Cell surface K5 binding proteins. A

Cell surface K5 binding proteins. A, Coomassie-stained gel of cell surface proteins bound to an immobilized biotin-PRKLYDY peptide. The bound proteins were eluted off with excess rK5. Lane A, eluent from K5 peptide column. Tryptic peptides from the isolated bands were analyzed by mass spectrometric analysis. The major protein was identified as GRP78. Lane B, molecular weight standards. B, avidin-HRP blots of biotinylated cell surface proteins isolated by affinity purification with immobilized S-tag K5. Surface proteins on 4 × 106 endothelial cells were labeled with NHS-biotin. The cells were washed and lysed. The biotinylated surface proteins were isolated with avidin-agarose beads and eluted from the beads with excess streptavidin. Purified cell surface lysates were mixed with S-tag K5 for 1 hour at room temperature. S-tag K5 bound proteins were precipitated with S-protein agarose. Lane A, bound proteins were eluted with excess rK5; lane B, bound proteins were eluted with excess PRKLYDY peptide. Eluted proteins were visualized with avidin-HRP and a chemiluminescent substrate. Mass spectrometric analysis identified the bands as GRP78 and GRP94.

Kết quả (Việt) 1:

Tế bào bề mặt K5 ràng buộc protein. Một, gel nhuộm màu Coomassie của các tế bào bề mặt protein ràng buộc để một peptide hỏng biotin-PRKLYDY. Các protein ràng buộc được eluted ra với dư thừa rK5. Lane A, eluent từ K5 peptide cột. Peptide tryptic từ các ban nhạc cô lập được phân tích bằng cách phân tích khối lượng phổ. Protein chính được xác định là GRP78. Lane B, tiêu chuẩn trọng lượng phân tử. B, avidin-HRP blots của biotinylated tế bào bề mặt protein bị cô lập bởi ái lực làm sạch với hỏng S-tag K5. Protein bề mặt trên 4 × 106 tế bào nội mô được dán nhãn với NHS-biotin. Các tế bào đã được rửa sạch và phân. Biotinylated bề mặt protein bị cô lập với hạt avidin-agarose và eluted từ các hạt với dư thừa streptavidin. Tinh khiết tế bào bề mặt lysates được trộn lẫn với S-tag K5 trong 1 giờ ở nhiệt độ phòng. S-tag K5 protein ràng buộc được kết tủa với S-protein agarose. Lane A, ràng buộc protein được eluted với rK5 dư thừa; Lane B, ràng buộc protein được eluted với dư thừa PRKLYDY peptide. Eluted protein được hình dung với avidin-HRP và một chất nền chemiluminescent. Phổ khối lượng phân tích xác định các ban nhạc như GRP78 và GRP94.

Kết quả (Việt) 2:

K5 bề mặt tế bào ràng buộc protein. A, Coomassie nhuộm gel của protein bề mặt tế bào liên kết với một biotin-PRKLYDY peptide cố định. Các protein ràng buộc được tách rửa đầu với dư thừa rK5. Một làn, rửa giải từ K5 cột peptide. Peptide Tryptic từ các ban nhạc độc lập đã được phân tích bằng cách phân tích phổ khối lượng. Protein chính được xác định là GRP78. Lane B, tiêu chuẩn trọng lượng phân tử. B, avidin HRP-blot protein bề mặt tế bào biotinylated bị cô lập bởi lọc mối quan hệ với bất động S-tag K5. Protein bề mặt trên 4 × 106 tế bào nội mô được dán nhãn với NHS-biotin. Các tế bào được rửa sạch và ly giải. Các protein bề mặt biotinylated được phân lập với hạt avidin-agarose và tách rửa từ các hạt với streptavidin dư thừa. Lysates bề mặt tế bào tinh khiết được trộn với K5 S-tag trong 1 giờ ở nhiệt độ phòng. Protein S-tag K5 ràng buộc được kết tủa với agarose S-protein. Làn đường A, protein ràng buộc được tách rửa bằng thừa rK5; đường B, protein ràng buộc được tách rửa bằng peptide PRKLYDY dư thừa. Protein tách rửa được hình tượng với avidin HRP-và một chất nền chemiluminescent. Phân tích phổ khối lượng xác định các ban nhạc như GRP78 và GRP94.