Separation of molecules by gel elec

Separation of molecules by gel electrophoresis
Electrophoresis, like ion-exchange chromatography (see p. 30), is a technique that uses differences in electrical charge to separate the molecules in a mixture. DNA molecules have negative charges, and so when placed in an electric field they migrate toward the positive pole (Figure 4.12a). The rate of migration of a molecule depends on two factors, its shape and its charge-to-mass ratio. Unfortunately, most DNA molecules are the same shape and all have very similar charge-to-mass ratios. Fragments of different sizes cannot therefore be separated by standard electrophoresis.
The size of the DNA molecule does, however, become a factor if the electro- phoresis is performed in a gel. A gel, which is usually made of agarose, polyacrylamide, or a mixture of the two, comprises a complex network of pores, through which the DNA molecules must travel to reach the positive electrode. The smaller the DNA mole- cule, the faster it can migrate through the gel. Gel electrophoresis therefore separates DNA molecules according to their size (Figure 4.12b).
In practice the composition of the gel determines the sizes of the DNA molecules that can be separated. A 0.5 cm thick slab of 0.5% agarose, which has relatively large pores, would be used for molecules in the size range 1–30 kb, allowing, for example, molecules of 10 and 12 kb to be clearly distinguished. At the other end of the scale, a very thin (0.3 mm) 40% polyacrylamide gel, with extremely small pores, would be used to separate much smaller DNA molecules, in the range 1–300 bp, and could distinguish molecules differing in length by just a single nucleotide.

Kết quả (Việt) 1:

Tách các phân tử của gel electrophoresisElectrophoresis, như sắc ký trao đổi ion (xem trang 30), là một kỹ thuật sử dụng sự khác biệt về phí điện để tách các phân tử trong một hỗn hợp. Phân tử DNA có chi phí tiêu cực, và do đó, khi đặt trong một điện trường họ di chuyển về phía cực tích cực (hình 4.12a). Tỷ lệ di cư của một phân tử phụ thuộc vào hai yếu tố, hình dạng và tỷ lệ phí và khối lượng của nó. Thật không may, hầu hết các phân tử DNA là hình dạng tương tự và có tỷ lệ phí hàng loạt rất giống nhau. Mảnh vỡ của các kích cỡ khác nhau do đó không thể được tách ra bởi electrophoresis tiêu chuẩn.Kích thước của phân tử ADN, Tuy nhiên, trở thành một yếu tố nếu electro-phoresis được thực hiện trong một gel. Một gel, thường được làm agarose, polyacrylamide hoặc một hỗn hợp của hai, bao gồm một mạng lưới phức tạp các lỗ chân lông, mà qua đó các phân tử ADN phải đi du lịch để tiếp cận các điện cực tích cực. Nhỏ hơn các DNA nốt ruồi-cule, nhanh hơn nó có thể di chuyển qua các gel. Gel electrophoresis do đó chia tách các phân tử ADN theo kích thước của họ (hình 4.12b).Trong thực tế, các thành phần của gel sẽ xác định các kích thước của các phân tử DNA có thể được tách ra. Một tấm dày cách 0.5 cm agarose 0,5%, trong đó có các lỗ chân lông tương đối lớn, sẽ được sử dụng cho các phân tử kích thước khoảng 1 – 30 kb, cho phép, ví dụ, các phân tử của 10 và 12 kb phân biệt rõ ràng. Ở đầu kia của quy mô, một rất mỏng (0,3 mm) 40% polyacrylamide gel, với các lỗ chân lông cực nhỏ, sẽ được sử dụng để tách các phân tử ADN nhỏ hơn nhiều, trong phạm vi 1-300 bp, và có thể phân biệt với các phân tử khác nhau trong chiều dài của chỉ là một nucleotide.

Kết quả (Việt) 2:

Tách phân tử bằng điện di gel
điện di, như sắc ký trao đổi ion (xem tr. 30), là một kỹ thuật sử dụng sự khác biệt về điện tích để tách các phân tử trong hỗn hợp. Phân tử DNA có điện tích âm, và vì vậy khi được đặt trong một điện trường, chúng di chuyển về phía dương cực (hình 4.12a). Tỷ lệ di cư của một phân tử phụ thuộc vào hai yếu tố, hình dạng của nó và tỷ lệ phí-to-khối lượng của nó. Thật không may, hầu hết các phân tử DNA là những hình giống nhau và tất cả đều có rất tương tự như điện tích trên hàng loạt các tỷ lệ. Những mảnh vỡ của các kích cỡ khác nhau có thể không do đó được tách bằng điện tiêu chuẩn.
Kích thước của phân tử ADN không, tuy nhiên, trở thành một yếu tố nếu phoresis điện phân được thực hiện trong một gel. Một gel, thường được làm bằng agarose, polyacrylamide, hoặc hỗn hợp của hai, bao gồm một mạng lưới phức tạp của các lỗ chân lông, thông qua đó các phân tử DNA phải đi để đạt được các điện cực dương. Các nhỏ hơn cule DNA mole-, nhanh hơn nó có thể di chuyển qua gel. Do đó điện di gel tách phân tử DNA theo kích thước của chúng (hình 4.12b).
Trong thực tế các thành phần của gel xác định kích thước của các phân tử DNA có thể được tách ra. Một 0,5 cm dày tấm 0,5% agarose, trong đó có lỗ chân lông tương đối lớn, sẽ được sử dụng cho các phân tử trong phạm vi kích thước 1-30 kb, cho phép, ví dụ, các phân tử của 10 và 12 kb được phân biệt rõ ràng. Ở đầu kia của quy mô, rất mỏng (0,3 mm) 40% polyacrylamide gel, với các lỗ rất nhỏ, sẽ được sử dụng để tách các phân tử DNA nhỏ hơn nhiều, trong khoảng 1-300 bp, và có thể phân biệt được các phân tử khác nhau về chiều dài bởi chỉ cần một nucleotide đơn.