spores, and DMSO, while column 9 co

spores, and DMSO, while column 9 contained Czapek dox
broth medium alone. The microplate was incubated at 28 °C
for 7 days. The lowest concentrations that inhibited the growth
of each test fungus determined from each row were assigned
as the MICs against the respective test fungi.
On the other hand, the purified matter was assayed also
for antibacterial activity by the microdilution method. Test
bacteria were incubated in a nutrient broth (Difco) at 37 °C
for 12 h and then suspended in the same nutrient broth. The
bacterial cell density was adjusted at 10
8
cells mL
-
1
.Inthe
same way as fungi, the test solutions for antibacterial activity
assay were prepared and dispensed in each well of a micro-
plate. The bacterial cell density in each well was 10
7
cells mL
-
1
at the beginning. Other conditions were same as those for
fungi. After the microplate was incubated at 37 °C for 2 days,
the lowest concentrations that inhibited the growth of each
test bacterium determined from each row were assigned as
MICs against the respective test bacteria.
RESULTS AND DISCUSSION
Antifungal Activity of Each Fraction Obtained
in the Course of Isolation.
In the course of isolation,
each fraction obtained at various steps was assayed for
its antifungal activity against
Aspergillus niger
.As
summarized in Figure 1A, a crude sample obtained by
acetone extract (
9
) showed a marked activity. Then, this
crude matter was further purified. The crude acetone
extract was extracted with four solvents: water,
n
-
hexane, EtOAc, or BuOH. These four fractions were
assayed for antifungal activity. As shown in Figure 1A,
the EtOAc fraction (
2
) showed the most marked inhibit-
ing effect, although the test hypha recovered its growth
rate within 20 min. This EtOAc fraction was applied to
a silica gel column, and consequently three fractions (Fr-
A, Fr-B, and Fr-C) were obtained. Among them, Fr-B
was found to be the most active and showed marked
inhibitory effect against
A. niger
at 1.25
Ì
gmL
-
1
(Figure
1B;

). Hyphal growth rate was completely inhibited
by the Fr-B concentration of 12.5
Ì
gmL
-
1
(Figure 1B;
O
). Fr-B was subjected to the reversed-phase HPLC to
confirm the purity. The matter finally obtained main-
tained similar activity (Figure 1B;
9
) to Fr-B.
Structural Elucidation.
The purified matter was
colorless oil. The molecular ion peak [M
+
] appeared at
m
/
z
252 in EIMS analysis. HR (high-resolution)-EIMS
analysis of this peak showed that
m
/
z
was 252.1120. A
feasible molecular formula was speculated as being
C
17
H
16
O
2
. The
13
C NMR spectrum in CDCl
3
solution
displayed 13 carbon signals, four of which (
‰
130.0,
128.9, 115.4, and 115.1) appeared to be of double
intensity.
1
H NMR spectra confirmed the presence of
eight aromatic ring protons present as the AA
′
BB
′
system (
‰
7,19 [2H], 7.12 [2H], 6.81 [2H], and 6.80 [2H]).
These two observations suggested the presence of two
para-disubstituted benzene groups in the structure of
the compound. The presence of the 1,3-disubstituted 1,4-
pentadiene system was assigned from the COSY spec-
trum (carbon
-
proton and proton
-
proton). The
J
value
(11.0 Hz) of the 1,2-double bond in the 1,4-pentadiene
system at
‰
6.54 Hz (H-1) and
‰
5.70 Hz (H-2) was
indicative of a cis stereochemistry. An IR band at 3350
cm
-
1
and two protons (
‰
4.89 Hz) exchangeable with two
deuteriums of D
2
O indicated the presence of hydroxyl
groups. The chemical shift of these exchangeable pro-
tons suggested that these hydroxyl groups constituted
the hydroxyphenyl groups. Therefore, the present com-
pound was determined to be (
Z
)-1,3-bis(4-hydroxyphen-
yl)-1,4-pentadiene (Figure 2).

Kết quả (Việt) 1:

bào tử và DMSO, trong khi cột 9 chứa Czapek doxcanh vừa một mình. Microplate được ủ tại 28 ° Ctrong 7 ngày. Các nồng độ thấp nhất, ức chế sự tăng trưởngmỗi bài kiểm tra nấm được xác định từ mỗi hàng được chỉ địnhnhư sự MICs chống nấm thử nghiệm tương ứng.Mặt khác, chất tinh khiết assayed cũngĐối với hoạt tính kháng khuẩn bằng phương pháp microdilution. Thử nghiệmvi khuẩn đã được ủ trong một canh dinh dưỡng (Difco) ở 37 ° CĐối với 12 h và sau đó bị đình chỉ trong canh dinh dưỡng tương tự. Cácmật độ tế bào vi khuẩn được điều chỉnh tại 108tế bào mL-1. Inthecùng một cách như nấm, giải pháp kiểm tra cho các hoạt động kháng khuẩnkhảo nghiệm đã chuẩn bị sẵn sàng và dispensed trong mỗi một micro-tấm. Mật độ tế bào vi khuẩn trong mỗi tốt là 107tế bào mL-1lúc đầu. Các điều kiện khác đã được tương tự như những người chonấm. Sau khi microplate được ủ ở 37 ° C trong 2 ngày,Các nồng độ thấp nhất, ức chế sự phát triển của mỗi ngườikiểm tra vi khuẩn được xác định từ mỗi hàng được bổ nhiệm làmMICs chống lại vi khuẩn tương ứng nghiệm.KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬNCác hoạt động chống nấm của mỗi phần nhỏ thu đượctrong quá trình cô lập.Trong quá trình cô lập,mỗi phần lấy tại bước khác nhau đã được assayed chohoạt động chống nấm chống lạiAspergillus niger. Nhưtóm tắt trong con số 1A, một mẫu dầu thô thu được bằng cáchAcetone trích)9) cho thấy một hoạt động được đánh dấu. Sau đó, điều nàyvấn đề dầu thô tiếp tục được tinh khiết. Acetone thôchiết xuất được chiết xuất bằng bốn các dung môi: nước,n-hexane, EtOAc hoặc BuOH. Các phần phân đoạn của bốn đãassayed cho các hoạt động chống nấm. Như minh hoạ trong hình 1A,EtOAc cô phần ((tiếng Việt)2) cho thấy ức chế nhất đánh dấu-ing có hiệu lực, mặc dù hypha thử nghiệm phục hồi tăng trưởng của nótỷ lệ trong vòng 20 phút. Phần EtOAc này được áp dụng chomột cột silica gel, và do đó ba phân số (Fr-A, Fr-B, và Fr-C) đã thu được. Trong số đó, Fr-Bđã được tìm thấy được hoạt động và cho thấy đánh dấuCác tác dụng ức chế chống lạiA. nigertại 1.25ÌgmL-1(Hình1B;). Tỷ lệ tăng trưởng che hoàn toàn ức chếbởi Fr-B nồng độ 12,5ÌgmL-1(Hình 1B;O). Fr-B được chịu các HPLC giai đoạn đảo ngược đểxác nhận độ tinh khiết. Vấn đề cuối cùng thu được chính-Các hoạt động tương tự như tained (hình 1B;9) để Fr-B.Giải cấu trúc.Chất tinh khiếtdầu không màu. Đỉnh cao phân tử ion [M+] xuất hiện tạim/z252 EIMS phân tích. Nhân sự (độ phân giải cao)-EIMSphân tích các đỉnh này đã chỉ ra rằngm/zlà 252.1120. Acông thức phân tử khả thi được suy đoán làC17H16O2. Các13Phổ C NMR trong CDCl3giải phápHiển thị 13 carbon tín hiệu, bốn trong số đó ()‰130.0,128.9, 115.4 và 115.1) dường như là của đôicường độ.1Quang phổ H NMR xác nhận sự hiện diện củatám vòng thơm proton hiện nay là AA′BB′Hệ thống)‰7,19 [2 H], 7,12 [2 H], 6.81 [2 H] và 6,80 [2 H]).Những quan sát hai gợi ý sự hiện diện của haiCác nhóm benzen para-disubstituted trong cấu trúc củaCác hợp chất. Sự hiện diện của 1,3-disubstituted 1,4-Hệ thống pentadiene được phân công từ ấm cúng spec-Trum (cacbon-proton và proton-proton). CácJgiá trị(11,0 Hz) của các trái phiếu đôi 1,2 1,4-pentadieneHệ thống‰6.54 Hz (H-1) và‰5.70 Hz (H-2)chỉ số hóa học lập thể cis. Một ban nhạc IR tại 3350cm-1và hai proton)‰4,89 Hz) trao đổi với haideuteriums d2O chỉ ra sự hiện diện của hydroxylNhóm. Sự thay đổi hóa học của những trao đổi pro-tấn gợi ý rằng các nhóm chức hiđrôxyl chiếmNhóm hydroxyphenyl. Do đó, sự hiện diện com-Pound đã được xác định là)Z) - 1,3 - bis (4 - hydroxyphen -YL) - 1,4 - pentadiene (hình 2).

Kết quả (Việt) 2:

bào tử, và DMSO, trong khi cột 9 chứa Czapek DOX
nước dùng vừa một mình. Các microplate được ủ ở 28 ° C
trong 7 ngày. Nồng độ thấp nhất mà ức chế sự tăng trưởng
của từng loại nấm kiểm tra xác định từ mỗi hàng đã được giao
như MIC chống nấm thử nghiệm tương ứng.
Mặt khác, vấn đề tinh khiết đã được khảo nghiệm cũng
cho hoạt tính kháng khuẩn bằng phương pháp pha loãng. Kiểm tra
vi khuẩn được ủ trong một canh dinh dưỡng (Difco) ở 37 ° C
trong 12 h và sau đó lơ lửng trong nước dùng chất dinh dưỡng như nhau. Các
mật độ tế bào vi khuẩn đã được điều chỉnh ở mức 10
8
tế bào ml
-
1
.Inthe
cùng một cách như nấm, các giải pháp thử nghiệm cho hoạt tính kháng khuẩn
khảo nghiệm đã được chuẩn bị và phân phát trong mỗi giếng của vi
tấm. Mật độ tế bào vi khuẩn trong mỗi giếng là 10
7
tế bào ml
-
1
lúc đầu. Các điều kiện khác là như đối với
nấm. Sau khi microplate được ủ ở 37 ° C trong 2 ngày,
nồng độ thấp nhất mà ức chế sự tăng trưởng của từng
loại vi khuẩn thử nghiệm xác định từ mỗi hàng đã được giao như
MIC chống lại các vi khuẩn thử nghiệm tương ứng.
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Hoạt động chống nấm của Mỗi Fraction Thu được
trong khóa học của cô đơn.
trong quá trình cô lập,
mỗi phần nhỏ thu được ở các bước khác nhau đã được kiểm định về
hoạt tính kháng nấm của nó đối với
Aspergillus niger
.Như
tóm tắt trong hình 1A, một mẫu thô thu được bằng
acetone chiết xuất (
9
) cho thấy một hoạt động đáng kể. Sau đó, điều này
vấn đề thô tinh chế tiếp. Acetone thô
chiết xuất được chiết xuất với bốn dung môi: nước,
n
-
hexan, EtOAc, hoặc BuOH. Bốn phân số đã được
kiểm định về hoạt tính kháng nấm. Như thể hiện trong hình 1A,
các EtOAc phần (
2
) cho thấy rõ rệt nhất inhibit-
ing hiệu lực, mặc dù các sợi nấm thử nghiệm phục hồi tăng trưởng của nó
tỷ lệ trong vòng 20 phút. Phần EtOAc này được áp dụng cho
một cột gel silica, và hậu quả là ba số thập phân (Fr-
A, Cha-B, và Cha-C) thu được. Trong số đó, Cha-B
đã được tìm thấy là tích cực nhất và cho thấy dấu
hiệu ức chế chống lại
A. niger
1,25
Ì
GML
-
1
(Hình
1B;
?
). Tốc độ tăng trưởng sợi nấm đã hoàn toàn bị ức chế
bởi nồng độ Fr-B 12,5
Ì
GML
-
1
(Hình 1B;
O
). Fr-B đã được chịu các HPLC giai đoạn đảo ngược để
xác nhận độ tinh khiết. Vấn đề cuối cùng thu được duy
trì hoạt động tương tự (Hình 1B;
9
) đến Cha-B.
Làm sáng tỏ cấu.
Các vấn đề tinh khiết là
loại dầu không màu. Đỉnh ion phân tử [M
+
] xuất hiện tại
m
/
z
252 trong phân tích EIMS. Nhân sự (độ phân giải cao) -EIMS
phân tích của đỉnh này cho thấy
m
/
z
là 252,1120. Một
công thức phân tử có tính khả thi đã được suy đoán như là
C
17
H
16
O
2
. Các
13
phổ C NMR trong CDCl
3
giải pháp
hiển thị 13 tín hiệu carbon, bốn trong số đó (
‰
130,0,
128,9, 115,4 và 115,1) dường như là của đôi
cường độ.
1
H NMR xác nhận sự hiện diện của
tám proton vòng thơm hiện nay là AA
'
BB
'
hệ thống (
‰
7,19 [2H], 7.12 [2H], 6.81 [2H], và 6.80 [2H]).
hai quan sát cho thấy sự hiện diện của hai
nhóm benzen para-disubstituted trong cấu trúc của
các hợp chất . Sự hiện diện của 1,3-disubstituted 1,4
hệ thống pentadiene được giao từ quang phổ COSY
trum (carbon
-
proton và proton
-
proton). Các
J
giá trị
(11,0 Hz) của trái phiếu 1,2-đôi trong 1,4-pentadiene
hệ thống tại
‰
6.54 Hz (H-1) và
‰
5.70 Hz (H-2) là
biểu hiện của một lập thể cis. Một ban nhạc IR ở 3350
cm
-
1
và hai proton (
‰
4,89 Hz) trao đổi với hai
deuteriums của D
2
O chỉ ra sự hiện diện của hydroxyl
nhóm. Sự thay đổi hóa học của các trình trao đổi
tấn cho rằng các nhóm hydroxyl cấu thành
các nhóm hydroxyphenyl. Vì vậy, các đồng hiện
bảng Anh đã được xác định là (
Z
) -1,3-bis (4-hydroxyphen-
YL) -1,4-pentadiene (Hình 2).