Plasmid detection and curing. Plasm

Plasmid detection and curing. Plasmids were detect-
ed by a modification of the rapid lysis technique of
Kado and Liu (23). Our modification consisted of
using polypropylene tubes (12 by 75 mm) with snap
caps, heating the cells in lysing solution at 65°C for 20
min, and extracting each twice with two volumes of
phenol-chloroform. The aqueous layer (450 p.1) was
then withdrawn into a 1.5-ml microcentrifuge tube and
adjusted to 0.3 M Na acetate by adding 50 p.1 of 3 M Na
acetate. The plasmid DNA was precipitated by a 15-
min exposure to two volumes of cold (-20°C) 95%
ethanol. Plasmid DNA was then sedimented by a 5-
min centrifugation in a microcentrifuge, reprecipitated
with cold 70% ethanol, and recentrifuged. The tubes
were allowed to air dry inverted over clean lab tissue.
The DNA was then reconstituted in 100 p.1 of the Kado
and Liu dye. Gels were photographed on a model C-62
transilluminator (Ultra-Violet Products, Inc.) with
type 55 film (Polaroid Corp.) exposed through Wratten

Kết quả (Việt) 1:

Plasmid phát hiện và chữa. Plasmid được phát hiện-
ed bởi một sửa đổi của kỹ thuật nhanh chóng lysis
Kado và lưu (23). Sửa đổi của chúng tôi bao gồm
sử dụng polypropylene ống (12 bởi 75 mm) với snap
mũ, Hệ thống sưởi các tế bào trong lysing giải pháp ở 65° C cho 20
min, và giải nén mỗi hai lần với hai tập của
phenol-cloroform. Các lớp dung dịch nước (450 p.1) là
sau đó ngừng hoạt động vào 1 một.5-ml microcentrifuge ống và
điều chỉnh để cách 0.3 M Na axetat bằng cách thêm 50 p.1 3 M na
axetat. Plasmid DNA được dự báo bởi một 15-
min tiếp xúc với hai tập của lạnh (-20 ° C) 95%
ethanol. Plasmid DNA là sedimented bởi một 5-
min số trong một microcentrifuge, reprecipitated
với lạnh 70% ethanol, và recentrifuged. Các ống
được phép với không khí khô đảo ngược trong phòng thí nghiệm sạch mô.
DNA sau đó được tái lập ở p.1 100 của Kado
và lưu thuốc nhuộm. Gel được chụp ảnh trên một mô hình C-62
transilluminator (Ultra-Violet Products, Inc.) với
loại 55 phim (Polaroid Corp) tiếp xúc thông qua Wratten

Kết quả (Việt) 2:

Phát hiện plasmid và bảo dưỡng. Plasmid được detect-
ed bởi sự thay đổi của kỹ thuật ly giải nhanh
Kado và Liu (23). Sửa đổi của chúng tôi bao gồm
sử dụng ống polypropylene (12 75 mm) với chụp
mũ, làm nóng các tế bào trong dung dịch ở 65 ° C lysing 20
phút, và giải nén từng hai lần với hai khối lượng của
phenol-chloroform. Các lớp dung dịch nước (450 p.1) đã
bị thu hồi sau đó vào một ống microcentrifuge 1,5 ml và
điều chỉnh đến 0,3 M Na acetate bằng cách thêm 50 P.1 của 3 M Na
acetate. Các plasmid DNA đã bị kết tủa bởi một từ 15
phút tiếp xúc với hai khối lượng của cảm lạnh (-20 ° C) 95%
ethanol. DNA plasmid sau đó đã được lắng bởi từ 5
ly tâm phút trong một microcentrifuge, reprecipitated
lạnh với 70% ethanol và recentrifuged. Các ống
được phép không khí khô ngược trên mô phòng thí nghiệm sạch.
DNA sau đó được tái tạo trên 100 p.1 của Kado
và Liu thuốc nhuộm. Gel được chụp ảnh trên một mô hình C-62
transilluminator (Ultra-Violet Sản phẩm, Inc) với
55 loại phim (Polaroid Corp) tiếp xúc thông qua Wratten