Samples are prepared using standard

Samples are prepared using standard protocols for protein analysis by 2DGE and the protein concentration determined.
The proteins are precipitated and resuspended, at a concentration of approximately 6 g/l, in a compatible buffer for labelling.
2. Individual protein samples are labelled using the Cy3 or Cy5 dyes in a minimal labelling protocol; 50 ug of protein are labelled according to the manufacturer’s protocol. A pooled sample, prepared by mixing equal amounts of protein for all samples in the experiment, is labelled with the Cy2 dye.
3. Following labelling, the samples are loaded to immobilised pH gradient (IPG) gel strips. Specifically, Cy3- and Cy5-labelled
samples along with an aliquot of the Cy2-labelled pool sample are loaded to each IPG gel.
4. The IPG gel strips are focused on an IPGPhor instrument (GE Healthcare) before being transferred to a Criterion precast slab gel (Bio-Rad Ltd) for the second dimension electrophoresis step using our standard equilibration buffers [4].
5. Finally, the gels are scanned using an Ettan DIGE Imager (GE Healthcare) to image each gel to detect the Cy2-, Cy3- and Cy5-labelled proteins. The image files are transferred to Progenesis SameSpots, Version 4.2 (Nonlinear Dynamics) for gel alignment, spot detection and statistical analysis. Data processing uses the in-built routines available within the Progenesis SameSpots software.

Kết quả (Việt) 1:

Các mẫu được chuẩn bị bằng cách sử dụng giao thức tiêu chuẩn để phân tích protein bởi 2DGE và nồng độ protein được xác định.Các protein được kết tủa và resuspended, lúc một nồng độ khoảng 6 g/l, trong một bộ đệm tương thích cho nhãn mác.2. cá nhân protein mẫu được dán nhãn sử dụng thuốc nhuộm Cy3 hoặc Cy5 trong một giao thức labelling tối thiểu; 50 ug của protein được dán nhãn theo giao thức của nhà sản xuất. Một mẫu tới, chuẩn bị bằng cách trộn một lượng bằng nhau của protein cho tất cả các mẫu trong thử nghiệm, được dán nhãn với thuốc nhuộm Cy2.3. sau nhãn mác, các mẫu được tải đến dải gel (IPG) gradient bất pH. Cụ thể, Cy3 - và Cy5-nhãnmẫu cùng với một aliquot ngoài trời với nhãn hiệu Cy2 mẫu được nạp để mỗi IPG gel.4. các dải gel IPG tập trung vào một công cụ IPGPhor (GE Healthcare) trước khi được chuyển giao cho một tiêu chí precast tấm gel (công ty TNHH Bio Rad) cho bước thứ hai kích thước electrophoresis bằng cách sử dụng của chúng tôi bộ đệm tiêu chuẩn equilibration [4].5. cuối cùng, các gel được quét bằng cách sử dụng một Ettan DIGE Imager (GE Healthcare) để hình ảnh mỗi gel để phát hiện các Cy2-, Cy3 - và dán nhãn Cy5 protein. Các tập tin hình ảnh được chuyển đến Progenesis SameSpots, phiên bản 4.2 (động lực phi tuyến) cho gel chỉnh, vị trí phát hiện và phân tích thống kê. Xử lý dữ liệu sử dụng trong xây dựng thói quen có sẵn trong phần mềm Progenesis SameSpots.

Kết quả (Việt) 2:

Các mẫu được chuẩn bị sẵn sàng sử dụng các giao thức chuẩn để phân tích protein bởi 2DGE và nồng độ protein được xác định.
Các protein được kết tủa và lơ lửng, ở nồng độ khoảng 6 g / l, trong một bộ đệm tương thích cho việc ghi nhãn.
2. Mẫu protein cá nhân được dán nhãn bằng cách sử dụng thuốc nhuộm Cy3 hoặc Cy5 trong một giao thức ghi nhãn tối thiểu; 50 ug protein được dán nhãn theo giao thức của nhà sản xuất. Một mẫu gộp lại, chuẩn bị bằng cách trộn một lượng bằng nhau của protein cho tất cả các mẫu trong thí nghiệm, được dán nhãn với thuốc nhuộm CY2.
3. Sau ghi nhãn, các mẫu được nạp vào dải gel cố định Gradient pH (IPG). Cụ thể, Cy3- và Cy5 nhãn
mẫu cùng với phần nổi của mẫu hồ CY2 nhãn được nạp vào mỗi gel IPG.
4. Các dải gel IPG đang tập trung vào một công cụ IPGPhor (GE Healthcare) trước khi được chuyển giao cho một gel Tiêu chí đúc sẵn tấm (Bio-Rad Ltd) cho bước chiều điện thứ hai sử dụng bộ đệm cân bằng tiêu chuẩn của chúng tôi [4].
5. Cuối cùng, gel được quét bằng một Ettan DIGE Imager (GE Healthcare) để hình ảnh mỗi gel để phát hiện các Cy2-, Cy3- và protein Cy5-dán nhãn. Hình ảnh được chuyển giao cho Progenesis SameSpots, phiên bản 4.2 (phi tuyến Dynamics) cho sự liên kết gel, phát hiện tại chỗ và phân tích thống kê. Xử lý dữ liệu sử dụng các thói quen trong xây dựng có sẵn trong phần mềm Progenesis SameSpots.