a gyratory shaker at 120 rpm. Bacte

a gyratory shaker at 120 rpm. Bacteria were killed by
several subcultures in the medium containing 500 mg
Claforan l..1. Hairy roots were grown in 250 ml Erlenmeyer
flasks in 30 ml of the medium and transferred
every 4 weeks. One root tip (2 cm long) cut from
branches of 4-week culture was used as an inoculum.
Transformation was confirmed in lyophilised root
tissue extracts by detection of mannopine after paper
electrophoresis (Petit et al. 1983) and by PCR analysis
(Hosokawa et al. 1997).
Analysis of growth parameters
To examine the time course of growth about 0.3 g
fresh weight of 28-day-old hairy roots was placed into
30 ml of the medium in 250 ml flasks. Every 2–3 days,
starting from day 4 of culture, the hairy roots from
3 individual flasks were harvested. For fresh weight
determination the roots were gently pressed on filter
paper to remove excess water and weighed. Then
they were lyophilised and the dry weight (D.W.) was
recorded.
The sugar content of the medium was measured
using a refractometer. The specific conductivity of the
medium was determined with a conductometer; also
the pH of medium was measured.
The cultured 28-day-old hairy roots were elicited
with 100 M methyl jasmonate added to the medium
after autoclaving, for 48 h and one, two and three
weeks.
Analytical methods
Paclitaxel and 10-deacetylbaccatin III (10-DAB III)
were detected in elicited and unelicited transformed
roots. Dry tissue 100 mg was powdered and extracted
with methanol 1 ml by 15 min ultrasonication. Afterwards
the samples were shaken overnight in the dark.
Next, after centrifugation for 15 min at 15 500 rpm and
at 5 C, the supernatantwas collected. The residue was
reextracted with methanol 1 ml and ultrasonificated
for 15 min. The two supernatants were combined and
evaporated to dryness. The dry residue was reconstituted
in methanol 1 ml and 0.5 ml was brought to
5 ml of water and loaded on the Solid Phase Extraction
cartridge (Supelco, Bellfonte, PA, USA). The sample
cleaning was performed according to the method
used by Theodoridis et al. (1998a). The cartridge was
washed with 2 ml water, 20% (v/v) methanol 2 ml, and
50% (v/v) methanol 2 ml. The compounds of interest
were eluted with 100% methanol 2 ml and the collected
fraction was evaporated to dryness. The residue

Kết quả (Việt) 1:

a gyratory shaker at 120 rpm. Bacteria were killed byseveral subcultures in the medium containing 500 mgClaforan l..1. Hairy roots were grown in 250 ml Erlenmeyerflasks in 30 ml of the medium and transferredevery 4 weeks. One root tip (2 cm long) cut frombranches of 4-week culture was used as an inoculum.Transformation was confirmed in lyophilised roottissue extracts by detection of mannopine after paperelectrophoresis (Petit et al. 1983) and by PCR analysis(Hosokawa et al. 1997).Analysis of growth parametersTo examine the time course of growth about 0.3 gfresh weight of 28-day-old hairy roots was placed into30 ml of the medium in 250 ml flasks. Every 2–3 days,starting from day 4 of culture, the hairy roots from3 individual flasks were harvested. For fresh weightdetermination the roots were gently pressed on filterpaper to remove excess water and weighed. Thenthey were lyophilised and the dry weight (D.W.) wasrecorded.The sugar content of the medium was measuredusing a refractometer. The specific conductivity of themedium was determined with a conductometer; alsothe pH of medium was measured.The cultured 28-day-old hairy roots were elicitedwith 100 M methyl jasmonate added to the mediumafter autoclaving, for 48 h and one, two and threeweeks.Analytical methodsPaclitaxel and 10-deacetylbaccatin III (10-DAB III)were detected in elicited and unelicited transformedroots. Dry tissue 100 mg was powdered and extractedvới methanol 1 ml bởi 15 phút ultrasonication. Sau đóCác mẫu được rung động qua đêm trong bóng tối.Tiếp theo, sau khi số cho 15 phút ở 15 500 rpm vàtại 5 C, các supernatantwas thu thập. Các dư lượng làreextracted với methanol 1 ml và ultrasonificatedtrong 15 phút. Supernatants hai được hợp nhất vàbốc hơi để khô. Các dư lượng khô được tái lậpở methanol 1 ml và cách 0.5 ml được đưa đến5 ml nước và nạp vào khai thác pha rắnmực (Supelco, Bellfonte, PA, Mỹ). Mẫulàm sạch được thực hiện theo các phương phápđược sử dụng bởi Theodoridis et al. (1998a). Mựcrửa sạch với 2 ml nước, 20% (v/v) methanol 2 ml, và50% (v/v) methanol 2 ml. Các hợp chất quan tâmđã được eluted với 100% methanol 2 ml và thu thập cácphần bốc hơi để khô. Các dư lượng

Kết quả (Việt) 2:

máy lắc hồi chuyển ở 120 rpm. Vi khuẩn đã bị giết bởi
một số nền văn hóa khác trong các môi trường có chứa 500 mg
l..1 Claforan. Hairy rễ được trồng trong 250 ml Erlenmeyer
bình trong 30 ml của môi trường và chuyển
mỗi 4 tuần. Một tip root (dài 2 cm) cắt từ
các chi nhánh của văn hóa 4 tuần đã được sử dụng như là một nguồn bệnh.
Transformation đã được khẳng định trong thư mục gốc đông khô
chiết xuất mô bằng cách phát hiện các mannopine sau khi giấy
điện (Petit et al 1983). và bằng phân tích PCR
(Hosokawa et al. 1997).
Phân tích các thông số tăng trưởng
để kiểm tra quá trình thời gian tăng trưởng khoảng 0,3 g
trọng lượng tươi của rễ lông 28 ngày tuổi đã được đặt vào
30 ml dung môi trong bình 250 ml. 2-3 ngày,
bắt đầu từ ngày thứ 4 của nền văn hóa, các gốc lông từ
3 bình cá nhân được thu hoạch. Đối với trọng lượng tươi
quyết tâm của rễ được ấn nhẹ trên bộ lọc
giấy để loại bỏ nước dư thừa và cân nặng. Sau đó,
họ đã được đông khô và trọng lượng khô (DW) đã được
ghi nhận.
Các hàm lượng đường của các phương tiện được đo
bằng cách sử dụng một máy đo khúc xạ. Độ dẫn cụ thể của
môi trường được xác định với một conductometer; cũng
pH của môi trường được đo.
Rễ lông 28 ngày tuổi nuôi được gợi ra
với 100? M methyl jasmonate thêm vào môi trường
sau khi hấp khử trùng, trong 48 h và một, hai và ba
tuần.
Phân tích các phương pháp
Paclitaxel và 10-deacetylbaccatin III (10-DAB III)
đã được phát hiện tại gợi ra và unelicited chuyển
rễ. Khô mô 100 mg bột và chiết
với methanol 1 ml 15 min ultrasonication. Sau đó
các mẫu được lắc qua đêm trong bóng tối.
Tiếp theo, sau khi ly tâm 15 phút ở 15 500 rpm và
ở 5 C, các supernatantwas thu?. Phần dư được
reextracted với methanol 1 ml và ultrasonificated
trong 15 phút. Hai nước nổi được kết hợp và
bốc hơi đến khô. Dư lượng khô được cơ cấu lại
trong 1 ml methanol và 0,5 ml đã được đưa đến
5 ml nước và nạp vào Solid Phase Extraction
cartridge (Supelco, Bellfonte, PA, USA). Các mẫu
làm sạch được thực hiện theo các phương pháp
được sử dụng bởi Theodoridis et al. (1998a). Hộp mực được
rửa sạch bằng 2 ml nước, 20% (v / v) methanol 2 ml, và
50% (v / v) methanol 2 ml. Các hợp chất quan tâm
được tách rửa bằng 100% methanol 2 ml và thu thập
phần được bốc hơi đến khô. Dư lượng