Ecient production of recombinant b

Ecient production of recombinant barley
a-amylase has been achieved in Aspergillus niger. The
cDNA encoding a-amylase isozyme 1 (AMY1) and its
signal peptide was placed under the control of the Aspergillus
nidulans glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase
(gpd) promoter and the A. nidulans trpC gene
terminator. Secretion yields up to 60 mg/l were obtained
in media optimised for a-amylase activity and low protease
activity. The recombinant AMY1 (reAMY1) was
puri®ed to homogeneity and found to be identical to
native barley AMY1 with respect to size, pI, and immunoreactivity.
N-terminal sequence analysis of the recombinant
protein indicated that the endogenous plant
signal peptide is correctly processed in A. niger. Electrospray
ionisation/mass spectrometry gave a molecular
mass for the dominant form of 44 960 Da, in accordance
with the loss of the LQRS C-terminal residues;
glycosylation apparently did not occur. The activities of
recombinant and native barley a-amylases are very
similar towards insoluble and soluble starch as well as 2-
chloro-4-nitrophenol b-D-maltoheptaoside and amylose
(degree of polymerisation ˆ 17). Barley a-amylase is
the ®rst plant protein eciently secreted and correctly
processed by A. niger using its own signal sequence.

Kết quả (Việt) 1:

E gói sản xuất tái tổ hợp lúa mạchđã đạt được một amylase Aspergillus Niger. CáccDNA mã hóa một amylase isozyme 1 (AMY1) và cáctín hiệu peptide được đặt dưới sự kiểm soát của Aspergillusnidulans glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GDP) promoter và gen trpC A. nidulanskẻ hủy diệt. Tiết sản lượng lên đến 60 mg/l đã thu đượcphương tiện truyền thông tối ưu hóa cho hoạt động một amylase và protease thấphoạt động. AMY1 tái tổ hợp (reAMY1)Puri® ed cho tính đồng nhất và tìm thấy giống hệt nhau đểnguồn gốc lúa mạch AMY1 đối với kích thước, pI, và immunoreactivity.N-terminal tự phân tích của việc tái tổ hợpprotein chỉ ra rằng thực vật nội sinhtín hiệu peptide được xử lý một cách chính xác ở A. niger. Electrosprayion/mass spectrometry đã đưa ra một phân tửkhối lượng mẫu 44 960 Da, phù hợp, thống trịvới sự mất mát của dư lượng LQRS C-ga;Glycosylation dường như đã không xảy ra. Các hoạt động củalúa tái tổ hợp và bản xứ a-amylase có rấttương tự như đối với tinh bột hòa tan và không hòa tan cũng như 2-chloro-4-nitrophenol b-D-maltoheptaoside và amyloza(mức độ polymerisation 17). Lúa mạch a-amylase làCác® rst protein thực vật e ciently tiết ra và chính xácxử lý bởi A. niger sử dụng chuỗi tín hiệu riêng của mình.

Kết quả (Việt) 2:

E ?? sản xuất cient lúa mạch tái tổ hợp
một-amylase đã đạt được trong Aspergillus niger. Các
cDNA mã hóa-amylase isozyme 1 (AMY1) và các
peptide tín hiệu đã được đặt dưới sự kiểm soát của Aspergillus
nidulans glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase
(GPD) promoter và gen A. nidulans trpC
terminator. Sản lượng tiết lên đến 60 mg / l thu được
trong phương tiện truyền thông tối ưu cho một-amylase hoạt động và protease thấp
hoạt động. Các AMY1 tái tổ hợp (reAMY1) được
puri®ed đến tính đồng nhất và tìm thấy là giống hệt nhau để
AMY1 lúa bản địa về kích thước, pI, và immunoreactivity với.
N-terminal phân tích trình tự tái tổ hợp
protein chỉ ra rằng nội sinh thực vật
peptide tín hiệu được xử lý một cách chính xác trong A. niger. Electrospray
ion hóa / khối phổ đã đưa ra một phân tử
khối lượng cho các hình thức chi phối của 44 960 Đa, phù hợp
với sự mất mát của các dư lượng LQRS C-thiết bị đầu cuối;
glycosyl hóa dường như không xảy ra. Các hoạt động của
lúa mạch tái tổ hợp và bản địa một-amylase là rất
tương tự như đối với tinh bột không hòa tan và hòa tan cũng như 2-
chloro-4-nitrophenol BD-maltoheptaoside và amylose
(mức độ polyme hóa ?? 17). Lúa mạch một-amylase là
các ®rst protein thực vật e ?? ciently tiết và chính xác
xử lý bằng A. niger sử dụng trình tự tín hiệu riêng của mình.