Fig. 1. Determination of LAMP condi

Fig. 1. Determination of LAMP conditions at various temperatures using 10−3
(A) and 10−5 (B) dilutions of RNA extracted from TSV-infected shrimp. Lane M: molecular marker; lane 1: the reaction was carried out at 60 ◦C; lane 2: the reation was carried out at 63 ◦C; lane 3: carried out at 65 ◦C.


RT-LAMP products were detected at only 63 ◦C when using 10−3 and 10−5 dilution of RNA extracted from TSV infected sample (Fig. 1). No amplification product was found when the reaction was performed at 63 ◦C for 30 min. For the reaction time carried out at 63 ◦C for 45 and 60 min, LAMP products were detected (data not shown). However, for the complete amplifi- cation, the reaction time of 60 min was selected as an optimal reaction time.


3.2. Comparison in sensitivity between RT-LAMP, RT-PCR and nested RT-PCR

To compare the sensitivity of detection limit, RT-LAMP, RT-PCR and nested RT-PCR were carried out using var- ious concentrations of RNA extracted from TSV-infected shrimp as template. RT-LAMP was able to detect template at 10−5 dilution (Fig. 2), while the RT-PCR using OIE man- ual and nested RT-PCR using IQ2000TM TSV Detection and Prevention System were able to detect template at 10−4 (Fig. 3, lane 4) and 10−6 (Fig. 4, lane 4) dilutions, respec- tively.

Kết quả (Việt) 1:

Hình 1. Xác định các điều kiện đèn ở các nhiệt độ khác nhau bằng cách sử dụng 10−3(A) và 10−5 (B) dilutions của ARN được chiết xuất từ tôm nhiễm bệnh TSV. Lane M: phân tử đánh dấu; Lane 1: phản ứng đã được thực hiện tại 60 ◦C; Lane 2: reation đã được thực hiện tại 63 ◦C; Lane 3: thực hiện tại 65 ◦C.RT-đèn sản phẩm đã được phát hiện tại chỉ 63 ◦C khi sử dụng pha loãng 10−3 và 10−5 của ARN được chiết xuất từ TSV nhiễm mẫu (hình 1). Không có sản phẩm khuếch đại được tìm thấy khi phản ứng đã được trình diễn tại 63 ◦C cho 30 phút. Phản ứng trong thời gian thực hiện tại 63 ◦C cho 45 đến 60 phút, sản phẩm đèn là phát hiện (dữ liệu không hiển thị). Tuy nhiên, đối với đầy đủ amplifi-cation, thời gian phản ứng của 60 phút được chọn làm một thời gian phản ứng tối ưu.3.2. so sánh trong độ nhạy cảm giữa RT-đèn, RT-PCR và lồng RT-PCRĐể so sánh sự nhạy cảm của giới hạn phát hiện, RT-đèn, RT-PCR và RT-PCR lồng nhau được thực hiện bằng cách sử dụng var-ious nồng độ của RNA được chiết xuất từ tôm nhiễm bệnh TSV như mẫu. ĐÈN RT đã có thể phát hiện các mẫu tại 10−5 pha loãng (hình 2), trong khi RT-PCR sử dụng OIE người đàn ông-ual và lồng RT-PCR sử dụng IQ2000TM TSV phát hiện và phòng chống hệ thống đã có thể để phát hiện các mẫu tại 10−4 (hình 3, lane 4) và 10−6 (hình 4, lane 4) dilutions, respec-cách.

Kết quả (Việt) 2:

Sung. 1. Xác định điều kiện ĐÈN ở nhiệt độ khác nhau sử dụng 10-3
độ pha loãng của RNA chiết xuất từ tôm TSV nhiễm (A) và 10-5 (B). Ngõ M: marker phân tử; ngõ 1: phản ứng được thực hiện tại 60 ◦C; làn 2: các Reation được thực hiện tại 63 ◦C; ngõ 3:. thực hiện tại 65 ◦C


sản phẩm RT-LAMP đã được phát hiện tại chỉ có 63 ◦C khi sử dụng 10-3 và 10-5 pha loãng của RNA chiết xuất từ TSV nhiễm mẫu (Hình 1).. Không có sản phẩm khuếch đại được tìm thấy khi các phản ứng được thực hiện tại 63 ◦C trong 30 phút. Đối với thời gian phản ứng được thực hiện ở 63 ◦C trong 45 đến 60 phút, các sản phẩm ĐÈN đã được phát hiện (dữ liệu không hiển thị). Tuy nhiên, đối với các cation amplifi- hoàn thành, thời gian phản ứng là 60 phút được bình chọn là một thời gian phản ứng tối ưu.


3.2. So sánh độ nhạy giữa RT-LAMP, RT-PCR và lồng RT-PCR

Để so sánh độ nhạy của giới hạn phát hiện, RT-LAMP, RT-PCR và lồng RT-PCR được thực hiện bằng cách sử var- nồng ious của RNA chiết xuất từ TSV- tôm nhiễm như mẫu. RT-LAMP đã có thể phát hiện mẫu tại 10-5 pha loãng (Hình 2)., Trong khi RT-PCR sử dụng OIE thấu ual và lồng RT-PCR sử dụng IQ2000TM TSV Phát hiện và hệ thống ngăn chặn có thể phát hiện mẫu tại 10-4 (Hình. 3, ngõ 4) và 10-6 (Hình. 4, ngõ 4) pha loãng, respec- nhiễm.