In water suspensions of spores the

In water suspensions of spores the detection
limit of the cultural method was 100 spores/mL,
while PCR was able to detect 10 spore/mL, corresponding
to the template DNA from 2 spores
per reaction. This difference was probably due to
the limited germination capacity of spores on culture
media (Nordström and Fries, 1995). In this
study we observed germination rates between 1.9%
and 8% in artificially-contaminated honeys and between
2.9% and 7.6% in water suspensions. These
results are consistent with those of Forsgren et al.
(2008). The superior sensitivity of PCR for water
suspensions compared to honeys could be due
to PCR inhibitors or less effective DNA extraction
from honey. Piccini et al. (2002) have already reported
strong PCR inhibition by honey. These authors
needed 10−1 dilution of the DNA extracted
by a simple microwave treatment to have ampli-
fication, obtaining a sensitivity of 170 CFU/mL.
The extraction procedure that we used significantly
reduced inhibition with only 1 Log difference in
sensitivity between water suspensions and honeys,
without DNA dilution.
Among the naturally-occurring honey samples,
34 were PCR and culture positive, 28 were PCR
and culture negative, 15 were PCR positive and culture
negative and 14 were PCR negative and culture
positive. Culture positive samples ranged from 1 to
1460 CFU/g. Among them, the 14 PCR-negative
samples had low CFU/g counts (between 1 and 7).
In conclusion, these results indicate that the PCR
protocol employed is as sensitive as culture with
MYPGP for P. larvae spores detection in honey, but
it gives results in 24 hours instead of 8 days. Furthermore,
the combination of DNA extraction and
amplification protocol that we propose is simpler
and less prone to false-positives than the previously
proposed nested PCR by Lauro et al. (2003).
ACKNOWLEDGEMENTS
The Authors wish to thank Mr Vanni Righetti
and Mrs Roberta Giannasi for technical assistance.

Kết quả (Việt) 1:

Trong nước đình chỉ của các bào tử phát hiệnCác giới hạn của văn hóa phương pháp là 100 bào tử/mL,trong khi Đảng Cộng sản Romania đã có thể phát hiện 10 spore/mL, tương ứngđể các mẫu DNA từ 2 bào tửmột phản ứng. Sự khác biệt này có thể là donăng lực hạn chế nảy mầm của bào tử về văn hóaphương tiện truyền thông (Nordström và khoai tây chiên, 1995). Trong điều nàynghiên cứu chúng tôi quan sát thấy nảy mầm tỷ giá giữa 1,9%và 8% tại ô nhiễm giả tạo honeys và giữa2,9% và 7,6% trong nước đình chỉ. Đâykết quả là phù hợp với những người của Forsgren et al.(2008). sự nhạy cảm cao cấp của Đảng Cộng sản Romania nướcđình chỉ so với honeys có thể là doĐảng Cộng sản Romania ức chế hoặc kém hiệu quả DNA khai tháctừ mật ong. Piccini et al. (2002) đã có báo cáomạnh mẽ sự ức chế PCR Honey. Các tác giảcần thiết 10−1 pha loãng của DNA chiết xuấtbởi một điều trị đơn giản lò vi sóng có ampli-fication, có được một sự nhạy cảm của CFU 170/mL.Thủ tục trích xuất chúng tôi sử dụng một cách đáng kểức chế giảm với chỉ có 1 sự khác biệt đăng nhập trongđộ nhạy cảm giữa nước đình chỉ và honeys,mà không cần pha loãng DNA.Trong số các mẫu mật ong tự nhiên xảy ra,34 là Đảng Cộng sản Romania và văn hóa tích cực, 28 Đảng Cộng sản Romaniavà văn hóa tiêu cực, 15 đã là Đảng Cộng sản Romania tích cực và văn hóatiêu cực và 14 đã là Đảng Cộng sản Romania tiêu cực và văn hóatích cực. Văn hóa tích cực mẫu trải dài từ 1 đến1460 CFU/g. Trong số đó, các đảng Cộng sản Romania 14, tiêu cựcmẫu có thấp CFU/g đếm (từ 1 đến 7).Tóm lại, những kết quả này chỉ ra rằng Đảng Cộng sản Romaniagiao thức làm việc là là nhạy cảm như văn hóa vớiMYPGP P. ấu trùng bào tử phát hiện trong mật ong, nhưngnó sẽ cho kết quả trong 24 giờ thay vì 8 ngày. Hơn nữa,sự kết hợp của khai thác DNA vàgiao thức khuếch đại chúng tôi đề xuất là đơn giảnvà ít dễ bị sai tích cực hơn so với các trước đóđề nghị Đảng Cộng sản Romania lồng nhau bởi Lauro et al. (2003).LỜI CẢM ƠNCác tác giả muốn cảm ơn ông Vanni Righettivà bà Roberta Giannasi cho hỗ trợ kỹ thuật.

Kết quả (Việt) 2:

Trong hệ thống treo nước các bào tử phát hiện
giới hạn của phương pháp văn hóa là 100 bào tử / ml,
trong khi PCR đã có thể phát hiện 10 bào tử / ml, tương ứng
với DNA mẫu từ 2 bào tử
mỗi phản ứng. Sự khác biệt này có lẽ là do
năng lực hạn chế sự nảy mầm của bào tử về văn hóa
phương tiện truyền thông (Nordstrom và Fries, 1995). Trong
nghiên cứu chúng tôi quan sát thấy tỷ lệ nảy mầm từ 1,9%
và 8% trong mật ong nhân tạo bị ô nhiễm và giữa
2,9% và 7,6% trong huyền phù nước. Những
kết quả này phù hợp với những Forsgren et al.
(2008). Các siêu nhạy của PCR cho nước
bị đình chỉ so với mật ong có thể là do
các chất ức chế PCR hoặc chiết DNA kém hiệu quả
từ mật ong. Piccini et al. (2002) đã báo cáo
sự ức chế PCR mạnh mẽ của mật ong. Các tác giả
cần pha loãng 10-1 của DNA chiết xuất
bởi một điều trị vi sóng đơn giản để có AMPLI
fication, có được một sự nhạy cảm của 170 CFU / mL.
Thủ tục khai thác mà chúng tôi sử dụng đáng kể
làm giảm sự ức chế với khác biệt duy nhất 1 Đăng nhập
nhạy cảm giữa huyền phù nước và mật ong,
không pha loãng DNA.
Trong số các mẫu mật ong tự nhiên xảy ra,
34 là PCR và nuôi cấy dương tính, 28 là PCR
và văn hóa tiêu cực, 15 người PCR dương tính và văn hóa
âm tính và 14 là PCR âm tính và văn hóa
tích cực. Văn hóa các mẫu dương tính trong khoảng 1 để từ
1460 CFU / g. Trong số đó, 14 PCR âm tính
mẫu có CFU / g tính thấp (từ 1 đến 7).
Tóm lại, các kết quả cho thấy PCR
giao thức sử dụng cũng nhạy như văn hóa với
MYPGP cho P. bào tử phát hiện ấu trùng trong mật ong, nhưng
nó cho kết quả trong 24 giờ thay vì 8 ngày. Hơn nữa,
sự kết hợp của chiết xuất DNA và
giao thức khuếch đại mà chúng tôi đề xuất là đơn giản hơn
và ít bị giả tích cực hơn so với trước đây
PCR lồng nhau được đề xuất bởi Lauro et al. (2003).
LỜI CẢM ƠN
Các tác giả xin cảm ơn ông Vanni Righetti
và bà Roberta Giannasi cho hỗ trợ kỹ thuật.