DRG® HBsAg (Confirmatory) ELISAAs o

DRG® HBsAg (Confirmatory) ELISA



As of 24 May 2011 rm (Vers. 1.0)


(EIA-3949 // EIA-5166)



USA:RUO




Please use only the valid version of the package insert provided with the kit.


This kit is intended for Research Use Only.


Not for use in diagnostic procedures.


1. INTENDED USE

A simple procedure based on an immunoreaction of neutralization is used in combination with the HBsAg assay.

2. PRINCIPLE OF THE ASSAY
The device has to be used in combination with the product code EIA-4545 or EIA-4134 for the determination of HBsAg in human sera and plasma.
The sample, whose repeatedly positivity for HBsAg has to be confirmed, is premixed with a reagent containing high titer anti HBsAg antibodies that will neutralize the antigen is really present in the sample.
The neutralized sample is then tested for HBsAg according to the procedure reported for the specific device.
If the positivity in the first screening test is specifically related to the presence of HBsAg in the sample, the same will not react any more in the assay having been neutralized by the antibody.
If at contrary the positivity of the sample is not abolished by the neutralization reaction, this reactivity is not due specifically to the presence of HBsAg in the sample, but to some interfering substance.

3. CONTENT OF THE KIT
The set contains the following reagents:

a. Neutralizing Reagent SOLN NEUT It contains high titer human plasma positive for anti HBsAg antibodies, 0.2 mg/ml gentamicine sulphate and 0.1% Kathon GC as preservatives.

b. Control Reagent CONTROL

It contains human plasma negative for anti HBsAg antibodies, 0.2 mg/ml gentamicine sulphate and 0.1% Kathon GC as preservatives.

c. Assay Diluent DILSPE
0.15 M NaCl phosphate buffered solution pH 7.0 + 0.2 containing 0.1% Kathon GC for the dilution of over ranging samples.
Note: Reagents have been tested and found negative for HBsAg, HCV Ab and HIV Ab with CE-marked kits.










DRG International, Inc., USA Fax: [phone] e-mail: [e-mail] 1




DRG® HBsAg (Confirmatory) ELISA



As of 24 May 2011 rm (Vers. 1.0)


(EIA-3949 // EIA-5166)



USA:RUO







umber of tests ode
ontrol Reagent (CONTROL) Neutralizing Reagent
(SOLN NEUT) Phosphate Buffered Saline (DILSPE)
Package insert

20 EIA 949
1x4ml/vial

1x4ml/vial

1x30ml/vial

N° 1

40 EIA- 166
1x8ml/vial

1x8ml/vial

1x60ml/vial

N° 1



4. MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED
1. Device for HBsAg determination, name HBsAg One, code EIA-3949 or EIA-5166. 2. Isotonic sterile solution.
3. Calibrated Micropipettes and disposable plastic tips. 4. Timer with 60 minute range or higher.
5. Absorbent paper tissues.
6. Calibrated ELISA microplate thermostatic incubator (dry or wet), capable to provide shaking at 1300 rpm+/-150, set at +37°C.
7. Calibrated ELISA microwell reader with 450nm (reading) and possibly with 620-630nm (blanking) filters. 8. Calibrated ELISA microplate washer.
9. Vortex or similar mixing tools.
10. Disposable plastic tube of 2-5 ml.





















DRG International, Inc., USA Fax: [phone] e-mail: [e-mail] 2




DRG® HBsAg (Confirmatory) ELISA



As of 24 May 2011 rm (Vers. 1.0)


(EIA-3949 // EIA-5166)



USA:RUO




5. WARNINGS AND PRECAUTIONS
1. 2. The Set has to be used by skilled and properly trained technical personnel only, under the supervision of a medical doctor responsible of the laboratory.
3. When the device is used for confirmation of a sample repeatedly positive in the screening of blood units and blood components, it has to be used in a laboratory certified and qualified by the national authority in that field (Ministry of Health or similar entity) to carry out this type of analysis.
4. The laboratory environment should be controlled so as to avoid contaminants such as dust or air-born microbial agents, when opening the vials contained in the set.
5. Upon receipt, store the kit at 2..8°C into a temperature controlled refrigerator or cold room.
6. Do not interchange Reagents between different lots of the device. It is even recommended that Reagents between two sets of the same lot are not interchanged.
7. Check that the Reagents of the device are clear and do not contain visible heavy particles or aggregates. If not, advise the laboratory supervisor to initiate the necessary procedures for kit replacement.
8. Avoid cross-contamination between kit reagents by using disposable tips and changing them between the use of each one.
9. Do not use the set after the expiration date stated on the external container and internal (vials) labels.
10. Treat all specimens as potentially infective. All human serum specimens should be handled at Biosafety Level 2, as recommended by the Center for Disease Control, Atlanta, U.S. in compliance with what reported in the Institutes of Health’s publication: “Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories”, ed. 1984.
11. Waste produced during the use of the set in combination with the devise for HBsAg determination has to be discarded in compliance with national directives and laws concerning laboratory waste of chemical and biological substances. In particular, liquid waste generated from the washing procedure, from residuals of controls and from samples has to be treated as potentially infective material and inactivated before waste. Suggested procedures of inactivation are treatment with a 10% final concentration of household bleach for 16-18 hrs or heat inactivation by autoclave at 121°C for 20 min..
12. Accidental spills from samples and operations have to be adsorbed with paper tissues soaked with household bleach and then with water. Tissues should then be discarded in proper containers designated for laboratory/hospital waste.
13. Other waste materials generated from the use of the kit (example: tips used for samples and controls, used microplates) should be handled as potentially infective and disposed according to national directives and laws concerning laboratory wastes.
14. Refer to the Instructions for Use of the product code EIA-3949, EIA-5166 used in combination for the confirmation assay.


6. SPECIMEN: PREPARATION AND WARNINGS
1. The sample turned out to be repeatedly positive in the first HBsAg determination with HBsAg One has to be used for the test of neutralization. Treat the sample as described in section L.
2. Avoid any addition of preservatives to samples after first screening; especially sodium azide as this chemical would affect the enzymatic activity of the conjugate, generating false negative results.
3. Samples have to be clearly identified with codes or names in order to avoid misinterpretation of results.
4. Haemolysed (red) and lipemic (“milky”) samples have to be discarded by definition anyway as they could generate false results in the test for HBsAg.
5. Samples containing residues of fibrin or heavy particles or microbial filaments and bodies should be discarded as well as they could give rise to false positive results both in HBsAg first assay and even in the confirmation one.

DRG International, Inc., USA Fax: [phone] e-mail: [e-mail] 3




DRG® HBsAg (Confirmatory) ELISA



As of 24 May 2011 rm (Vers. 1.0)


(EIA-3949 // EIA-5166)



USA:RUO




6. The assay is not suitable to confirm the negativity of samples that turned out to be negative in the first HBsAg screening test.
7. Sera and plasma can be stored at +2°..8°C for up to five days after collection. For longer storage periods, samples can be stored frozen at –20°C for several months.
8. Any frozen sample should not be frozen/thawed more than once as this may generate particles that could affect the test result. If some turbidity is present or presence of micro particles is suspected after thawing, filter the sample on a disposable 0.2-0.8u filter to clean it up for testing or use the two-steps alternative method.
9. Refer to the Instructions for Use of the product code EIA-3949, EIA-5166 used in combination for the confirmation assay.






































DRG International, Inc., USA Fax: [phone] e-mail: [e-mail] 4




DRG® HBsAg (Confirmatory) ELISA



As of 24 May 2011 rm (Vers. 1.0)


(EIA-3949 // EIA-5166)



USA:RUO





7. INSTRUMENTS AND TOOLS USED IN COMBINATION WITH THE KIT

1. Micropipettes have to be calibrated to deliver the correct volume required by the assay and must be submitted to regular decontamination (70% ethanol, 10% solution of bleach, hospital grade disinfectants) of those parts that could accidentally come in contact with the sample or the components of the kit. They should also be regularly maintained in order to show a precision of 1% and a trueness of +2%.
2. The ELISA incubator has to be set at +37°C (tolerance of +1°C) and regularly checked to ensure the correct temperature is maintained. Both dry incubators and water baths are suitable for the incubations, provided that the instrument is validated for the incubation of ELISA tests.
3. In case of shaking during incubations, the instrument has to ensure 350 rpm +150. Amplitude of shaking is very important as a wrong one could give origin to splashes and therefore to some false positive result.
4. The ELISA washer is extremely important to the overall performances of the assay. The washer must be carefully validated and correctly optimized using the kit controls/calibrator and reference panels, before using the kit for routine laboratory tests. Usually 4-5 washing cycles (aspiration + dispensation of 350ul/well of washing solution = 1 cycle) are sufficient to ensure that the assay performs as expected. A soaking time of 20-30 seconds between cycles is suggested. In order to set correctly their number, it is recommended to run an assay with the kit controls/calibrator and well-characterized negative and positive reference samples, and check to match the values reported below in the section “Internal Quality Control”. Regular calibration of

Kết quả (Việt) 2:

DRG® HBsAg (tính xác nhận) ELISA Tính đến ngày 24 Tháng năm 2011 rm (Vers 1.0.) (EIA-3949 // EIA-5166) USA: Ruo . Vui lòng sử dụng chỉ có phiên bản hợp lệ của chèn gói cung cấp cùng với bộ kit này được thiết kế Nghiên cứu sử dụng chỉ. Không cho sử dụng trong các thủ tục chẩn đoán. 1. SỬ DỤNG THIẾT KẾ Một thủ tục đơn giản dựa trên một immunoreaction trung hòa được sử dụng kết hợp với các xét nghiệm HBsAg. 2. NGUYÊN TẮC CỦA KHẢO NGHIỆM Thiết bị này có thể sử dụng kết hợp với các mã sản phẩm EIA-4545 hoặc EIA-4134 cho việc xác định HBsAg trong huyết thanh của con người và plasma. Các mẫu, mà liên tục tích cực cho HBsAg đã được khẳng định, được trộn với một thuốc thử có chứa hiệu giá kháng thể kháng HBsAg cao mà sẽ trung hòa các kháng nguyên thực sự hiện diện trong mẫu. Sau đó người mẫu trung hòa là thử nghiệm cho HBsAg theo các thủ tục báo cáo cho các thiết bị cụ thể. Nếu dương tính trong xét nghiệm sàng lọc đầu tiên được cụ thể liên quan đến sự có mặt của HBsAg trong mẫu, như vậy sẽ không phản ứng nữa trong việc khảo nghiệm đã được trung hoà bởi các kháng thể. Nếu ở trái, tích cực của mẫu không được bãi bỏ bởi các phản ứng trung hòa, phản ứng này không phải là do sự hiện diện đặc biệt để HBsAg trong mẫu, nhưng đối với một số chất gây nhiễu. 3. NỘI DUNG CỦA KIT Các bộ chứa các thuốc thử sau: a. Trung hòa Reagent soln NEUT Nó chứa độ chuẩn cao huyết tương người dương tính với kháng thể chống HBsAg, 0,2 mg / ml sulphate gentamicine và 0,1% Kathon GC như chất bảo quản. b. Kiểm soát Thuốc thử KIỂM SOÁT Nó chứa huyết tương người âm tính với kháng thể chống HBsAg, 0,2 mg / ml sulphate gentamicine và 0,1% Kathon GC như chất bảo quản. c. Khảo nghiệm pha loãng DILSPE 0,15 M NaCl phosphate giải pháp đệm pH 7,0 + 0,2 có chứa 0,1% Kathon GC cho việc pha loãng đối với các mẫu khác nhau. Lưu ý: Hoá chất đã được kiểm nghiệm và âm tính với HBsAg, HCV Ab Ab và HIV với bộ dụng cụ CE đánh dấu. DRG International, Inc., USA Fax: [phone] E-mail: [e-mail] 1 DRG® HBsAg (tính xác nhận) ELISA Tính đến ngày 24 tháng 5 năm 2011 rm (Vers 1.0.) (EIA-3949 // EIA -5166) USA: Ruo màu nâu đen của các xét nghiệm thơ ca ngợi ontrol Reagent (CONTROL) Trung Tính Reagent (soln NEUT) Phosphate Buffered Saline (DILSPE) Package chèn 20 EIA 949 1x4ml / lọ 1x4ml / lọ 1x30ml / lọ N ° 1 40 EIA- 166 1x8ml / lọ 1x8ml / lọ 1x60ml / lọ N ° 1 4. LIỆU CẦN NHƯNG KHÔNG CUNG CẤP 1. Thiết bị cho HBsAg quyết tâm, tên HBsAg Một, mã EIA-3949 hoặc EIA-5166. 2. đẳng trương giải pháp vô trùng. 3. Micropipettes hiệu chuẩn và thủ thuật nhựa dùng một lần. 4. Hẹn giờ với khoảng 60 phút hoặc cao hơn. 5. Khăn giấy thấm. 6. Hiệu chuẩn ELISA microplate lồng ấp nhiệt (khô hoặc ướt), có khả năng cung cấp độ rung 1300 rpm +/- 150, đặt ở + 37 ° C. 7. Hiệu chuẩn ELISA reader microwell với 450nm (reading) và có thể với 620-630nm (tẩy trống) bộ lọc. 8. Calibrated ELISA microplate máy giặt. 9. Vortex hoặc các công cụ tương tự trộn. 10. Ống nhựa dùng một lần từ 2-5 ml. DRG International, Inc., USA Fax: [phone] E-mail: [e-mail] 2 DRG® HBsAg (tính xác nhận) ELISA Tính đến ngày 24 tháng 5 2011 rm (Vers . 1.0) (EIA-3949 // EIA-5166) USA: Ruo 5. Thận trọng 1. 2. Set đã được sử dụng bởi chỉ nhân kỹ thuật lành nghề và được đào tạo đúng cách, dưới sự giám sát của một bác sĩ y tế có trách nhiệm của các phòng thí nghiệm. 3. Khi thiết bị được sử dụng để xác nhận một mẫu liên tục tích cực trong việc kiểm tra các đơn vị máu và các thành phần trong máu, nó có thể được sử dụng trong phòng thí nghiệm xác nhận và trình độ của các cơ quan quốc gia trong lĩnh vực đó (Bộ Y tế hoặc tổ chức tương tự) để thực hiện ra kiểu phân tích này. 4. Các môi trường phòng thí nghiệm phải được kiểm soát để tránh gây ô nhiễm như bụi hoặc vi sinh vật không sinh ra, khi mở lọ chứa trong bộ này. 5. Khi nhận, lưu trữ các bộ tại 2..8 ° C vào kiểm soát nhiệt độ tủ lạnh hoặc phòng lạnh. 6. Không trao đổi giữa rất nhiều Hoá chất khác nhau của thiết bị. Nó thậm chí còn đề nghị Hoá chất giữa hai bộ cùng rất nhiều không thay đổi cho nhau. 7. Kiểm tra xem các Thuốc thử của thiết bị là rất rõ ràng và không chứa các hạt nặng có thể nhìn thấy hay uẩn. Nếu không, tư vấn cho các giám sát viên phòng thí nghiệm để tiến hành các thủ tục cần thiết cho bộ thay thế. 8. Tránh ô nhiễm chéo giữa thuốc thử bộ bằng cách sử dụng các mẹo dùng một lần và thay đổi chúng giữa việc sử dụng của mỗi người. 9. Không sử dụng các thiết lập sau ngày hết hạn ghi trên bao bì bên ngoài và nội bộ (lọ) nhãn. 10. Hãy đối xử với tất cả các mẫu vật như khả năng gây nhiễm. Tất cả các mẫu huyết thanh của người cần được xử lý an toàn sinh học ở cấp 2, theo khuyến cáo của Trung tâm Kiểm soát dịch bệnh Mỹ, Atlanta, Mỹ, phù hợp với những gì được báo cáo trong các ấn phẩm của Viện Y tế: "An toàn sinh học trong phòng thí nghiệm vi sinh và y sinh học", ed. 1984. 11. Thải ra trong quá trình sử dụng các thiết lập trong sự kết hợp với các devise cho HBsAg quyết tâm đã được bỏ đi trong sự tuân thủ chỉ thị quốc gia và pháp luật liên quan đến chất thải trong phòng thí nghiệm của các chất hóa học và sinh học. Đặc biệt, chất thải lỏng phát sinh từ thủ tục rửa, từ chất thải phát sinh và kiểm soát từ các mẫu có thể được coi như có khả năng vật chất và bất hoạt nhiễm trước khi thải. Thủ tục đề nghị của bất hoạt được xử lý với nồng độ 10% cuối cùng của thuốc tẩy cho 16-18 giờ hoặc bất hoạt bởi nhiệt nồi hấp ở 121 ° C trong 20 phút .. 12. Đổ tràn từ các mẫu và các hoạt động phải được hấp phụ với khăn giấy thấm thuốc tẩy và sau đó bằng nước. Mô sau đó nên được loại bỏ trong thùng chứa thích hợp được chỉ định cho các chất thải trong phòng thí nghiệm / bệnh viện. 13. Vật liệu phế thải khác phát sinh từ việc sử dụng các kit (ví dụ: các mẹo sử dụng để lấy mẫu và kiểm soát, sử dụng microplates) nên được xử lý như khả năng lây nhiễm và xử lý theo chỉ thị quốc gia và pháp luật liên quan đến chất thải trong phòng thí nghiệm. 14. Hãy tham khảo Hướng dẫn sử dụng của sản phẩm mã EIA-3949, EIA-5166 sử dụng kết hợp với các xét nghiệm xác nhận. 6. MẪU: CHUẨN BỊ VÀ CẢNH BÁO 1. Các mẫu hóa ra là liên tục tích cực trong việc xác định HBsAg đầu tiên với HBsAg Một người phải được sử dụng cho các bài kiểm tra của trung hòa. Xử lý mẫu như được mô tả trong phần L. 2. Tránh bất kỳ bổ sung các chất bảo quản để mẫu sau khi trình chiếu lần đầu; đặc biệt là natri azit như hóa chất này sẽ ảnh hưởng đến các hoạt động enzyme của các liên hợp, tạo ra kết quả âm tính. 3. Mẫu phải được xác định rõ ràng với mã số hoặc tên để tránh giải thích kết quả. 4. Haemolysed (màu đỏ) và lipemic ("sữa") mẫu phải được loại bỏ bằng cách định nghĩa nào vì chúng có thể tạo ra kết quả sai trong xét nghiệm HbsAg. 5. Mẫu có chứa dư lượng fibrin hoặc hạt nặng hoặc sợi vi sinh vật và các cơ quan cần được loại bỏ cũng như họ có thể làm phát sinh kết quả dương tính giả trong cả HBsAg khảo nghiệm đầu tiên và ngay cả trong một xác nhận. DRG International, Inc., USA Fax: (908 ) 233 0758 E-mail: [e-mail] 3 DRG® HBsAg (tính xác nhận) ELISA . Tính đến ngày 24 tháng 5 2011 rm (Vers 1.0) (EIA-3949 // EIA-5166) USA: Ruo 6. Xét nghiệm này là không thích hợp để xác nhận sự tiêu cực của mẫu mà hóa ra lại là tiêu cực trong các thử nghiệm HBsAg sàng lọc đầu tiên. 7. Sera và plasma có thể được lưu trữ tại + 2 ° ..8 ° C cho đến năm ngày sau khi thu thập. Trong thời gian lưu trữ lâu hơn, mẫu có thể được lưu trữ đông lạnh ở -20 ° C trong vài tháng. 8. Bất kỳ mẫu đông lạnh không nên để lạnh / rã đông nhiều hơn một lần vì điều này có thể tạo ra các hạt mà có thể ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm. Nếu một số độ đục có mặt hoặc không có mặt của các hạt vi mô đang bị nghi ngờ sau khi rã đông, lọc các mẫu trên một bộ lọc 0.2-0.8u dùng một lần để làm sạch nó lên để thử nghiệm hoặc sử dụng hai bước phương pháp thay thế. 9. Hãy tham khảo Hướng dẫn sử dụng của sản phẩm mã EIA-3949, EIA-5166 sử dụng kết hợp với các xét nghiệm xác nhận. DRG International, Inc., USA Fax: [phone] E-mail: [e-mail] 4 DRG® HBsAg (tính xác nhận) ELISA Tính đến 24 tháng 5 năm 2011 rm (Vers 1.0.) (EIA-3949 // EIA-5166) USA: Ruo 7. INSTRUMENTS VÀ CÔNG CỤ DÙNG TRONG KẾT HỢP VỚI KIT 1. Micropipettes phải được hiệu chỉnh để cung cấp khối lượng chính xác theo yêu cầu của khảo nghiệm và phải được nộp để khử trùng thường xuyên (70% ethanol, dung dịch 10% của chất tẩy rửa, khử trùng bệnh viện cấp) của những bộ phận mà có thể vô tình tiếp xúc với mẫu hay các các thành phần của bộ. Họ cũng cần được bảo dưỡng thường xuyên để cho thấy độ chính xác của 1% và một trueness của + 2%. 2. Các ELISA lồng ấp đã được thiết lập tại + 37 ° C (dung sai + 1 ° C) và thường xuyên kiểm tra để đảm bảo đúng nhiệt độ được duy trì. Cả hai vườn ươm khô và phòng tắm nước phù hợp cho nuôi cấy, với điều kiện cụ được xác nhận cho các ủ bệnh của các xét nghiệm ELISA. 3. Trong trường hợp rung lắc trong incubations, các cụ có để đảm bảo 350 rpm 150. Biên độ lắc là rất quan trọng như là một trong những sai lầm có thể cung cấp nguồn gốc để bắn và do đó một số kết quả dương tính giả. 4. Các ELISA máy giặt là cực kỳ quan trọng đối với các buổi biểu diễn tổng thể của thử nghiệm. Các máy giặt phải được xác nhận một cách cẩn thận và chính xác tối ưu hóa bằng cách sử dụng bảng điều khiển bộ / calibrator và tài liệu tham khảo, trước khi sử dụng các kit cho các xét nghiệm thường. Thông thường 4-5 chu kỳ giặt (+ khát vọng kỳ của 350ul / giếng rửa giải pháp = 1 chu kỳ) là đủ để đảm bảo rằng các xét nghiệm thực hiện như mong đợi. Một thời gian ngâm trong 20-30 giây giữa các chu trình được đề nghị. Để thiết lập một cách chính xác số lượng của họ, đó là khuyến cáo để chạy một thử nghiệm với các điều khiển bộ / calibrator và nổi đặc trưng mẫu tham khảo tiêu cực và tích cực, và kiểm tra để phù hợp với các giá trị báo cáo dưới đây trong phần "Kiểm soát nội bộ chất lượng". Hiệu chuẩn thường xuyên của