2.7.2 Yeast surface display of HA1

2.7.2 Yeast surface display of HA1 fragments
The construction of pPNLS yeast cell-surface display plasmids (pPNLS-H1pHA9, H1pHA9-Sa, and H1pHA9-Sb) has been described previously [12]. Briefly, a stable HA1 fragment, 1pHA9, from the pandemic H1N1 strain A/California/07/2009 was designed, which retained the ability to bind conformation sensitive neutralizing antibodies binding within the head of HA. We further introduced mutations to disrupt either the “Sa” or “Sb” antigenic sites to map the epitope of HA head-specific antibodies. The yeast cells (EBY100 strain) were transformed with the yeast display plasmids using the LiAc/SS carrier DNA/PEG ethod as described previously [23]. Yeast cellsurface expression of the displayed proteins was
performed as previously described [24]. Briefly, a primary culture (3 mL) in synthetic dextrose casamino acids (SD- CAA) medium (pH 4.5) was grown at 30°C under shaking conditions until an OD600 of 2–3 was reached. The yeast cells were subsequently induced for protein expression by transferring to SGCAA minimal media (similar to SDCAA medium except dextrose replaced by galactose) and incubated with shaking at 20°C for 24 h.

Kết quả (Việt) 1:

2.7.2 men Hiển thị bề mặt của mảnh vỡ HA1Việc xây dựng một plasmid Hiển thị bề mặt tế bào nấm men pPNLS (pPNLS-H1pHA9, H1pHA9-Sa, và H1pHA9-Sb) đã được mô tả trước đó [12]. Một thời gian ngắn, một ổn định HA1 đoạn, 1pHA9, từ đại dịch H1N1 chủng A/California/07/2009 được thiết kế, mà giữ lại khả năng ràng buộc conformation nhạy cảm vô hiệu hóa kháng thể ràng buộc trong vòng đầu của Hà. Chúng tôi tiếp tục giới thiệu các đột biến để phá vỡ "Sa" hoặc "Sb" các trang web kháng nguyên để ánh xạ epitope Hà dành riêng cho đầu kháng thể. Các tế bào nấm men (EBY100 căng thẳng) đã được chuyển đổi với các nấm men Hiển thị chúng bằng cách sử dụng LiAc/SS tàu sân bay DNA/PEG ethod như mô tả trước đó [23]. Nấm men cellsurface biểu hiện của các protein Hiển thịthực hiện như mô tả trước đó [24]. Một thời gian ngắn, một nền văn hóa chính (3 mL) trong môi trường axit (SD - CAA) casamino tổng hợp dextrose (pH 4,5) đã được trồng ở 30° C trong lắc điều kiện cho đến khi đạt một OD600 2-3. Các tế bào nấm men sau đó đã gây ra cho các biểu hiện protein bằng cách chuyển đến SGCAA tối thiểu truyền thông (tương tự như SDCAA trung bình trừ dextrose thay thế bởi galactoza) và ủ với lắc ở 20° C cho 24 h.

Kết quả (Việt) 2:

2.7.2 Yeast hiển thị bề mặt của HA1 mảnh vỡ
Việc xây dựng pPNLS men hiển thị bề mặt tế bào plasmid (pPNLS-H1pHA9, H1pHA9-Sa, và H1pHA9-Sb) đã được mô tả trước đây [12]. Tóm lại, một mảnh HA1 ổn định, 1pHA9, từ đại dịch H1N1 chủng A / California / 07/2009 được thiết kế, mà vẫn giữ được khả năng liên kết cấu kháng thể trung hòa nhạy cảm ràng buộc trong đầu của HA. Chúng tôi tiếp tục giới thiệu các đột biến để làm gián đoạn hoặc là "Sa" hoặc "Sb" các trang web kháng nguyên để lập bản đồ các epitope của kháng thể đầu cụ thể HA. Các tế bào nấm men (chủng EBY100) đã được biến đổi với các plasmid hiển thị bằng cách sử dụng nấm men LiAc / SS hãng DNA / PEG ethod như mô tả trước đây [23]. Biểu cellsurface men của các protein hiển thị được
thực hiện như mô tả [24] trước đó. Tóm lại, một nền văn hóa chính (3 ml) trong tổng hợp dextrose casamino axit (SD- CAA) trung bình (pH 4.5) được trồng ở 30 ° C trong điều kiện lắc cho đến khi một OD600 2-3 đã đạt được. Các tế bào nấm men sau đó đã gây ra cho biểu hiện protein bằng cách chuyển sang SGCAA phương tiện truyền thông tối thiểu (tương tự như vừa SDCAA trừ dextrose thay thế bằng galactose) và ủ với lắc ở 20 ° C trong 24 h.