Mutations in the oncogenes KRAS and

Mutations in the oncogenes KRAS and BRAF have been identified as prognostic factors in patients with colorectal diseases and as predictors of negative outcome in epidermal growth factor receptor–targeted therapies. Therefore, accurate mutation detection in both genes, KRAS and BRAF, is of increasing clinical relevance. We aimed at optimizing allele-specific real-time PCR assays for the detection of common mutations in KRAS and the BRAF Val600Glu mutation using allele-specific PCR primers for allelic discrimination and probes (TaqMan) for quantification. Each reaction mix contains a co-amplified internal control to exclude false-negative results.

Allele-specific real-time PCR assays were evaluated on plasmid model systems providing a mutation detection limit of 10 copies of mutant DNA in proportions as low as 1% of the total DNA. Furthermore, we analyzed 125 DNA samples prepared from archived, formalin-fixed, paraffin-embedded colorectal carcinomas and compared results with those obtained from direct-sequence analysis. All mutations determined by sequence analysis could be recovered by allele-specific PCR assays. In addition, allele-specific PCR assays clearly identified three additional samples affected by a mutation. We propose these allele-specific real-time PCR assays as a low-cost and fast diagnostic tool for accurate detection of KRAS and BRAF mutations that can be applied to clinical samples.

Activating mutations in the genes encoding KRAS (Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog) and BRAF (v-raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1) are early events in colorectal cancer development. KRAS mutations lead to constitutive activation of the RAS/RAF/MAPK/ERK pathway and have been reported to occur in approximately 30% to 40% of colorectal cancer cases.1,2 Genetic and biochemical evidence indicates that BRAF is the principal downstream effector of KRAS.3 Activating mutations in KRAS and BRAF may be independent risk factors for reduced overall survival in patients with colorectal cancer.1,4–6 Moreover, the association of KRAS mutations and resistance to anti–epidermal growth factor receptor treatment, either cetuximab or panitumumab, was confirmed in large retrospectively evaluated phase III studies.7,8 Also, a BRAF Val600Glu mutation has been associated with resistanc

Kết quả (Việt) 1:

Đột biến trong oncogenes KRAS và BRAF đã được xác định là các yếu tố prognostic ở bệnh nhân bị bệnh kết tràng và như dự đoán của các kết quả tiêu cực trong phương pháp điều trị thụ thể-nhắm mục tiêu biểu bì các yếu tố tăng trưởng. Vì vậy, chính xác đột biến phát hiện trong cả hai gen, KRAS và BRAF, là ngày càng tăng mức độ phù hợp lâm sàng. Chúng tôi nhằm tối ưu hóa thời gian thực Đảng Cộng sản Romania allele-cụ thể thử nghiệm để phát hiện các đột biến phổ biến ở KRAS và đột biến BRAF Val600Glu bằng cách sử dụng cụ thể allele PCR lớp lót cho allelic phân biệt đối xử và đầu dò (TaqMan) để định lượng. Mỗi kết hợp phản ứng có một kiểm soát nội bộ khuếch đại đồng để loại trừ các kết quả âm tính sai.Allele cụ thể thời gian thực Đảng Cộng sản Romania thử nghiệm đã được đánh giá trên plasmid mô hình hệ thống cung cấp một giới hạn phát hiện đột biến của 10 bản sao của đột biến DNA trong tỷ lệ thấp nhất là 1% của tất cả DNA. Hơn nữa, chúng tôi phân tích 125 mẫu DNA chuẩn bị từ lưu trữ, cố định bằng formalin, parafin nhúng vào kết tràng carcinomas và so sánh kết quả với những người thu được từ phân tích trình tự trực tiếp. Tất cả các đột biến được xác định bằng cách phân tích chuỗi có thể được phục hồi bởi dành riêng cho allele PCR thử nghiệm. Ngoài ra, dành riêng cho allele PCR thử nghiệm xác định rõ ràng ba mẫu bổ sung bị ảnh hưởng bởi một đột biến. Chúng tôi đề xuất các thử nghiệm PCR allele cụ thể thời gian thực như một công cụ rẻ và nhanh chẩn đoán cho các phát hiện chính xác của đột biến KRAS và BRAF có thể được áp dụng cho mẫu lâm sàng.Kích hoạt đột biến trong gen mã hóa KRAS (Kirsten chuột sarcoma virus sự homolog) và BRAF (v-raf các sarcoma virus sự homolog B1) là sự kiện đầu trong phát triển ung thư kết tràng. KRAS đột biến dẫn đến cơ kích hoạt của con đường RAS/RAF/MAPK/ERK và đã được báo cáo xảy ra trong khoảng 30% đến 40% của ung thư kết tràng cases.1,2 di truyền và sinh hóa bằng chứng cho thấy rằng BRAF là effector hạ nguồn chính của KRAS.3 kích hoạt các đột biến ở KRAS và BRAF có thể là độc lập các yếu tố nguy cơ cho giảm tổng thể tồn tại ở những bệnh nhân với kết tràng cancer.1 , Hơn nữa 4-6, các Hiệp hội của KRAS đột biến và sức đề kháng với điều trị thụ thể yếu tố tăng trưởng chống-biểu bì, cetuximab hoặc panitumumab, đã được xác nhận trong giai đoạn đánh giá trang lớn III studies.7,8 cũng, một đột biến BRAF Val600Glu đã được liên kết với resistanc