In the next step in preparing the l

In the next step in preparing the library, the recombinant DNA circles are introduced into bacterial cells that have been made transiently permeable to DNA. These bacterial cells are now said to be transfected with the plasmids. As the cells grow and divide, doubling in number every 30 minutes, the recombinant plasmids also replicate to produce an enormous number of copies of DNA circles containing the foreign DNA (Figure 8-40). Many bacterial plasmids carry genes for antibiotic resistance (discussed in Chapter 24), a property that can be exploited to select those cells that have been successfully transfected; if the bac¬teria are grown in the presence of the antibiotic, only cells containing plasmids will survive. Each original bacterial cell that was initially transfected contains, in general, a different foreign DNA insert; this insert is inherited by all of the progeny cells of that bacterium, which together form a small colony in a culture dish.
For many years, plasmids were used to clone fragments of DNA of 1000 to 30,000 nucleotide pairs. Larger DNA fragments are more difficult to handle and were harder to clone. Then researchers began to use yeast artificial chromosomes (K4Cs), which could accommodate very large pieces of DNA (Figure 8-41). Today, new plasmid vectors based on the naturally occurring F plasmid of E. coli are used to clone DNA fragments of 300,000 to 1 million nucleotide pairs. Unlike smaller bacterial plasmids, the F plasmid—and its derivative, the bacterial artificial chromosome (BAC)—is present in only one or two copies per E. coli cell. The fact that BACs are kept in such low numbers in bacterial cells may contribute to their ability to maintain large cloned DNA sequences stably: with only a few BACs present, it is less likely that the cloned DNA fragments will become scrambled by recombination with sequences carried on other copies of the plasmid. Because of their stability, ability to accept large DNA inserts, and ease of handling, BACs are now the preferred vector for building DNA libraries of complex organisms—including those representing the human and mouse genomes.

Kết quả (Việt) 1:

Trong bước tiếp theo trong việc chuẩn bị các thư viện, vòng tròn tái tổ hợp DNA được giới thiệu vào các tế bào vi khuẩn đã được thực hiện mặt thấm vào DNA. Các tế bào vi khuẩn được gọi transfected với các plasmid. Khi các tế bào phát triển và phân chia, tăng gấp đôi số lượng mỗi 30 phút, các plasmid tái tổ hợp cũng tái tạo để sản xuất một số lượng rất lớn của các bản sao của các vòng tròn DNA có ADN nước ngoài (con số 8-40). Nhiều vi khuẩn plasmid mang gen cho kháng thuốc kháng sinh (thảo luận trong chương 24), một tài sản có thể được khai thác để chọn những tế bào có được thành công transfected; Nếu bac¬teria đang phát triển sự hiện diện của các kháng sinh, chỉ các tế bào có chứa một plasmid sẽ sống sót. Mỗi tế bào vi khuẩn gốc ban đầu transfected bao gồm, nói chung, một chèn DNA khác nhau nước ngoài; chèn này được thừa kế bởi tất cả các tế bào con cháu rằng vi khuẩn, mà cùng nhau tạo thành một món ăn văn hóa là một thuộc địa nhỏ.Trong nhiều năm, chúng đã được sử dụng để sao chép các mảnh vỡ của ADN của cặp nucleotide 1000 đến 30.000. Lớn hơn các phân đoạn DNA có nhiều khó khăn để xử lý và đã là khó khăn hơn để sao chép. Sau đó, các nhà nghiên cứu đã bắt đầu sử dụng nấm men nhân tạo nhiễm sắc thể (K4Cs), mà có thể chứa rất lớn những mảnh ADN (con số 8-41). Hôm nay, mới plasmid vector dựa trên plasmid F nguồn gốc tự nhiên của E. coli được sử dụng để sao chép DNA mảnh vỡ của các cặp nucleotide 300.000 đến 1 triệu. Không giống như nhỏ hơn vi khuẩn plasmid, F plasmid — và đạo hàm của nó, do vi khuẩn nhiễm sắc thể nhân tạo (BAC) — được trình bày trong bản sao chỉ một hoặc hai mỗi tế bào E. coli. Thực tế là BACs được lưu giữ trong các con số thấp trong các tế bào vi khuẩn có thể đóng góp vào khả năng của họ để duy trì lớn các trình tự ADN nhân bản ổn định: với chỉ một vài BACs hiện nay, đó là ít có khả năng rằng những đoạn DNA nhân bản sẽ trở thành tranh giành bởi gen với trình tự thực hiện trên các bản sao của plasmid. Do tính ổn định của họ, khả năng chấp nhận lớn DNA chèn và dễ xử lý, BACs là bây giờ các véc tơ ưa thích để xây dựng thư viện ADN của sinh vật phức tạp-kể cả những người đại diện cho con người và chuột bộ gen.

Kết quả (Việt) 2:

Trong bước tiếp theo trong việc chuẩn bị thư viện, các vòng tròn DNA tái tổ hợp được đưa vào tế bào vi khuẩn đã được thực hiện thoáng qua thấm vào DNA. Những tế bào vi khuẩn hiện nay được cho là transfected với các plasmid. Khi các tế bào phát triển và phân chia, tăng gấp đôi trong số mỗi 30 phút, các plasmid tái tổ hợp cũng tái tạo để sản xuất một số lượng lớn các bản sao của vòng tròn DNA có chứa ADN ngoại (Hình 8-40). Nhiều plasmid vi khuẩn mang gen kháng kháng sinh (được thảo luận trong Chương 24), một tài sản có thể được khai thác để lựa chọn ra những tế bào đã được transfected thành công; nếu bac¬teria được trồng trong sự hiện diện của kháng sinh, chỉ có tế bào chứa plasmid sẽ sống sót. Mỗi tế bào vi khuẩn ban đầu mà bước đầu đã được transfected chứa, nói chung, một chèn DNA nước ngoài khác nhau; chèn này được kế thừa bởi tất cả các tế bào con cháu của vi khuẩn, mà lại với nhau tạo thành một thuộc địa nhỏ trong một món ăn văn hóa.
Trong nhiều năm, các plasmid được sử dụng để sao chép đoạn ADN của 1.000 đến 30.000 cặp nucleotide. Đoạn DNA lớn hơn là khó khăn hơn để xử lý và khó khăn hơn để sao chép. Sau đó, các nhà nghiên cứu đã bắt đầu sử dụng nấm men nhân tạo nhiễm sắc thể (K4Cs), mà có thể chứa phần rất lớn của DNA (Hình 8-41). Hôm nay, các vector plasmid mới dựa trên tự nhiên F plasmid của E. coli được sử dụng để sao chép các đoạn ADN từ 300.000 đến 1 triệu cặp nucleotide. Không giống như các plasmid vi khuẩn nhỏ hơn, F plasmid và dẫn xuất của nó, các nhiễm sắc thể nhân tạo của vi khuẩn (BAC) -đặc hiện tại chỉ có một hoặc hai bản sao cho mỗi tế bào E. coli. Thực tế là Bács được giữ ở số thấp như vậy trong các tế bào vi khuẩn có thể góp phần vào khả năng của mình để duy trì chuỗi DNA nhân bản lớn ổn định: chỉ với một vài BACS hiện nay, đó là ít có khả năng rằng các mảnh vỡ DNA nhân bản vô tính sẽ trở nên tranh giành bằng tái tổ hợp với trình tự thực trên các bản sao khác của plasmid. Vì sự ổn định của họ, khả năng chấp nhận chèn DNA lớn, và dễ dàng xử lý, BACS hiện là vector ưa thích dành cho xây dựng thư viện DNA của sinh vật, bao gồm cả những phức tạp đại diện cho các bộ gen người và chuột.