Genotypic identification of ESBLsPr

Genotypic identification of ESBLs
Preparation of DNA template
The DNA template for K. pneumonia was prepared from freshly cultured isolates by suspending 3-5 colonies from the plate in 500 μl of transposon buffer and boiling it for 10 min. After boiling, the samples were cooled at -20°C for 5 min before centrifuging at 10,000 rpm for 10 min (Amjad et al, 2011).
Genotypic detection of bla genes by PCR
The supernatant obtained was used as the DNA template in polymerase chain reaction(PCR) analysis. The strains were documented as ESBL by molecular detection of blaSHV, blaVEB, blaPER by PCR. The primers used for the detection of these genes are shown in Table 1.
PCR was performed in 30 μl mixture of 3 μl 10X buffer, 1 μl of 10 mM MgCl2, and 0.25 μl of 5 U/μl Taq DNA polymerase (Fermentas, Lithuania), 0.5μleach of 10 mM deoxynucleaotide triphosphates, 1 μl each of 10 μM primers and 5 μl of plasmid extract in a thermal cycler (Kyratec, Korea).

Kết quả (Việt) 1:

Xác định genotypic ESBLsChuẩn bị các mẫu DNACác mẫu DNA cho K. viêm phổi đã được chuẩn bị từ tươi nuôi cấy các chủng đình chỉ 3-5 thuộc địa từ các tấm 500 μl transposon đệm và đun sôi trong 10 phút. Sau khi sôi, các mẫu đã được làm mát bằng nước-20 ° c trong 5 phút trước khi centrifuging tại 10.000 vòng/phút trong 10 phút (Amjad et al, năm 2011).Genotypic phát hiện gen bla bởi PCRSupernatant thu được được sử dụng như là các mẫu DNA polymerase chuỗi reaction(PCR) phân tích. Các chủng đã được tài liệu như ESBL bởi các phát hiện phân tử của blaSHV, blaVEB, blaPER của Đảng Cộng sản Romania. Các chất nền, mồi được sử dụng để phát hiện các gen được thể hiện trong bảng 1.Đảng Cộng sản Romania được thực hiện trong 30 μl hỗn hợp 3 μl 10 X đệm, 1 μl 10 mM MgCl2 và 0,25 μl 5 U/μl Taq DNA polymerase (Fermentas, Litva), 0.5μleach 10 mM deoxynucleaotide triphosphates, 1 μl mỗi 10 μM chất nền, mồi và 5 μl plasmid chiết xuất trong một người đạp xe máy nhiệt (Kyratec, Hàn Quốc).

Kết quả (Việt) 2:

Xác định kiểu gen của ESBL
Chuẩn bị mẫu DNA
Các mẫu DNA cho K. viêm phổi đã được chuẩn bị từ các chủng vừa nuôi cấy bằng cách ngưng 3-5 thuộc địa từ tấm trong 500 ml của bộ đệm transposon và đun sôi trong khoảng 10 phút. Sau khi đun sôi, các mẫu được làm lạnh ở -20 ° C trong 5 phút trước khi ly tâm ở 10.000 rpm trong 10 phút (Amjad et al, 2011).
Phát hiện kiểu gen của gen bla bằng PCR
Các dịch nổi thu được đã được sử dụng làm mẫu DNA trong chuỗi polymerase phản ứng (PCR) phân tích. Các chủng này được ghi nhận như ESBL bởi phát hiện phân tử của blaSHV, blaVEB, blaPER bằng PCR. Các mồi được sử dụng để phát hiện các gen này được thể hiện trong Bảng 1.
PCR được thực hiện trong 30 ml hỗn hợp của 3 ml 10X đệm, 1 ml 10 mM MgCl2, và 0,25 ml 5 U / ml Taq DNA polymerase (Fermentas, Lithuania ), 0.5μleach 10 mM deoxynucleaotide triphosphate, 1 ml mỗi 10 mM mồi và 5 ml dịch chiết plasmid trong một chu trình nhiệt (Kyratec, Hàn Quốc).