After induction, 1 million yeast ce

After induction, 1 million yeast cells were processed for individual analysis. The cells were washed with PBS containing 1% BSA (PBSB). Surface expression of the displayed proteins with a C-terminal c-Myc tag was detected using anti-c-Myc chicken antibody (Life Technolo-gies) at a pre-determined dilution (1:400 in PBSB) incubated for 1h at 4°C and subsequently stained with Alexa
Fluor-488 goat anti-chicken antibody (Life Technologies) at a predetermined dilution (1:300 in PBSB) for 1 h at 4°C,protected from light. Binding titration of 2077Hu2 with the displayed HA1 fragments was performed to determine the antibody epitope. The induced cells were incubated with varying concentrations of 2077Hu2 for 1 h at 4°C, and subsequently stained with Alexa Fluor-488 goat
anti-human antibody (Life Technologies) at a pre-determined dilution (1:400 in PBSB), as mentioned above. After washing, the fluorescence from the stained cells was detected by flow cytometric analysis (BD FACS-Aria, BDFACS-Diva Cytometry Software). The binding titration data were fit as described previously using the following equation [25]:

Kết quả (Việt) 2:

Sau khi cảm ứng, 1 triệu tế bào nấm men được chế biến để phân tích cá nhân. Các tế bào được rửa bằng PBS có chứa 1% BSA (PBSB). Biểu hiện bề mặt của protein hiển thị với từ khóa c-Myc C-thiết bị đầu cuối đã được phát hiện bằng cách sử dụng anti-c-Myc kháng thể gà (Life Technolo-Gies) ở độ pha loãng được xác định trước (1: 400 trong PBSB) ủ trong 1h ở 4 ° C và sau đó nhuộm màu với Alexa
Fluor-488 dê chống gà kháng thể (Life Technologies) ở độ pha loãng được xác định trước (1: 300 trong PBSB) trong 1 giờ ở nhiệt độ 4 ° C, tránh ánh sáng. Binding chuẩn độ 2077Hu2 với những mảnh vỡ HA1 hiển thị đã được thực hiện để xác định các epitope kháng thể. Các tế bào gây ra được ủ với nồng độ của 2077Hu2 khác nhau cho 1 h ở 4 ° C, và sau đó nhuộm màu với Alexa Fluor-488 dê
kháng thể chống con người (Life Technologies) ở độ pha loãng được xác định trước (1: 400 trong PBSB), như đề cập ở trên. Sau khi rửa, huỳnh quang từ các tế bào nhuộm màu được phát hiện bằng cách phân tích dòng chảy cytometric (BD-FACS Aria, BDFACS-Diva Cytometry Software). Các dữ liệu chuẩn độ ràng buộc được phù hợp như được mô tả trước đó bằng cách sử dụng phương trình sau [25]: