Here, we describe two methods: (1)

Here, we describe two methods: (1) a method to obtain salinixanthin
from an extremely halophilic bacterium (see Subheadings 3.1 – 3.3 )
and (2) a method to produce β -carotene in a recombinant moderately
halophilic bacterium (see Subheadings 3.4 – 3.9 ).
S. ruber M31 T contains a high proportion of carotenoids in its
membrane, producing colonies of similar appearance to haloarchaea
( 20 ) . It has been demonstrated that the carotenoids in
haloarchaea contribute to survive better in strong light in comparison
to colorless wild type. The principal (>96% of total) carotenoid
found in S. ruber M31 T is salinixanthin, a C-40 acyl glycoside carotenoid
chemically related to the carotenoids found in Rhodothermus
marinus and different from C-50 carotenoids produced by
haloarchaea ( 21 ) .
1. To grow S. ruber M31 T , inoculate homogeneously the bacterium
onto round Petri dishes containing saline medium (see
Note 4) ( 21 ) and incubate at 37°C during 7 days to obtain
isolated colonies.
2. Inoculate liquid saline medium (2-L Erlenmeyer fl asks
containing 1 L of saline medium) with a single colony and
incubate at 37°C on a rotary shaker (200 rpm) for 1 day.
3. Harvest the cells in the late-exponential growth phase (see
Note 5) by centrifugation (30 min, 5,500 × g , 4°C).
4. Dry the pellet in a SpeedVac™ concentrator.
5. When necessary, preserve samples by lyophilization and/or
store in the dark at −20°C.

Kết quả (Việt) 1:

Ở đây, chúng tôi mô tả hai phương pháp: (1) một phương pháp để có được salinixanthintừ một vi khuẩn cực kỳ chuỗi (xem phân nhóm 3.1-3,3)và (2) một phương pháp để sản xuất các β-caroten ở một tái tổ hợp vừa phảivi khuẩn chuỗi (xem phân nhóm 3,4-3.9).S. ruber M31 T có chứa một tỷ lệ cao carotenoid trong của nómàng tế bào, sản xuất các thuộc địa của sự xuất hiện tương tự để Halobacteria(20). Nó đã được chứng minh rằng các carotenoid trongHalobacteria đóng góp để sống sót tốt hơn trong ánh sáng mạnh trong so sánhloại hoang dã không màu. Hiệu trưởng (> 96% tổng số) carotenoidloài này có ở S. ruber M31 T là salinixanthin, một C-40 acyl glycoside carotenoidvề mặt hóa học liên quan đến các carotenoid được tìm thấy trong RhodothermusMarinus và khác nhau từ C-50 carotenoid được sản xuất bởiHalobacteria (21).1. để phát triển S. ruber M31 T, homogeneously cấy vi khuẩnvào vòng Petri món ăn chứa mặn vừa (xemLưu ý 4) (21) và ấp cho nở ở 37 ° C trong thời gian 7 ngày để có đượcthuộc địa bị cô lập.2. cấy chất lỏng mặn vừa (2-L Erlenmeyer fl yêu cầuchứa 1 L mặn vừa) với một thuộc địa duy nhất vàấp cho nở ở 37° C trên một shaker quay (200 rpm) cho 1 ngày.3. thu hoạch các tế bào ở giai đoạn muộn hàm mũ tăng trưởng (xemLưu ý 5) bằng số (30 min, 5.500 × g, 4 ° C).4. Giặt miếng ở tập trung SpeedVac™.5. khi cần thiết, bảo quản mẫu bằng lyophilization và/hoặclưu trữ trong bóng tối-20 ° C.

Kết quả (Việt) 2:

Ở đây, chúng tôi mô tả hai phương pháp: (1) một phương pháp để có được salinixanthin
từ một loại vi khuẩn cực kỳ ưa mặn (xem phân nhóm 3,1-3,3)
và (2) một phương pháp để sản xuất -carotene β trong một tổ hợp vừa phải
vi khuẩn ưa mặn (xem phân nhóm 3,4-3,9 ).
S. ruber M31 T chứa một tỷ lệ cao của carotenoid trong của
màng, sản xuất thuộc địa của sự xuất hiện tương tự như haloarchaea
(20). Nó đã được chứng minh rằng các carotenoid trong
haloarchaea đóng góp để tồn tại tốt hơn trong ánh sáng mạnh so
với loại hoang dã không màu. Hiệu trưởng (> 96% của tổng số) carotenoid
được tìm thấy trong S. ruber M31 T được salinixanthin, một C-40 acyl glycoside carotenoid
liên quan hóa học với các carotenoid được tìm thấy trong Rhodothermus
marinus và khác nhau từ C-50 carotenoid được sản xuất bởi
haloarchaea (21).
1. Để phát triển S. ruber M31 T, cấy đồng nhất các vi khuẩn
lên đĩa Petri chứa vòng vừa mặn (xem
Chú ý 4) (21) và ủ ở 37 ° C trong 7 ngày để có được
các thuộc địa bị cô lập.
2. Cấy vừa mặn lỏng (2-L Erlenmeyer fl nhắc đi nhắc
chứa 1 L vừa mặn) với một thuộc địa duy nhất và
ủ ở 37 ° C trên máy lắc quay (200 rpm) trong 1 ngày.
3. Thu hoạch các tế bào trong giai đoạn tăng trưởng chậm hàm số mũ (xem
Chú ý 5) bằng cách ly tâm (30 phút, 5.500 × g, 4 ° C).
4. Lau khô viên trong một bộ tập trung SpeedVac ™.
5. Khi cần thiết, bảo quản mẫu bằng lyophilization và / hoặc
lưu trữ trong bóng tối ở -20 ° C.