The methods for enzymatic inhibitio

The methods for enzymatic inhibition
assays were adapted from Apostolidis et al.26 For the α 160 -glucosidase assay, in a 96-well
plate 50 µL of sample, buffer control, or positive control (2-500 µ 161 g/mL acarbose) was in
0.1 M sodium phosphate buffer pH 6.9) and incubated 10 min. A 50 µ 163 L aliquot of 5 mM
p-nitrophenyl-α-D 164 -glucopyranoside solution (in 0.1 M sodium phosphate buffer pH 6.9)
165 was added to each well and incubated for 5 min at 25 ºC. Before and after incubation the
166 absorbance was read at 405 nm by a BioRad 3550 microplate reader. Results are
167 calculated as follows: % enzyme inhibition = [(∆Absorbance of control-∆Absorbance of
168 extract)/ ∆Absorbance of control] x 100%. For the amylase assay, in a 20 mL glass tube
500 µL of sample, buffer control, or positive control (10-2000 µ 169 g/mL acarbose) was
added to 500 µL of 13 U/mL α 170 -amylase solution (type VI-B from porcine pancreas in
0.02 M sodium phosphate buffer pH 6.9) and incubated 10 min at 25 ºC. Next, 500 µ 171 L of
172 soluble starch solution (potato starch dissolved in sodium phosphate buffer pH 6.9) was
173 added to each tube and incubated for 10 min at 25 ºC. Last, 1 mL of dinitrosalicylic acid
174 color reagent was added to each tube and placed in 100 ºC water for 5 min. The mixture
175 was diluted with 10 mL distilled water and the absorbance was read at 540 nm using a
176 Shimadzu UV-1800 spectrophotometer. Results were calculated as follows: % enzyme
177 inhibition = [(Absorbance of control-Absorbance of extract)/ Absorbance of control] x
178 100. All measurements were done in triplicate

Kết quả (Việt) 1:

Các phương pháp để ức chế enzym thử nghiệm đã được chuyển thể từ Apostolidis et al.26 cho α 160 - glucosidase khảo nghiệm, trong 96 giếng tấm 50 ml mẫu, bộ đệm kiểm soát hoặc kiểm soát tích cực (2-500 µ 161 g/mL acarbose) là năm 0,1 M natri phosphat đệm pH 6.9) và ủ 10 phút. Một 50 µ 163 L aliquot 5 mm p-nitrophenyl-α-D 164 - glucopyranoside giải pháp (0.1 M natri phosphat đệm pH 6.9) 165 đã được thêm vào mỗi tốt và ủ cho 5 phút ở 25 ºC. Trước và sau khi ủ các 166 hấp thu được đọc tại 405 nm bởi một độc giả microplate BioRad 3550. Kết quả là 167 được tính như sau: sự ức chế enzym % = [(∆Absorbance của control-∆Absorbance của 168 Extract) / ∆Absorbance điều khiển] x 100%. Cho khảo nghiệm amylase trong một ống kính 20 mL 500 ml mẫu, bộ đệm kiểm soát hoặc kiểm soát tích cực (10 – 2000 µ 169 g/mL acarbose) Thêm vào 500 ml 13 U/mL α 170 - amylase giải pháp (loại VI-B từ các tuyến tụy porcine trong 0,02 M natri phosphat đệm pH 6.9) và ủ 10 phút ở 25 ºC. Tiếp theo, 500 µ 171 L của 172 giải pháp hòa tan tinh bột (khoai tây bột hòa tan trong natri phosphat đệm pH 6.9) là 173 được thêm vào mỗi ống và ủ cho 10 phút ở 25 ºC. Cuối cùng, 1 mL dinitrosalicylic axit 174 màu tinh khiết được thêm vào mỗi ống và được đặt trong 100 ºC nước cho 5 phút. Hỗn hợp 175 được pha loãng với nước 10 mL nước cất và hấp thu được đọc tại 540 nm sử dụng một 176 Shimadzu UV-1800 phối. Kết quả đã được tính như sau: % enzyme 177 ức chế = [(hấp thu kiểm soát hấp thu chiết xuất) / hấp thu kiểm soát] x 178 100. Tất cả các phép đo được thực hiện trong triplicate

Kết quả (Việt) 2:

Các phương pháp để ức chế enzyme
xét nghiệm được chuyển thể từ Apostolidis et al.26 Đối với khảo nghiệm -glucosidase α 160, trong một 96 giếng
tấm 50 ml mẫu, kiểm soát đệm, hoặc kiểm soát tích cực (2-500 μ 161 g / mL acarbose) là trong
0,1 M sodium phosphate đệm pH 6,9) và ủ 10 phút. A 50 μ 163 L dịch chất của 5 mM
p-nitrophenyl-α-D 164 giải pháp -glucopyranoside (trong 0,1 M sodium phosphate đệm pH 6,9)
165 đã được bổ sung vào từng giếng và ủ trong 5 phút ở 25 ºC. Trước và sau khi ủ những
166 độ hấp thụ đã được đọc ở 405 nm bằng một đầu đọc microplate BioRad 3550. Kết quả được
167 tính như sau: ức chế enzyme% = [(ΔAbsorbance kiểm soát-ΔAbsorbance của
168 giải nén) / ΔAbsorbance kiểm soát] x 100%. Đối với các xét nghiệm amylase, trong 20 mL ống thủy tinh
500 ml mẫu, kiểm soát đệm, hoặc kiểm soát tích cực (10-2000 μ 169 g / mL acarbose) đã được
thêm vào 500 ml 13 α-amylase 170 giải pháp U / mL (loại VI-B từ tụy lợn trong
0.02 natri M đệm phosphat pH 6,9) và ủ 10 phút ở 25 ºC. Tiếp theo, 500 μ 171 L
172 giải pháp tinh bột hòa tan (tinh bột khoai tây hòa tan trong sodium phosphate đệm pH 6,9) là
173 thêm vào mỗi ống và ủ trong 10 phút ở 25 ºC. Cuối, 1 ml axit dinitrosalicylic
174 màu thuốc thử đã được thêm vào mỗi ống và được đặt trong 100 ºC nước trong 5 phút. Hỗn hợp
175 được pha loãng với 10 ml nước cất và độ hấp thụ đã được đọc ở 540 nm sử dụng một
máy quang phổ 176 Shimadzu UV-1800. Kết quả được tính như sau:% enzyme
177 ức chế = [(hấp thụ kiểm soát-hấp thụ chiết) / hấp thụ kiểm soát] x
178 100. Tất cả các phép đo được thực hiện trong ba lần