Chất lượng và sự tập trung của tất cả RNA được kiểm tra bởi agarose gel elec-trophoresis và một phối sau khi xử lý với 1 U DNase tôi (Promega) ở 37 C cho 15 phút để loại bỏ vết trong gen DNA. Nồng độ của mỗi mẫu sau đó được điều chỉnh để mức độ tương tự và được lưu trữ tại 80 C cho đến khi thử nghiệm sau.4.4. phối lai ghépBình thường hóa DSN trung gian và phối lai ghép (DNSH) được thực hiện theo phương pháp của Dai et al. [22], nhưng với nhỏ modifications. Các cặp mồi được sử dụng trong phương pháp DNSH đã là giống như những người trong nghiên cứu của Dai (cho chuỗi các thông tin về các chất nền, mồi, xem bảng 1 ở Dai et al. [22]). Efficiency lai ghép thức được kiểm tra bằng cách khuyếch đại gen GAPDH sử dụng mồi cặp GAPDH-F(50 - GCCATCGCTATCTCCCTG-30) và GAPDH-R (50 - CCAGAAGTCA-CAAACGCCTC-30).4.5. trình tự phân tích và vụ nổ tìmSau ba vòng của Đảng Cộng sản Romania, > 500 bp mảnh vỡ đã là purified bằng cách sử dụng QIAquick Gel khai thác Kit (Qiagen). Các sản phẩm sau đó được ligated với vector pUCm-T (Takara). Các sản phẩm PCR của các plasmid được chiết xuất từ Escherichia coli văn hóa bằng cách sử dụng màu trắng thuộc địa như inocula sau khi kiểm tra màu xanh/trắng. Những plasmid đã được chế tác dựa trên mồi cặp M13F (50 - GTAAAACGACGGC CAG-30) và M13R (50 - CAGGAAACAGCTATGAC-30).
đang được dịch, vui lòng đợi..