xác định được gam nhuộm cũng như oxidase,catalase, urease, gamma-glutamyltransferase và nitrate reductase phản ứng(Rapidec pylori; BioMe´rieux) và đã được lưu trữ at270 ° C trong Trypticase đậu nành canhchứa 15% nhóm glycerol.ADN bị cô lập. DNA được cô lập từ nuôi cấy vi khuẩn bằng cách thu hoạchCác tế bào từ một tấm đệm phosphate saline theo số. Cácpelleted các tế bào đã được resuspended trong 200ml proteinase K giải pháp (10 mMTris-HCl [pH 7.8], 5 mM EDTA, 0,5% natri dodecyl sulfat [SDS], 50 mgProteinase K mỗi ml), và hỗn hợp được ủ tại 55 ° C cho 30 min. trongDNA được chiết xuất với phenol-chloroform-isoamyl rượu bằng quy trình chuẩn (26). DNA được kết tủa bằng cách bổ sung lượng 1/10, 3 M natriaxetat (pH 5.2) và 2 tập ethanol. Sau khi số, miếng DNAđược rửa sạch với 70% ethanol và giải tán năm 50ml TE đệm (10 mMTris-HCl [pH 8.3], 0,1 mM EDTA).Dạ dày làm sinh thiết mẫu được homogenized trong 200ml proteinase K giải phápvới một micropestle vô trùng (Eppendorf, Hamburg, Đức). ADN bị cô lậptừ homogenate bởi cùng một giao thức được mô tả ở trên cho việc nuôi cấycô lập.PCRs.PCRs đã được thực hiện trong một tập của 100ml có chứa 10 mM TrisHCl [pH 9.0], 50 mM KCl, 2.5 mM MgCl2, 0,01% gelatin, 0,1% Triton X-100, một200mM nồng độ của triphosphates deoxynucleoside, 0,25 U của SuperTaq(SphaeroQ, Leiden, Hà Lan), và 10-50 pmol của cả hai phía trước vàngược lại lớp lót. Hỗn hợp phản ứng đã được bao phủ với dầu khoáng sản và các đảng Cộng sản Romaniađã được thực hiện trong một thermocycler BioMed-60, bao gồm 2 phút preincubation95° c, tiếp theo các chu kỳ 40 của 1 phút 95° c, 1 phút tại 50° C, và 1 phút 74° c.Tiện ích mở rộng cuối cùng được thực hiện trong 5 phút tại 74°C.vacAtyping với alen cụ thểChất nền, mồi PCR được thực hiện như mô tả trước đó (3). Sản phẩm PCR được hình dung bởi electrophoresis trên gel agarose 2% bởi thủ tục tiêu chuẩn (26).Lớp lót PCR. Đối với phân tích của vùng thevacAs, lớp lót sau đây đãđược sử dụng cho Đảng Cộng sản Romania (xem bảng 1 và hình 1). Chất nền, mồi VA1F và VA1R đãMô tả trước đó (3) và tạo ra một mảnh của 259 bp cho s1a/b biến thể và một

Kết quả (Việt) 2:

Patients.H Bồ Đào Nha. pylori được nuôi từ các mẫu vật từ 20 của các
bệnh nhân, những người có bệnh loét dạ dày tá tràng. Còn lại 15 mẫu sinh thiết
là từ các bệnh nhân với chứng khó tiêu chức năng và không được sử dụng cho văn hóa, nhưng
đã được sử dụng trực tiếp cho PCR. Mẫu phẫu thuật được lấy từ 20 bệnh nhân Bồ Đào Nha liên tiếp với ung thư dạ dày và đã được xử lý trực tiếp cho
PCR.
Mẫu sinh thiết bị vận chuyển trong Portagerm trung bình (BioMe'rieux,
Marcy l'Etoile, Pháp) và được lưu trữ ở 270 ° C. Trong tất cả các trường hợp sinh thiết song song
mẫu được xử lý để kiểm tra mô bệnh học thường xuyên và / hoặc
kiểm tra CLO (Delta-Tây, Bentley, Úc).
Văn hóa của H. pylori từ sinh thiết dạ dày specimens.Gastric mẫu sinh thiết
được thu thập từ các phương tiện vận chuyển và được mạ vào môi trường thạch
(Gelose; BioMe'rieux), và các tấm được ủ ở 35 ° C dưới hiếu khí vi
điều kiện (5% O2, 15% CO
2, 80% N
2
) trong 5 ngày.
các chủng H. pyloriwere xác định bởi nhuộm gram cũng như bởi oxidase,
catalase, urease, gamma-glutamyltransferase, và khử nitrat phản ứng
(Rapidec pylori; BioMe'rieux) và được lưu trữ at270 ° C trong nước dùng đậu nành Trypticase
chứa 15% glycerol.
DNA isolation.DNA được phân lập từ các vi khuẩn được nuôi cấy bằng cách thu được
tế bào từ một tấm trong nước muối đệm phosphat sau ly tâm. Các
tế bào ăn viên được lơ lửng trong 200ml proteinase giải pháp K (10 mM
Tris-HCl [pH 7,8], 5 mM EDTA, 0,5% sodium dodecyl sulfate [SDS], 50 mg
proteinase K mỗi ml), và hỗn hợp được ủ ở 55 ° C trong 30 phút. Các
DNA được chiết xuất với rượu phenol-chloroform-isoamyl bởi các thủ tục chuẩn (26). DNA đã bị kết tủa bởi việc bổ sung 1/10 khối lượng của 3 M sodium
acetate (pH 5.2) và 2 tập của ethanol. Sau khi ly tâm, viên DNA
đã được rửa sạch với 70% ethanol và được hòa tan trong 50ml đệm TE (10 mM
Tris-HCl [pH 8,3], 0,1 mM EDTA).
Mẫu sinh thiết dạ dày đã được đồng nhất trong 200ml proteinase giải pháp K
với vô trùng micropestle (Eppendorf, Hamburg, Đức). DNA được phân lập
từ các đồng chất của cùng một giao thức được mô tả ở trên cho nuôi cấy
phân lập.
PCRs.PCRs được thực hiện trong một thể tích 100ml chứa 10 mM TrisHCl [pH 9.0], 50 mM KCl, 2,5 mM MgCl 2, 0,01% gelatin, 0,1% Triton X-100, một
nồng độ 200mm của triphosphate deoxynucleoside, 0,25 U của SuperTaq
(SphaeroQ, Leiden, Hà Lan), và 10 đến 50 pmol của cả hai phía trước và
ngược mồi. Các hỗn hợp phản ứng được bao phủ bằng dầu khoáng, và PCR
được thực hiện trong một BioMed-60 thermocycler, gồm 2 phút của preincubation
ở 95 ° C, tiếp theo là 40 chu kỳ của 1 phút ở 95 ° C, 1 phút ở 50 ° C, và 1 phút ở 74 ° C.
mở rộng cuối cùng đã được thực hiện trong 5 phút ở 74 ° C.vacAtyping với alen cụ thể
mồi PCR được thực hiện như mô tả trước đây (3). Sản phẩm PCR được hình dung bằng điện di trên 2% gel agarose bởi các thủ tục chuẩn (26).
PCR primers.For phân tích của khu vực thevacAs, mồi sau đây đã được
sử dụng cho PCR (xem Bảng 1 và Hình. 1). Chất mồi VA1F và VA1R đã được
mô tả trước đây (3) và tạo ra một đoạn 259 bp cho S1A biến b / và một