2.1.1 anthraquinon Một gam mỗi mẫu trà được lắc với 10ml dung dịch clorua sắt với 5ml acid hydrochloric (HCl). Mỗi hỗn hợp được nung nóng trong một cốc nước cho 10-15min, lọc và để nguội. Dịch lọc được chiết với chloroform và lắc nhẹ nhàng. Các lớp rõ ràng tại cơ sở là pipette vào ống nghiệm và 2ml mỗi amoniac sulphate thêm. Một sự quan sát của một màu hồng hồng tinh tế chỉ ra sự hiện diện của anthraquinon.
2.1.2 cardenolides Bốn gam mỗi mẫu được chiết xuất trong ống nghiệm với 80% ethanol, và ghi nhãn phù hợp. Họ được chia thành hai phần để kiểm tra Kedde và kiểm tra Keler-Killian của. Đối với thử nghiệm của Kedde, vài giọt 10% chì acetate được thêm vào mỗi ống, tiếp theo là vài giọt nước cất và chloroform. Các nội dung này đã bốc hơi đến khô trong một cốc nước. 5% sodium hydroxide được thêm vào mỗi cặn và sau đó 2% axit dinitrobenzene 3-5. Đối với thử nghiệm Keller-Killian của, vài giọt 10% chì acetate, nước và chloroform đã được thêm vào mỗi mẫu thử nghiệm. Hỗn hợp này được làm bay hơi đến khô trong bồn tắm nước và sau đó một vài giọt axit sulphulic tập trung đã được thêm vào. Đối với thử nghiệm Keller-Keillan, một chiếc nhẫn màu nâu chỉ ra sự hiện diện của cardenolides, trong khi đối với thử nghiệm Keddi của một màu nâu sang màu tím là biểu hiện của cardenolides.
2.1.3 Phenolics Để 2ml cồn hoặc dung dịch chiết xuất trà, 1ml 1%, dung dịch sắt clorua là thêm vào. Hình thành màu xanh hoặc màu xanh lá cây là một dấu hiệu của phenol.
2.1.4 Flavinoids 2g trà được chiết xuất trong 10ml rượu hoặc nước. Đến 2 ml dịch lọc vài giọt axit clohiđric đậm đặc (HCl) tiếp theo là 0,5g kẽm hoặc magiê phoi tiện đã được bổ sung. Sau khi 3min đỏ tươi hoặc hình thành màu hồng chỉ ra sự hiện diện của chất flavonoid.
2.1.5 tecpen đến 2 ml dung dịch nước chiết xuất, chloroform 5mg, 2ml anhydride acetic, tập trung HCL đã được thêm vào một cách cẩn thận để tạo thành một lớp. Màu Redish nâu của giao diện là một dấu hiệu của tecpen.
2.1.6 tim Glycosides đến 2 ml dịch lọc cồn, 1ml axit axetic và 1-2 giọt sắt clorua được thêm vào sau đó 1ml axit sulphulic tập trung. Một sự hiện diện của chiếc nhẫn màu nâu ở giao diện chỉ ra sự hiện diện của glycosid tim. Một chiếc nhẫn màu tím cũng có thể xuất hiện bên dưới các vòng màu nâu.
2.1.7 Saponin 5ml của mỗi nhà máy chiết xuất đã được đặt vào một ống nghiệm và pha loãng với 5ml nước cất. Hỗn hợp được lắc mạnh trong 2min.Persistent xuất hiện của bọt lâu dài cho 5min hoặc sự hình thành nhũ tương khi dầu ô liu đã được bổ sung xác nhận sự hiện diện của sponins.
2.1.8 Các alkaloid chiết xuất trà (2g) đã được thủy phân bằng axit hydrochloric 2ml (HCl) giải pháp bằng cách đun nóng trong bồn tắm nước trong 10 phút, để nguội và 5ml dịch lọc được cho phản ứng với một vài giọt thuốc thử Wagner của Dragendoff của Mayer, alkaloid đã được ghi lại như hiện nay trong mẫu nếu độ đục hoặc kết tủa nâu đã được quan sát.
2.2 Antimicrobial Screening Bốn con người vi khuẩn gây bệnh làm bằng hai Staphylococcus aureus và Streptococcus faecalis gram dương và hai Salmonella typhimurium gram âm và Escherichia coli đã được sử dụng để khảo nghiệm kháng khuẩn. Một nấm men Candida albicans đã được sử dụng để khảo nghiệm kháng nấm. Tất cả các sinh vật được phân lập tại địa phương từ vi khuẩn trong phòng thí nghiệm
202
chứng khoán của Sở Vi sinh Y tế, JKUAT, Kenya. Ba đến năm thuộc địa giống hệt nhau từ dốc lưu trữ của các vi sinh vật đã được nâng lên với một vòng dây vô trùng và chuyển vào một canh dinh dưỡng sức mạnh duy nhất (sigma) chứa trong một được dán nhãn chai nắp vặn cho từng loại vi khuẩn và nấm tương ứng. Các chai được lắc đều và ủ ở nhiệt độ phòng trong 18-24 giờ đối với vi khuẩn và 72 giờ cho nấm. Các phương pháp khuếch tán cũng agar được sử dụng để thử nghiệm các chiết xuất trà cho hoạt động kháng khuẩn. Một thời gian ngắn 15ml thạch nóng chảy và làm mát bằng chất dinh dưỡng (Sigma Laboratories, USA) và môi trường thạch đường khoai tây (Sigma Laboratories, USA) đã được thêm vào 0.2ml ở 100 độ pha loãng của vi khuẩn và nấm nền văn hóa tương ứng trong đĩa petri vô trùng. Các nội dung đã được pha trộn sau khi gar trong mỗi tấm kiên cố, 6 giếng 5mm mỗi bị bó trong mỗi tấm bằng tip pipet vô trùng. 0.1ml của chiết xuất trà ở các nồng độ khác nhau (50mgml-1, 100mgml-1, 200mgml-1, và 400mgml-1) cũng như các giải pháp kháng sinh tiêu chuẩn đã được nạp vào các giếng. Thí nghiệm kiểm soát đã được thiết lập bằng cách sử dụng streptomycin và cefadroxil (4mgml-1) cho các vi khuẩn và các xét nghiệm nấm. Các tấm được ủ ở 37oC trong 24 giờ cho vi khuẩn và nấm 48hr.
Tất cả các thủ tục tiêm phòng đã được thực hiện trong điều kiện vô trùng. Các nghiên cứu kháng sinh đã được thực hiện trong ba lần. Với sự trợ giúp của một người cai trị trong suốt đường kính của vùng ức chế xung quanh giếng được đo bằng mm cho tất cả ba lần nhắc lại, với mức trung bình của ba phép đo được tính như một dấu hiệu của hoạt động. Các kết quả đã được giải thích theo kỹ thuật Kirby-Baur sửa đổi. Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của chất chiết xuất từ trà đã được xác định bằng cách sử dụng phương pháp pha loãng nước dùng như mô tả của Salon và Washington (1990). Một thời gian ngắn 1ml dung dịch chiết xuất với nồng độ 400mgml-1 đã được bổ sung TO1 ml nước dùng chất dinh dưỡng và sau đó chuyển giao cho làm cho giải pháp của nồng độ khác nhau (400mgml-1 200mgml, 100mgml-150mgml-1) trong ống nghiệm khác nhau. Các 1ml của hệ thống treo và 1ml chiết xuất ở các nồng độ khác nhau vi khuẩn và nấm đã được thêm vào mỗi ống nghiệm và ủ ở 370C trong 24 giờ đối với vi khuẩn và 48hr cho nấm. Các ống nghiệm với nồng độ của chiết xuất trà mà không có tăng trưởng phát hiện đã quan sát được coi là MIC.
2.3 thống kê phân tích dữ liệu thu được từ khu đường kính của sự ức chế đã phải chịu ANOVA. Phân tích sâu hơn của các chất chiết xuất từ trà để đánh giá sự biến đổi của đường kính đĩa cho thấy các chất chiết xuất từ trà thô đã có một hoạt động có sự thay đổi lớn về sự ức chế các vi sinh vật (Bảng 3). Có sự khác biệt đáng kể (P <0,05). Những điều đó đã không thấy hoạt động có đường kính đĩa nhỏ hơn 3mm. Vì vậy, trong hoạt động ức chế, bảng 3 cho thấy các hoạt động biến thể ức chế các vi sinh vật vì chúng cho thấy tính nhạy cảm với các chất chiết xuất từ trà trừ Salmonella typhimurium và Candida albicans mà không dễ bị trà chính thống.
3.0 Kết quả Kết quả của việc sàng lọc phytochemical của các mẫu trà được trình bày trong Bảng 2. Các chất chuyển hoá thứ cấp thử nghiệm wereAlkaloids, Saponin, phenol, Tannin, anthraquinon, cardenolides, tecpen, Flavinoids và Cardiac glycoside. Các kết quả cho thấy alkaloid, saponin, phenol, Tannin, anthraquinon, cardenolides, tecpen, Flavinoids và Cardiac glycoside có mặt trong tất cả các chiết xuất ngoại trừ trong trà xanh. Cardenolides đang hiện diện trong trà xanh và đen nhưng vắng mặt trong trà chính thống. Phenolics vắng mặt trong trà chính thống nhưng trong chè xanh và đen. Các kết quả của việc sàng lọc kháng khuẩn của các chất chiết xuất từ trà dung dịch nước được thể hiện trong Bảng 3, trong khi nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của mỗi giải nén được trình bày trong bảng 4. Các chất chiết xuất từ trà đã được tìm thấy có hiệu quả hơn trong vi khuẩn thử nghiệm hơn là họ trên nấm. Chiết xuất từ trà xanh và chính thống cho thấy sự ức chế quan trọng của Salmonella typhimurium và vi khuẩn gram dương coli Escherichia ở nồng độ 200 và 400mgml-1. Tất cả các chất chiết xuất từ trà có hoạt tính chống Staphylococcus aureus và Streptococcus vi khuẩn faecalisgram âm và chỉ chiết xuất trà đen là hoạt động chống lại Candida albicans (một loại nấm) với đường kính của vùng ức chế 4.02mm và MIC của 100mgml-1. 203 Bảng 1: thông tin mẫu chè nghiên cứu Tên Địa phương chè Orthodox Status Collection lên men chè xanh Kangaita Non-men Kangaita bán lên men chè đen Murang'a lên men Bảng 2: thành phần Phytochemical chiết thô của mẫu trà trà xanh trà chè đen Orthodox Phenolics + - + Flavonoids + + + tecpen + + + Cardia glycosides + + + cardenolides + - + anthraquinon - + + alkaloids + + + Saponin + + + + Sự hiện diện của các chất chuyển hóa thứ cấp - Sự vắng mặt của chất chuyển hóa thứ cấp Bảng 3: hoạt động kháng khuẩn của dầu thô chiết xuất từ trà trà xanh, trà đen Orthodox và trà chiết xuất trà Conc. mgml-1 Staph aureus Escherichia Coli. Salmonella typhim Streptococcus faecolis albicans Cadida trà xanh 50 100 200 400 - 10 ± 0,0 15 ± 0,0 20 ± 0.0 - - 14 ± 0,0 18 ± 0.0 - - 5 ± 0,0 18 ± 0.0 - 12.0 ± 00 14,0 ± 00 15,0 ± 00 - - 1 ± 0.0 1 ± 0,4 Orthodox trà 50 100 200 400 - - 4 ± 0,2 8 ± 0,0 - - 6 ± 0,0 14 ± 0.0 - - - - - 10 ± 0,0 12 ± 0.0 - - - - Chè đen (Murang'a) 50 100 200 400 - - 6,5 ± 0,0 7,4 ± 0,2 - - 3,5 ± 0,0 14 ± 0,0 - 1 ± 0,0 ± 0,0 3 4 ± 0,0 - 2 ± 0,0 ± 5 0.0 6 ± 0,2 - 4 ± .002 6 ± 0.01 ± 0.01 9 Streptomycin 4.0mg / ml 20 ± 0,0 10 ± 0,0 15 ± 0,0 10 ± 0,0 25 ± 0.0 Cefadoxil 4.0mg / ml 20 ± 0,0 20 ± 0,0 20 ± 0,0 20 ± 0,0 10 ± 0.0 - Sự vắng mặt của hoạt động kháng khuẩn chữ số Ả Rập - đường kính ức chế trong mm 204 Bảng 4: Nồng độ ức chế tối thiểu của chất chiết xuất từ dung dịch nước trà trên chọn vi sinh vật chiết xuất trà Conc. mgml-1 Staph aureus Escherichia Coli Salmonella typhimurium Streptococcus faecolis Cadida albicans Trà xanh 400 200 150 100 50 25 - - - - + + - - - + + + - - + + + + - - - - + + - - - + + + Chính Thống trà 400 200 150 100 50 25 - - - - + + - - - + + + - - + + + + - - - - + + + + + + + + Chè đen (Murang'a) 400 200 150 100 50 25 - - - - + + - - - + + + + + + + + + - - - - + + - - - - + + - Không tăng trưởng quan sát + Tăng trưởng quan sát 4,0 Thảo luận và Kết luận Sự hiện diện của các chất chuyển hóa thứ cấp ( alkaloids, tecpen, saponin, tannin, flavonoid, glycosid tim, cardenolides anthroquinones và phenol) trong trà phần tăng cường các hoạt động kháng khuẩn và chống ký sinh trùng của trà xanh, đen và chính thống. Mặc dù sự hiện diện của các chất chuyển hóa thứ cấp tương tự như ma
đang được dịch, vui lòng đợi..
