Carry out the method for thin-layer

Carry out the method for thin-layer chromatography, Appendix III A, using the following solutions.

 (1) Extract 15 powdered tablets with 30 mL of acetone, filter, evaporate to dryness and dissolve the residue in 1 mL of chloroform.

 (2) 0.075% w/v of levonorgestrel BPCRS in chloroform.

 (3) 0.045% w/v of ethinylestradiol BPCRS in chloroform.

CHROMATOGRAPHIC CONDITIONS

 (a) Use as the coating silica gel GF254.

 (b) Use the mobile phase as described below.

 (c) Apply 20 µL of each solution.

 (d) Develop the plate to 15 cm. Develop the chromatograms twice, drying the plates between developments.

 (e) After removal of the plate, dry in air and examine under ultraviolet light (254 nm).

 (f) Spray the plate with a 2% w/v solution of toluene-p-sulfonic acid in water and heat at 105° for 10 minutes and examine under ultraviolet light (365 nm).

MOBILE PHASE

1 volume of methanol and 99 volumes of chloroform.

CONFIRMATION

By the first method of visualisation:

one of the principal spots in the chromatogram obtained with solution (1) corresponds to that in the chromatogram obtained with solution (2) and the other principal spot corresponds to that in the chromatogram obtained with solution (3).

By the second method of visualisation:

the spots corresponding to levonorgestrel and ethinylestradiol appear as blue spots.

Uniformity of content

Prepare the following stock solutions using a mixture of 40 volumes of water and 60 volumes of acetonitrile.

 Solution A 0.0625% w/v of levonorgestrel BPCRS.

 Solution B 0.025% of ethinylestradiol BPCRS.

 Solution C 0.020% w/v of 2-hydroxybiphenyl (internal standard).

 Solution D Dilute 1 mL of solution C to 20 mL with the solvent mixture.

Tablets containing less than 2 mg and/or less than 2% w/w of Levonorgestrel or less than 2 mg and/or less than 2% w/w of Ethinylestradiol comply with the requirements stated under Tablets using the following method of analysis. Carry out the method for liquid chromatography, Appendix III D, using the following solutions.

 (1) Add 4 mL of solution D to one tablet, heat at 60° in an ultrasonic bath for 25 minutes, shake and repeat the ultrasound treatment. Cool, centrifuge and use the clear supernatant liquid.

 (2) Mix the volumes of solutions A and B specified in the table with 5 mL of solution C and dilute to 100 mL with a mixture of 40 volumes of water and 60 volumes of acetonitrile.



[bitmap]












CHROMATOGRAPHIC CONDITIONS

 (a) Use a stainless steel column (15 cm × 4.6 mm) packed with octadecylsilyl silica gel for chromatography (5 µm) (Hypersil ODS is suitable).

 (b) Use isocratic elution and the mobile phase described below.

 (c) Use a flow rate of 1.5 mL per minute.

 (d) Use an ambient column temperature.

 (e) Use a detection wavelength of 215 nm.

 (f) Inject 20 µL of each solution.

MOBILE PHASE

49 volumes of acetonitrile and 51 volumes of water.

Kết quả (Việt) 1:

Thực hiện phương pháp cho sắc kí lớp mỏng, phụ lục A III, bằng cách sử dụng các giải pháp sau. (1) giải nén 15 bột viên nén với 30 mL axeton, lọc, bốc hơi để khô và hòa tan dư trong 1 mL của cloroform. (2) 0,075% w/v của levonorgestrel BPCRS trong cloroform. (3) 0.045% w/v của ethinylestradiol BPCRS trong cloroform. CHROMATOGRAPHIC ĐIỀU KIỆN (a) sử dụng như là lớp phủ silica gel GF254. (b) sử dụng giai đoạn di động như mô tả dưới đây. (c) áp dụng 20 ml của mỗi giải pháp. (d) phát triển các tấm để 15 cm. phát triển chromatograms hai lần, làm khô các tấm giữa phát triển. (e) sau khi loại bỏ các tấm, khô trong không khí và kiểm tra dưới tia cực tím (254 nm). (f) phun các tấm với một giải pháp w/v 2% toluene-p-sulfonic axit trong nước và nhiệt 105 ° trong 10 phút và kiểm tra dưới tia cực tím (365 nm). ĐIỆN THOẠI DI ĐỘNG GIAI ĐOẠN 1 khối lượng methanol và các khối lượng 99 của cloroform. XÁC NHẬN Phương pháp đầu tiên của trực quan: một trong những điểm chính trong chromatogram thu được với giải pháp (1) tương ứng với mà ở chromatogram thu được với giải pháp (2) và vị trí chính tương ứng cho rằng trong chromatogram thu được với giải pháp (3). Phương pháp thứ hai của visualisation: những điểm tương ứng với levonorgestrel và ethinylestradiol xuất hiện như là màu xanh điểm. Tính đồng nhất của nội dung Chuẩn bị các giải pháp chứng khoán sau bằng cách sử dụng một hỗn hợp của các khối lượng 40 nước và các khối lượng 60 của acetonitrile. Giải pháp A 0.0625% w/v của levonorgestrel BPCRS. Giải pháp B 0.025% của ethinylestradiol BPCRS. Giải pháp C 0.020% w/v của 2-hydroxybiphenyl (tiêu chuẩn nội bộ). Giải pháp D Dilute 1 mL của giải pháp C đến 20 mL với hỗn hợp dung môi. Viên nén có chứa ít hơn 2 mg và/hoặc ít hơn 2% w/w Levonorgestrel hoặc ít hơn 2 mg và/hoặc ít hơn 2% w/w của Ethinylestradiol thực hiện theo các yêu cầu nêu dưới viên nén bằng cách sử dụng sau phương pháp phân tích. Thực hiện phương pháp sắc ký lỏng, phụ lục III D, bằng cách sử dụng các giải pháp sau. (1) thêm 4 mL của giải pháp D vào một viên thuốc, nhiệt ở 60° trong một bồn tắm siêu âm 25 phút, lắc và lặp lại điều trị siêu âm. Mát mẻ, Máy ly tâm và sử dụng chất lỏng rõ ràng supernatant. (2) kết hợp các khối lượng của giải pháp A và B được chỉ định trong bảng với 5 mL giải pháp C và pha loãng đến 100 mL với một hỗn hợp của các khối lượng 40 nước và các khối lượng 60 của acetonitrile. [ảnh bitmap] CHROMATOGRAPHIC ĐIỀU KIỆN (a) sử dụng một cột thép không gỉ (15 cm x 4.6 mm) đóng gói với octadecylsilyl silica gel cho sắc kí (5 μm) (Hypersil ODS là thích hợp). (b) sử dụng isocratic elution và điện thoại di động giai đoạn mô tả dưới đây. (c) sử dụng một tốc độ dòng chảy của 1.5 mL / phút. (d) sử dụng một nhiệt độ môi trường xung quanh cột. (e) sử dụng một bước sóng phát hiện của 215 nm. (f) tiêm 20 ml mỗi giải pháp. ĐIỆN THOẠI DI ĐỘNG GIAI ĐOẠN 49 khối lượng của acetonitrile và 51 tập của nước.

Kết quả (Việt) 2:

Thực hiện các phương pháp sắc ký lớp mỏng, Phụ lục III A, sử dụng các giải pháp sau đây.  (1) Giải nén 15 viên thuốc bột với 30 ml acetone, lọc, bay hơi đến khô và hòa tan cắn trong 1 ml cloroform.  (2) 0,075% w / v của BPCRS levonorgestrel trong chloroform.  (3) 0,045% w / v của BPCRS ethinylestradiol trong chloroform. ĐIỀU KIỆN sắc ký  (a) Sử dụng như là GF254 gel lớp phủ silica.  (b) Sử dụng các pha động như mô tả dưới đây.  ( c) Áp dụng 20 ml mỗi dung dịch trên.  (d) Phát triển các tấm đến 15 cm. Phát triển sắc ký hai lần, làm khô tấm giữa phát triển.  (E) Sau khi loại bỏ các tấm, khô trong không khí và kiểm tra dưới ánh sáng cực tím (254 nm).  (F) Phun tấm với 2% w / v giải pháp của toluene- p-sulfonic acid trong nước và nhiệt ở 105 ° trong 10 phút và kiểm tra dưới ánh sáng cực tím (365 nm). MOBILE GIAI ĐOẠN 1 thể tích methanol và 99 khối lượng của chloroform. CONFIRMATION Bằng các phương pháp đầu tiên hình dung: một trong những điểm yếu trong Trên sắc ký đồ của dung dịch (1) tương ứng mà trong sắc ký đồ của dung dịch (2) và điểm yếu khác tương ứng với trên sắc ký đồ của dung dịch (3). Bằng các phương pháp thứ hai của trực quan: các điểm tương ứng với levonorgestrel và ethinylestradiol xuất hiện như những đốm màu xanh. Tính thống nhất của nội dung chuẩn bị các giải pháp chứng khoán sau đây bằng cách sử dụng một hỗn hợp của 40 thể tích nước và 60 khối lượng của acetonitrile.  Một giải pháp 0,0625% w / v của BPCRS levonorgestrel.  Giải pháp B 0,025% của BPCRS ethinylestradiol.  Giải pháp: C 0,020% w / v 2-hydroxybiphenyl (tiêu chuẩn nội bộ).  Giải pháp D: Pha loãng 1 ml dung dịch C đến 20 ml với hỗn hợp dung môi. Tablets chứa dưới 2 mg và / hoặc ít hơn 2% w / w của Levonorgestrel hoặc ít hơn hơn 2 mg và / hoặc ít hơn 2% w / w của Ethinylestradiol tuân thủ các yêu cầu nêu dưới Tablets sử dụng các phương pháp sau đây phân tích. Thực hiện các phương pháp sắc ký lỏng, Phụ lục III D, sử dụng các giải pháp sau đây.  (1) Thêm 4 ml dung dịch D cho một viên thuốc, nhiệt ở 60 ° trong một bồn tắm siêu âm trong 25 phút, lắc và lặp lại các điều trị siêu âm. Cool, máy ly tâm và sử dụng các chất lỏng nổi trên bề rõ ràng.  (2) Trộn khối lượng của dung dịch A và B được quy định trong bảng với 5 ml dung dịch C và pha loãng thành 100 ml bằng hỗn hợp 40 phần thể tích nước và 60 khối lượng của acetonitrile. [bitmap] ĐIỀU KIỆN sắc ký  (a) Sử dụng một cột thép không gỉ (15 cm x 4,6 mm) được đóng gói với gel octadecylsilyl silica cho sắc ký (5 micron) (Hypersil ODS là thích hợp).  (b) Sử dụng rửa giải isocratic và pha động được mô tả dưới đây .  (c) Sử dụng một tốc độ dòng chảy 1,5 ml mỗi phút.  (d) Sử dụng một nhiệt độ cột môi trường xung quanh.  (e) Sử dụng một bước sóng phát hiện 215 nm.  (f) Tiêm 20 ml mỗi dung dịch trên. PHASE MOBILE 49 khối lượng của acetonitrile và 51 thể tích nước.