(Table 2). Each 20 μl PCR reaction

(Table 2). Each 20 μl PCR reaction consisted of 3 μl pre-amplified

DNA, 50 ng labelled EcoRI+3 primer, 50 ng unlabelled EcoRI+3

primer, 50 ng unlabelled MseI+3 primer, 2 mM dNTP, 0.1 μl Taq

DNA polymerase (10 units/μl) and 2 μl PCR buffer (Perkin Elmer,

USA). The following cycle profile ensured optimal primer selec-
tivity: 1 cycle of 30 s at 94°C, 30 s at 65°C, 60 s at 72°C followed

by 11 cycles of 0.7°C lower annealing temperature each cycle and

23 cycles of 30 s at 94°C, 30 s at 56°C and 60 s at 72°C.

Gel electrophoresis

The PCR product was mixed with 20 μl formamide loading buffer

(98% formamide, 10 mM EDTA, 0.005% each of xylene cyanol FF

and bromophenol blue) and denatured by incubation for 5 min at

90°C. The 6% polyacrylamide gels were prepared by mixing 65 ml

6% Easigel (Scotlab) and 450 μl 10% ammonium persulphate, de-
gassing and adding 20 μl TEMED. The gels were poured at least 4 h

before use and pre-run at 80 W for 30 min. Samples of 5 μl were

loaded per track and gels were run for 1.45 h at 80 W, transferred to

3 MM chromatography paper and dried on a gel drier for 2 h at 80°C.

Gels were exposed to X-ray film for about 4–7 days.

Kết quả (Việt) 1:

(Bảng 2). Mỗi phản ứng PCR 20 μl bao gồm 3 μl khuếch đại trước

DNA, 50 ng với nhãn hiệu EcoRI 3 mồi, 50 ng unlabelled EcoRI 3

mồi, 50 ng unlabelled MseI 3 mồi, 2 mM dNTP, cách 0.1 μl Taq

DNA polymerase (10 đơn vị/μl) và 2 μl PCR đệm (Perkin Elmer,

Hoa Kỳ). Tiểu sử chu kỳ sau đảm bảo tối ưu mồi selec-
cao: 1 chu kỳ 30 s tại 94° C, 30 s ở 65° C, 60 s tại 72° C tiếp là

bởi các chu kỳ 11 cách 0.7° c thấp ủ nhiệt độ mỗi chu kỳ và

23 chu kỳ 30 s tại 94° C, 30 s tại 56° C đến 60 s ở 72° C.

Gel điện

The PCR sản phẩm được trộn với 20 μl formamide nạp đệm

(98% formamide, EDTA 10 mM, 0,005% mỗi Xylen cyanol FF

và bromophenol màu xanh) và denatured bởi ấp cho 5 phút tại

90° C. 6% polyacrylamide gel đã được chuẩn bị bằng cách trộn 65 ml

6% Easigel (Scotlab) và 450 μl 10% amoni persulphate, de-
gassing và thêm 20 μl TEMED. Các gel được đổ ít 4 h

trước khi sử dụng và trước khi chạy lúc 80 W cho 30 phút mẫu của 5 μl

nạp một theo dõi và gel đã được điều hành cho 1,45 h tại 80 W, chuyển sang

3LI sắc kí giấy và khô trên một gel khô cho 2 h tại 80 ° C.

gel đã tiếp xúc với tia x phim trong khoảng 4-7 ngày.

Kết quả (Việt) 2:

(Bảng 2). Mỗi phản ứng PCR 20 ml bao gồm 3 ml tiền khuếch đại DNA, 50 Ng nhãn EcoRI + 3 mồi, 50 ng dán nhãn EcoRI + 3 mồi, 50 ng dán nhãn MseI + 3 mồi, 2 mM dNTP, 0,1 ml Taq DNA polymerase (10 đơn vị / ml) và 2 ml đệm PCR (Perkin Elmer, Mỹ). Hồ sơ cá nhân chu kỳ sau đảm bảo tối ưu mồi chọn lọc tivity: 1 chu kỳ 30 giây ở 94 ° C, 30 giây ở 65 ° C, 60 giây ở 72 ° C sau 11 chu kỳ 0,7 ° C nhiệt độ ủ thấp hơn mỗi chu kỳ và 23 chu kỳ 30 s ở 94 ° C, 30 giây ở 56 ° C và 60 s ở 72 ° C. gel điện Sản phẩm PCR được trộn với 20 ml Formamide đệm tải (98% Formamide, 10 mM EDTA, mỗi xylene cyanol 0,005% FF và bromophenol màu xanh) và biến tính bằng cách ủ trong 5 phút ở 90 ° C. Các gel polyacrylamide 6% đã được chuẩn bị bằng cách trộn 65 ml 6% Easigel (Scotlab) và 450 ml 10% amoni persulphate, triển thoát khí và thêm 20 ml TEMED. Các gel này được đổ ít nhất 4 giờ trước khi sử dụng và trước khi chạy ở 80 W trong 30 phút. Mẫu 5 ml được nạp mỗi theo dõi và gel này được chạy 1,45 giờ ở 80 W, chuyển giao cho giấy sắc ký 3 MM và phơi trên gel khô trong 2 giờ ở 80 ° C. Gel được tiếp xúc với phim X-quang trong khoảng 4 ngày +7.