Nitric oxide assayThe nitric oxide

Nitric oxide assay
The nitric oxide assay was performed as described previously with slight modification (Yoon et al., 2009). After pre-incubation of RAW 264.7 cells (1.5 × 105cells/mL) with LPS (1 μg/mL) for 24 h, the quantity of nitrite in the culture medium was measured as an indicator of NO production. Amounts of nitrite, a stable metabolite of NO, were measured using Griess reagent (1% sulfanilamide and 0.1% naphthylethylenediamine dihydrochloride in 2.5% phosphoric acid). Briefly, 100 μL of cell culture medium was mixed with 100 μL of Griess reagent. Subsequently, the mixture was incubated at room temperature for 10 min and the absorbance at 540 nm was measured in a microplate reader. Fresh culture medium was used as a blank in every experiment. The quantity of nitrite was determined from a sodium nitrite standard curve.
Results and discussion
In murine macrophage RAW 264.7 cells, LPS stimulation alone has been demonstrated to induce iNOS transcription and its protein synthesis, with a corresponding increase in NO production. Furthermore, LPS stimulation has also been shown to induce IκB proteolysis and NF-κB nuclear translocation (Xie et al., 1994; Henkel et al., 1993). Therefore, this cell system is an excellent model for drug screening and the subsequent evaluation of potential inhibitors against iNOS and NO production. In our search for natural products with anti-inflammatory activity, we prepared 80% ethanol crude extracts of 260 native plants from Jeju Island, Korea. All the
plant samples were dissolved in 80% ethanol and diluted with sterile water to normalise the concentration of the test sample. The Griess reaction, a spectrophotometric determination for nitrite, was carried out to quantify the nitrite levels in the conditioned medium of RAW 264.7 cells treated with LPS. The final concentration of ethanol in the culture
media was 0.1% and this concentration of ethanol did not show any effect on the assay systems. Table 1 shows the inhibitory activity by plant extracts towards NO production
by LPS-activated macrophages. Of the 260 kinds of extracts, 122 extracts showed greater than 25% inhibition of NO production at the concentration of 100 μg/mL in the culture
media. Among these 122 extracts, Acer pictum,Viburnum dilatatum, Melia azedarach, Lonicera japonica, Osmunda japonica, Alnus firma, Lindera erythrocarpa, Platycarya
strobilacea, Rhododendron werrichii, Weigela subsessilis (, Salix koreensis, Magnolia kobus, Corylus sieboldiana, Cornus walteri, Ulmus parvifolia, Morus bombycis, Aria alnifolia,
Neoshirakia japonica, Actinodaphne lancifolia, Triadica sebifera, Elaeagnus umbellata, Oenothera glazioviana, Ficus erecta var.sieboldii, Rubus buergeri, Orixa japonica,
and Cnidium japonicum showed the most potent inhibition (greater than 70% inhibition) at the concentration of 100 μg/mL. The numbers of viable activated macrophages were not
significantly altered by the plant extracts as determined by MTT assays, thereby indicating that the inhibition of NO synthesis by the plant extracts was not simply due to cytotoxic effects. Although some plant extracts such as Idesia polycarpa, Artemisia scoparia, and Elsholtzia splendens also exhibited potent inhibition (above 70%) towards NO
synthesis at 100 μg/mL, there were some cytotoxic effects. To conclude, these data suggest that extracts from the plant species examined in this study deserve further investigation in order to isolate the bioactive secondary metabolites with anti-inflammatory properties. Currently, experiments are in progress to analyse the active fractions from the

Kết quả (Việt) 1:

Nitric oxide khảo nghiệmKhảo nghiệm oxit nitric được thực hiện như mô tả trước đó với sửa đổi chút ít (Yoon et al., 2009). Sau đợt trước khi ấp trứng của các tế bào nguyên 264.7 (1.5 × 105cells/mL) với LPS (1 μg/mL) cho 24 h, số lượng nitrit trong môi trường văn hóa đã được đo theo một chỉ báo của không sản xuất. Số tiền của nitrit, một chất chuyển hóa ổn định của NO, được đo bằng cách sử dụng Griess tinh khiết (1% sulfanilamide và 0.1% naphthylethylenediamine dihydrochloride trong axit photphoric 2,5%). Một thời gian ngắn, 100 μL di động văn hóa Trung bình là lẫn lộn với 100 μL Griess tinh khiết. Sau đó, hỗn hợp được ủ ở nhiệt độ phòng cho 10 phút và hấp thu tại bước sóng 540 nm đã được đo trong một người đọc microplate. Văn hóa tươi phương tiện truyền thông được sử dụng như một trống trong mỗi thử nghiệm. Số lượng nitrit đã được xác định từ một đường cong natri nitrit tiêu chuẩn. Kết quả và thảo luậnTrong các đại thực bào nguyên 264.7 tế bào, LPS kích thích một mình đã được chứng minh để tạo ra iNOS phiên âm và tổng hợp protein của nó, với một sự gia tăng tương ứng không sản xuất. Hơn nữa, các kích thích LPS cũng đã được hiển thị để tạo ra IκB proteolysis và NF-κB hạt nhân translocation (Xie et al., 1994; Cho Henkel et al., 1993). Vì vậy, Hệ thống di động này là một mô hình tuyệt vời cho kiểm tra ma túy và sau đó đánh giá tiềm năng ức chế chống lại iNOS và không sản xuất. Trong tìm kiếm của chúng tôi cho các sản phẩm tự nhiên với các hoạt động chống viêm, chúng tôi chuẩn bị 80% ethanol chất chiết xuất từ dầu thô của 260 cây bản địa từ đảo Jeju, Hàn Quốc. Tất cả các thực vật mẫu được hòa tan trong 80% ethanol và pha loãng với nước vô trùng để normalise nồng độ của các mẫu thử nghiệm. Phản ứng Griess, một quyết tâm spectrophotometric cho nitrit, được thực hiện để định lượng các cấp nitrit trong môi trường lạnh của tế bào nguyên 264.7 điều trị bằng LPS. Cuối cùng nồng độ cồn trong văn hóa phương tiện truyền thông là 0,1% và này nồng độ cồn không cho thấy bất kỳ tác dụng trên các hệ thống khảo nghiệm. Bảng 1 cho thấy các hoạt động ức chế bởi chất chiết xuất từ thực vật đối với sản xuất không có bởi kích hoạt LPS đại thực bào. Loại 260 ngày chất chiết xuất từ, chất chiết xuất từ 122 cho thấy lớn hơn 25% ức chế sản xuất không có ở nồng độ 100 μg/mL trong văn hóa phương tiện truyền thông. Trong số các chất chiết xuất từ 122, Acer pictum, cây kim ngân hoa dilatatum, Xoan, Lonicera japonica, Osmunda japonica, Alnus firma, Lindera erythrocarpa, Platycarya strobilacea, Rhododendron werrichii, Weigela subsessilis (, Salix koreensis, Magnolia kobus, Corylus sieboldiana, Cornus walteri, Ulmus parvifolia, Morus bombycis, Aria alnifolia, Neoshirakia japonica, bộp lancifolia, Triadica sebifera, Elaeagnus umbellata, Oenothera glazioviana, Ficus erecta var.sieboldii, Rubus buergeri, Orixa japonica, và Cnidium japonicum cho thấy sự ức chế mạnh nhất (lớn hơn 70% ức chế) ở nồng độ 100 μg/mL. Số lượng đại thực bào kích hoạt khả thi không đáng kể thay đổi bởi các chất chiết xuất từ thực vật được xác định bởi thử nghiệm MTT, do đó cho thấy rằng sự ức chế không tổng hợp của chất chiết xuất từ thực vật là không chỉ đơn giản là do hiệu ứng độc tế bào. Mặc dù một số nhà máy chiết xuất chẳng hạn như Idesia polycarpa, Artemisia scoparia và kinh splendens cũng trưng bày sự ức chế mạnh (trên 70%) đối với NO Tổng hợp tại 100 μg/mL, đã có một số hiệu ứng độc tế bào. Để kết luận, những dữ liệu này cho thấy rằng chất chiết xuất từ thực vật loài kiểm tra trong nghiên cứu này xứng đáng tiếp tục điều tra để cô lập các chất chuyển hóa thứ cấp hoạt tính sinh học với đặc tính chống viêm. Hiện nay, thí nghiệm tiến hành để phân tích các phần phân đoạn hoạt động từ các

Kết quả (Việt) 2:

Nitric oxide khảo nghiệm
Các oxit nitric khảo nghiệm được thực hiện như mô tả trước đây với sửa đổi chút ít (Yoon et al., 2009). Sau khi tiền ủ bệnh của RAW 264,7 tế bào (1,5 × 105cells / mL) với LPS (1 mg / ml) trong 24 h, lượng nitrite trong môi trường nuôi cấy được đo như một chỉ số về sản xuất NO. Lượng nitrite, một chất chuyển hóa ổn định của NO, được đo bằng cách sử dụng thuốc thử Griess (1% và 0,1% sulfanilamide naphthylethylenediamine dihydrochloride trong 2,5% axit phosphoric). Một thời gian ngắn, 100 ml môi trường nuôi cấy tế bào đã được trộn với 100 ml thuốc thử Griess. Sau đó, hỗn hợp được ủ ở nhiệt độ phòng trong 10 phút và độ hấp thụ ở 540 nm được đo trong một người đọc microplate. Môi trường nuôi cấy tươi đã được sử dụng như một trống trong mỗi thí nghiệm. Số lượng nitrite được xác định từ một đường cong chuẩn sodium nitrite.
Kết quả và thảo luận
Trong chuột macrophage RAW 264,7 tế bào, kích thích LPS một mình đã được chứng minh để kích thích iNOS phiên mã và tổng hợp protein của nó, với một sự gia tăng tương ứng trong sản xuất NO. Hơn nữa, LPS kích thích cũng đã được chứng minh là gây ra sự phân giải protein IκB và NF-κB chuyển vị hạt nhân (Xie et al, 1994;.. Henkel et al, 1993). Do đó, hệ thống pin này là một mô hình lý tưởng cho sàng lọc thuốc và các đánh giá tiếp theo của các chất ức chế tiềm năng chống lại iNOS và NO sản xuất. Trong tìm kiếm của chúng tôi cho các sản phẩm tự nhiên có hoạt tính chống viêm, chúng tôi chuẩn bị 80% ethanol chiết xuất dầu thô của 260 loài cây bản địa từ đảo Jeju, Hàn Quốc. Tất cả các
mẫu thực vật được hòa tan trong 80% ethanol và pha loãng với nước vô trùng để bình thường hóa nồng độ của mẫu thử. Phản ứng Griess, một quyết tâm quang phổ cho nitrite, đã được tiến hành để xác định số lượng các mức nitrite trong môi trường nhiệt độ của RAW 264,7 tế bào được điều trị với LPS. Nồng độ cuối cùng của ethanol trong văn hóa
phương tiện truyền thông là 0,1% và nồng độ này của ethanol không cho thấy bất kỳ tác dụng trên hệ thống khảo nghiệm. Bảng 1 cho thấy các hoạt động ức chế bởi chiết xuất thực vật đối với NO sản xuất
bởi các đại thực bào LPS-kích hoạt. Trong số 260 loại chất chiết xuất, chiết xuất 122 cho thấy hơn 25% ức chế NO sản xuất với nồng độ 100 mg / mL trong văn hóa
phương tiện truyền thông. Trong số các chất chiết xuất từ 122, Acer pictum, cây kim ngân hoa dilatatum, Melia azedarach, Lonicera japonica, Osmunda japonica, Alnus firma, Lindera erythrocarpa, Platycarya
strobilacea, Rhododendron werrichii, Weigela subsessilis (, Salix koreensis, Magnolia Kobus, Corylus sieboldiana, Cornus walteri, Ulmus parvifolia , Morus bombycis, Aria alnifolia,
Neoshirakia japonica, actinodaphne lancifolia, triadica sebifera, Elaeagnus umbellata, oenothera glazioviana, Ficus erecta var.sieboldii, Rubus buergeri, orixa japonica,
và Cnidium japonicum cho thấy sự ức chế mạnh nhất (lớn hơn 70% ức chế) tại nồng độ 100 microgam / ml. Các con số của các đại thực bào kích hoạt khả thi không được
thay đổi đáng kể của các chất chiết xuất từ thực vật được xác định bằng xét nghiệm MTT, qua đó chỉ ra rằng sự ức chế NO tổng hợp bởi các chất chiết xuất từ thực vật không chỉ đơn giản là do tác dụng gây độc tế bào. Mặc dù một số chiết xuất thực vật như Idesia polycarpa, Artemisia scoparia, và Elsholtzia splendens cũng trưng bày ức chế mạnh (trên 70%) đối với NO
tổng hợp tại 100 microgam / ml, đã có một số tác dụng gây độc tế bào. Để kết luận, những dữ liệu này cho thấy chiết xuất từ các loài thực vật được nghiên cứu này xứng đáng được tiếp tục điều tra để cách ly các chất chuyển hóa thứ cấp hoạt tính sinh học với đặc tính kháng viêm. Hiện nay, các thí nghiệm đang được tiến hành để phân tích các phân số hoạt động từ