Molecular methodsIn order to evalua

Molecular methods
In order to evaluate the presence of ESBL-encoding genes, colony blot hybridization was performed on nylon membranes according to manufacturer’s instructions, using random primed 32P-labelled DNA probes (Hybond-N+, Amersham-Pharmacia Biosciences). In situ lysis of bacterial colonies was carried out as described previously.8 blaTEM-1, blaSHV-1, blaPER-1, blaCTX-M-2 and blaCTX-M-3 used as probes in the hybridization experiments correspond to the entire sequence of the genes.
Hybridization-positive isolates were analysed using PCR in order to isolate the genes. The primers used for the amplification are shown in Table 1. All PCRs were performed as described previously.8 The nature of the ESBL was determined by direct sequencing of the products from two independent PCRs, using an ABI Prism 310 (Applied Biosystems, Monza, Italy). The deduced amino acid sequences were compared with those of known TEM, CTX-M, SHV and PER variants.

Kết quả (Việt) 1:

Phương pháp phân tửĐể đánh giá sự hiện diện của gen mã hóa ESBL, thuộc địa blot lai ghép được thực hiện trên màng ni lông theo hướng dẫn của nhà sản xuất, sử dụng ngẫu nhiên primed 32 P với nhãn hiệu DNA đầu dò (Hybond-N +, Amersham Pharmacia Biosciences). In situ lysis của vi khuẩn thuộc địa được thực hiện như mô tả previously.8 blaTEM-1, blaSHV-1, blaPER-1, blaCTX-M-2 và blaCTX-M-3 được sử dụng như các thăm dò trong các thí nghiệm lai tương ứng với toàn bộ chuỗi gen.Lai dương tính chủng đã được phân tích bằng cách sử dụng PCR để cô lập các gen. Các chất nền, mồi được sử dụng cho khuếch đại được hiển thị trong bảng 1. Tất cả PCRs đã được thực hiện như mô tả previously.8 bản chất của ESBL đã được xác định bởi các trình tự trực tiếp các sản phẩm từ hai PCRs độc lập, bằng cách sử dụng một ABI Prism 310 (áp dụng Biosystems, Monza, ý). Trình tự axit amin suy luận được so sánh với những người trong các biến thể được biết đến của TEM, CTX-M, SHV và phần.

Kết quả (Việt) 2:

Phương pháp phân tử
Để đánh giá sự hiện diện của gen mã hóa ESBL-, thuộc địa blot lai được thực hiện trên màng nylon theo hướng dẫn của nhà sản xuất, sử dụng đầu dò DNA 32P-dán nhãn sơn lót ngẫu nhiên (Hybond-N +, Amersham Pharmacia-Biosciences). Trong situ ly giải của các thuộc địa của vi khuẩn được thực hiện như mô tả previously.8 blaTEM-1, blaSHV-1, blaPER-1, blaCTX-M-2 và blaCTX-M-3 được sử dụng như là thăm dò trong các thí nghiệm lai tương ứng với toàn bộ chuỗi các gen.
phân lập Hybridization dương được phân tích bằng phương pháp PCR để phân lập các gen. Các mồi được sử dụng để khuếch đại được thể hiện trong Bảng 1. Tất cả PCR được thực hiện như mô tả previously.8 Bản chất của ESBL được xác định bởi trình tự trực tiếp các sản phẩm từ hai PCR độc lập, sử dụng một ABI Prism 310 (Applied Biosystems, Monza, Ý). Các trình tự axit amin suy ra được so sánh với những biến thể TEM biết, CTX-M, SHV và PER.