We designed oligonucleotide primer

We designed oligonucleotide primer pairs to amplify the promoter region, the translated exon sequences, and the flanking intron sequences of all 18 exons of the LDL receptor gene to compare the ability of the PCR single-strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) method with semiautomated solid-phase genomic DNA sequencing to detect sequence variations. In 20 apparently unrelated Danish patients with a clinical diagnosis of heterozygous familial hypercholesterolemia (FH), we identified 13 different mutations in the LDL receptor gene: two silent (C331C, N494 N); five missense (W66G, E119K, T383P, W556S, T7051); one nonsense (W23X); three splice-site (313 + 1G-->A, 1061-8T-->C, 1846-1G-->A); and two frameshift (335del10, 1650delG) mutations. Four of these mutations, N494 N, T383P, 1061-8T-->C, and W556S, have not been reported earlier. The pathogenicity of the T383P, 1061-8T-->C, and W556S mutations remains to be established by in vitro mutagenesis and transfection studies. One patient had three mutations (335del10, 1061-8T-->C, and T705I) on the same allele. Further, nine well-known polymorphisms were detectable with this methodological setup. Direct DNA sequencing of the PCR products used for the SSCP analysis did not reveal any sequence variations not detected by the PCR-SSCP method. In two patients we did not detect any mutation by either method. We conclude that the PCR-SSCP analysis, performed as described here, is as sensitive and efficient as DNA sequencing in the ability to identify the sequence variations in the LDL receptor gene of the patients with heterozygous FH of this study.

Kết quả (Việt) 1:

Chúng tôi thiết kế oligonucleotide mồi cặp để khuyếch đại vùng promoter, các chuỗi dịch exon, và trình tự intron chầu tất cả 18 exon của gen thụ thể LDL để so sánh khả năng của phương pháp đa hình (PCR-SSCP) đơn lõi conformation Đảng Cộng sản Romania với trình tự DNA gen pha rắn semiautomated phát hiện trình tự biến thể. Trong 20 bệnh nhân Đan Mạch rõ ràng không liên quan với một chẩn đoán lâm sàng của hổ gia đình hypercholesterolemia (FH), chúng tôi xác định 13 khác nhau đột biến trong gen thụ thể LDL: hai im lặng (C331C, N494 N); năm missense (W66G, E119K, T383P, W556S, T7051); một vô nghĩa (W23X); ba splice-trang web (313 + 1 G--> A, 1061-8T--> C, 1846-1 G--> A); và hai frameshift (335del10, 1650delG) đột biến. Bốn trong số những đột biến, N494 N, T383P, 1061-8T--> C, và W556S, đã không được báo cáo trước đó. Bài T383P, 1061-8T--> C, và đột biến W556S còn lại để được thành lập bởi các nghiên cứu trong ống nghiệm của mutagenesis và transfection. Một bệnh nhân có ba đột biến (335del10, 1061-8T--> C, và T705I) trên cùng một allele. Hơn nữa, chín nổi tiếng polymorphisms đã được phát hiện với phương pháp thiết lập này. Trực tiếp các trình tự DNA của Đảng Cộng sản Romania các sản phẩm được sử dụng để phân tích SSCP đã không tiết lộ bất kỳ biến thể chuỗi không được phát hiện bằng phương pháp PCR-SSCP. Trong hai bệnh nhân chúng tôi không thể phát hiện bất kỳ đột biến bằng một trong hai phương pháp. Chúng tôi kết luận rằng Đảng Cộng sản Romania-SSCP phân tích, thực hiện như mô tả ở đây, là nhạy cảm và hiệu quả như trình tự DNA trong khả năng để xác định những biến đổi trình tự gen thụ thể LDL của bệnh nhân với hổ FH của nghiên cứu này.

Kết quả (Việt) 2:

Chúng tôi thiết kế cặp mồi oligonucleotide để khuếch đại vùng promoter, trình tự exon dịch, và chầu trình tự intron của tất cả 18 exon của gen thụ thể LDL để so sánh khả năng của PCR đơn strand conformation polymorphism phương pháp (PCR-SSCP) với semiautomated rắn giai đoạn DNA sequencing để phát hiện biến thể trình tự. Trong 20 bệnh nhân Đan Mạch dường như không liên quan với một chẩn đoán lâm sàng của dị hợp tăng cholesterol máu có tính gia đình (FH), chúng tôi đã xác định 13 đột biến khác nhau trong gen thụ thể LDL: hai im lặng (C331C, N494 N); năm missense (W66G, E119K, T383P, W556S, T7051); một trong vô nghĩa (W23X); ba mối nối tại chỗ (313 + 1G -> A, 1061-8T -> C, 1846-1G -> A); và hai khung đọc (335del10, 1650delG) đột biến. Bốn trong số những đột biến, N494 N, T383P, 1061-8T -> C, và W556S, đã không được báo cáo trước đó. Các khả năng gây bệnh của T383P, 1061-8T -> C, và các đột biến W556S vẫn còn để được thành lập bởi các nghiên cứu trong ống nghiệm gây đột biến và transfection. Một bệnh nhân có ba đột biến (335del10, 1061-8T -> C, và T705I) trên các allele giống nhau. Hơn nữa, chín đa hình nổi tiếng được phát hiện với thiết lập phương pháp luận này. Trình tự DNA trực tiếp của sản phẩm PCR được sử dụng để phân tích SSCP không tiết lộ bất kỳ biến thể trình tự không được phát hiện bằng phương pháp PCR-SSCP. Trong hai bệnh nhân, chúng tôi đã không phát hiện bất kỳ sự đột biến của một trong hai phương pháp. Chúng tôi kết luận rằng việc phân tích PCR-SSCP, thực hiện như mô tả ở đây, cũng nhạy và hiệu quả như trình tự DNA trong khả năng để xác định các biến thể trình tự của gen thụ thể LDL của bệnh nhân dị hợp tử FH của nghiên cứu này.