Broth microdilution. Phenotypic con

Broth microdilution. Phenotypic confirmatory testing can also be performed by broth microdilution assays using ceftazi-dime (0.25 to 128 µg/ml), ceftazidime plus clavulanic acid (0.25/4 to 128/4 µg/ml), cefotaxime (0.25 to 64 µg/ml), and cefotaxime plus clavulanic acid (0.25/4 to 64/4 µg/ml). Again it should be emphasized that both ceftazidime and cefotaxime should be used (330). Broth microdilution is performed using standard methods. Phenotypic confirmation is considered as a Š3-twofold-serial-dilution decrease in MIC of either cephalo- sporin in the presence of clavulanic acid compared to its MIC when tested alone.
Hadziyannis (154) evaluated a set of 12 isolates with well- characterized þ-lactamases using this method. Five isolates with known ESBLs and five without ESBLs were correctly identified. There was one false-positive, a Klebsiella pneu- moniae isolate lacking ESBLs but hyperproducing SHV-1 with a ceftazidime MIC of 4 µg/ml reducing to Š0.025 µg/ml with ceftazidime/clavulanate. One Klebsiella oxytoca isolate which hyperproduced the chromosomal K1 þ-lactamase and was re- sistant to aztreonam was negative for ESBL production using the criteria above.
Steward and colleagues (379), in their analysis of 139 Kleb- siella pneumoniae isolates with ceftazidime or cefotaxime MICs of Š2 µg/ml, found that the definition for a positive phenotypic confirmatory test using broth microdilution was met in 114 (82%) of isolates. Of the 114 isolates, 108 (95%) met the criteria for a positive phenotypic confirmatory test with both ceftazidime and cefotaxime and 6 (5%) with ceftazidime only. For five of the 139 isolates, the results were indeterminate because no ratio of ceftazidime to ceftazidime/clavulanic acid MICs was calculable. Such a situation arises when the ceftazi- dime MIC was above the highest dilution tested and the cefta- zidime plus clavulanic acid MICs were 64 µg/ml or greater. Testing cefepime and cefepime plus clavulanic acid (a test not specified in CLSI guidelines), or utilizing CLSI ESBL disk diffusion confirmatory tests, may sometimes determine whether a clavulanic acid effect truly occurs in such isolates (379).
Steward and colleagues have devised a useful algorithm for ESBL testing using phenotypic methods (379). They suggest using cefoxitin susceptibility in isolates with positive screening tests but negative confirmatory tests as a means of deducing the mechanism of resistance. Cefoxitin resistant isolates may produce AmpC-type enzymes or possess porin changes, al- though it must be recognized that these can coexist with ESBL production.

Kết quả (Việt) 1:

Canh microdilution. Thử nghiệm confirmatory kiểu hình cũng có thể được thực hiện bởi canh microdilution thử nghiệm bằng cách sử dụng ceftazi-hào (0,25 đến 128 µg/ml), ceftazidime plus clavulanic acid (0,25/4 đến 128/4 µg/ml), cefotaxime (0,25 tới 64 µg/ml), và cefotaxime plus clavulanic acid (0,25/4 đến 64/4 µg/ml). Một lần nữa, nó cần được nhấn mạnh rằng cả hai ceftazidime và cefotaxime nên được sử dụng (330). Canh microdilution được thực hiện bằng cách sử dụng phương pháp tiêu chuẩn. Kiểu hình xác nhận được coi là một sự giảm xuống Š3-gấp đôi-serial-pha loãng trong MIC của một trong hai cephalo - sporin sự hiện diện của acid clavulanic so với MIC của mình khi thử nghiệm một mình.Hadziyannis (154) đánh giá một bộ 12 chủng với tốt-đặc trưng þ-lactamases bằng cách sử dụng phương pháp này. Năm chủng với ESBLs được biết đến và năm mà không có ESBLs đã được xác định chính xác. Đã có một dương tính sai, Klebsiella pneu-moniae cô lập thiếu ESBLs nhưng hyperproducing SHV-1 với một ceftazidime MIC 4 µg/ml giảm Š0.025 µg/ml với ceftazidime/clavulanate. Một Klebsiella oxytoca cô lập mà þ hyperproduced K1 nhiễm sắc thể-lactamase và là re-sistant để aztreonam là tiêu cực cho ESBL sản xuất bằng cách sử dụng các tiêu chí nêu trên.Quản lý và đồng nghiệp (379), trong phân tích của 139 Kleb-siella pneumoniae chủng với ceftazidime hoặc cefotaxime MICs Š2 µg/ml, tìm thấy định nghĩa cho một bài kiểm tra kiểu hình tích cực confirmatory sử dụng canh microdilution đã được đáp ứng trong năm 114 (82%) của chủng. Số 114 chủng, 108 (95%) đáp ứng các tiêu chuẩn cho một bài kiểm tra confirmatory tích cực kiểu hình với cả hai ceftazidime và cefotaxime và 6 (5%) với ceftazidime chỉ. Cho ngũ chủng 139, kết quả là không xác định bởi vì không có tỷ lệ ceftazidime với ceftazidime/clavulanic acid MICs calculable. Một tình huống phát sinh khi MIC ceftazi-hào trên các pha loãng cao nhất được thử nghiệm và cefta-zidime plus clavulanic acid MICs 64 µg/ml hoặc cao hơn. Thử nghiệm cefepime và cefepime plus clavulanic acid (một thử nghiệm không được chỉ định trong CLSI hướng dẫn), hoặc bằng cách sử dụng CLSI ESBL đĩa khuếch tán confirmatory các xét nghiệm, đôi khi có thể xác định liệu một hiệu ứng acid clavulanic thực sự xảy ra trong các chủng (379).Quản lý và các đồng nghiệp đã nghĩ ra một thuật toán hữu ích cho ESBL thử nghiệm bằng cách sử dụng phương pháp kiểu hình (379). Họ đề nghị sử dụng cefoxitin tính nhạy cảm trong chủng với xét nghiệm tầm soát tích cực nhưng xét nghiệm confirmatory tiêu cực như là một phương tiện để deducing cơ chế kháng chiến. Cefoxitin kháng chủng có thể sản xuất AmpC-loại enzym hoặc có thay đổi porin, al - mặc dù phải công nhận rằng đây có thể cùng tồn tại với ESBL sản xuất.

Kết quả (Việt) 2:

Nước dùng pha loãng. Xét nghiệm khẳng định kiểu hình cũng có thể được thực hiện bằng xét nghiệm nước dùng pha loãng sử dụng ceftazi-xu (0,25-128 mg / ml), ceftazidime cộng với acid clavulanic (0,25 / 4 đến 128/4 mg / ml), cefotaxime (0,25-64 mg / ml) , và cefotaxime cộng với acid clavulanic (0,25 / 4 đến 64/4 mg / ml). Một lần nữa cần phải nhấn mạnh rằng cả hai ceftazidime và cefotaxime nên được sử dụng (330). Nước dùng pha loãng được thực hiện bằng phương pháp chuẩn. Xác nhận kiểu hình được coi là giảm S3 có hai phần nối tiếp pha loãng trong MIC của một trong hai sporin cephalo- trong sự hiện diện của acid clavulanic so với MIC của mình khi thử nghiệm một mình.
Hadziyannis (154) đã đánh giá một bộ 12 cô lập với nổi đặc trưng þ -lactamases sử dụng phương pháp này. Năm phân lập với ESBL được biết đến và năm mà không ESBL được xác định một cách chính xác. Có một dương tính giả, một Klebsiella pneu- moniae cô lập thiếu ESBL nhưng hyperproducing SHV-1 với một MIC ceftazidime của 4 mg / ml giảm đến Š0.025 mg / ml với ceftazidime / clavulanate. Một Klebsiella oxytoca cô lập mà hyperproduced các nhiễm sắc thể K1 þ-lactamase và là trợ lý lại để aztreonam là tiêu cực cho sản xuất ESBL sử dụng các tiêu chí trên.
Steward và các đồng nghiệp (379), trong phân tích của họ về 139 Kleb- siella pneumoniae phân lập với ceftazidime hoặc cefotaxime MIC của S2 mg / ml, cho thấy định nghĩa cho một kiểu hình khẳng loãng thử nghiệm sử dụng nước dùng tích cực đã được đáp ứng trong 114 (82%) các chủng. Trong số 114 chủng phân lập, 108 (95%) đủ tiêu chuẩn xét ​​nghiệm khẳng định kiểu hình tích cực với cả ceftazidime và cefotaxime và 6 (5%) chỉ với ceftazidime. Đối với năm của 139 chủng phân lập, kết quả là không xác định được vì không có tỷ lệ ceftazidime với ceftazidime / MIC axit clavulanic là có thể tính được. Tình huống như vậy phát sinh khi các xu MIC ceftazi- là trên các pha loãng cao nhất được thử nghiệm và zidime cefta- cộng MIC acid clavulanic là 64 mg / ml hoặc cao hơn. Kiểm tra cefepime và cefepime cộng với acid clavulanic (một xét nghiệm không được quy định trong hướng dẫn CLSI), hoặc sử dụng CLSI ESBL đĩa khuếch tán xét ​​nghiệm xác nhận, đôi khi có thể xác định xem một tác dụng axit clavulanic thực sự xảy ra trong phân lập như vậy (379).
Steward và các đồng nghiệp đã phát minh ra một hữu ích thuật toán để thử nghiệm ESBL sử dụng phương pháp kiểu hình (379). Họ đề nghị sử dụng cefoxitin tính nhạy cảm của các phân lập với các xét nghiệm sàng lọc dương tính nhưng các xét nghiệm khẳng định tiêu cực như là một phương tiện để suy luận các cơ chế kháng. Khuẩn kháng thuốc cefoxitin có thể sản xuất ra enzyme AmpC loại hoặc có thay đổi Porin, mặc dù nó phải thừa nhận rằng chúng có thể tồn tại song song với sản xuất ESBL.