In order to determine the activity

In order to determine the activity of phenylala-
nine ammonia-lyase (PAL), the frozen cells were
homogenized in ice-cold K-borate buffer (0.1 M,
pH 8.8) containing 2 mM b -mercaptoethanol
with a mortar and pestle and centrifuged at
16,000 • g, 10 min at 2 °C. The supernatant was
used as a crude enzyme solution. The reaction
mixture (total of 2 mL) was composed of 0.5 mL
of crude enzyme and 1 mL of extraction buffer
(without b-mercaptoethanol). The reaction star-
ted with the addition of 0.5 mL of 4 mM Phenyl-
alanine and after 1 h incubation at 37 °C was
stopped with 100 lL of 5 M HCl. The mixture
was extracted three times with EtOAc. The
EtOAc extract was air-dried, redissolved in 50%
MeOH and analyzed by HPLC on an ODS-80 Ts
column (4.6 • 250 mm, Tosoh, Japan). Cinnamic
acid (CA), as the products of PAL reaction was
eluted at a flow rate of 0.5 mL min)1 with a linear
gradient of 30–80% MeOH containing 0.1%
HOAc and was monitored at 273 nm (Wakabay-
ashi et al., 1997). The enzyme activity was

Kết quả (Việt) 1:

Để xác định các hoạt động của phenylala-chín amoniac-lyase (PAL), các tế bào đông lạnh đãhomogenized trong lạnh K-borat đệm (cách 0.1 M,pH 8.8) chứa 2 mM b - mercaptoethanolvới một vữa và pestle và ly tại• 16.000 g, 10 phút ở 2 ° C. Supernatant làđược sử dụng như là một giải pháp thô enzym. Phản ứnghỗn hợp (tổng cộng là 2 mL) bao gồm cách 0.5 mLthô enzyme và 1 mL của khai thác buffer(không có b-mercaptoethanol). Ngôi sao phản ứng-Ted với việc bổ sung các cách 0.5 mL 4 mm phênyl-alanine và sau khi 1 h ủ bệnh lúc 37 ° Cdừng lại với 100 lL 5 M HCl. Hỗn hợpđược chiết xuất ba lần với EtOAc. CácGiải nén EtOAc là air-dried, redissolved trong 50%MeOH và phân tích các hệ HPLC trên một Ts ODS-80cột (cách 4.6 • 250 mm, Tosoh, Nhật bản). Cinnamicaxit (CA), như các sản phẩm của phản ứng PAL làeluted tại một tỷ lệ flow cách 0.5 mL min) 1 với một tuyến tínhgradien của 30-80% MeOH có 0,1%HOAc và đã được giám sát tại 273 nm (Wakabay-Ashi et al., 1997). Hoạt động của enzyme

Kết quả (Việt) 2:

Để xác định các hoạt động của phenylala-
chín ammonia-lyase (PAL), các tế bào đông lạnh được
đồng hóa trong nước đá lạnh K-borate buffer (0,1 M,
pH 8.8) có chứa 2 mM b -mercaptoethanol
bằng cối và chày và ly tâm tại
16.000 • g, 10 phút ở 2 ° C. Nổi trên mặt đã được
sử dụng như một giải pháp enzym thô. Các phản ứng
hỗn hợp (tổng cộng 2 mL) được sáng tác của 0,5 mL
của enzyme thô và 1 ml dung dịch chiết xuất bu ff er
(không có b-mercaptoethanol). Phản ứng star-
ted với việc bổ sung 0,5 ml 4 mM phenylglycine
alanine và sau 1 h ủ ở 37 ° C đã được
dừng lại với 100 lL 5 M HCl. Hỗn hợp này
được chiết xuất ba lần với EtOAc. Các
chiết xuất EtOAc được không khí khô, rửa giải trong 50%
MeOH và phân tích bởi HPLC trên một ODS-80 Ts
cột (4.6 • 250 mm, TOSOH, Nhật Bản). Cinnamic
acid (CA), là sản phẩm của phản ứng PAL được
tách rửa với một tốc độ ow fl 0.5 mL min) 1 với một linear
gradient của 30-80% MeOH chứa 0,1%
HOAc và được theo dõi ở 273 nm (Wakabay-
ashi et al ., 1997). Các hoạt động của enzyme là