RT-PCR results, they reported expre

RT-PCR results, they reported expression of this
gene late in the infection process (48 HPI), which
is the pattern of expression reported for this gene in
other iridoviruses. Although they demonstrated that
this gene is functional in RBIV infections, it remains
to be determined what, if any, role it plays in viral
replication or avoidance of host immune responses.
Viruses have evolved methods to regulate host
signaling pathways, thereby ensuring their survival
and propagation in host cells. One of these
methods involves the modulation of tumor necrosis
factor (TNF). Through bioinformatic analysis,
Huang et al. (2008) were able to identify a putative
lipopolysaccharide-induced TNF-α (LITAF)
homolog in the genome of SGIV. Expression patterns
of this gene were studied by RT-PCR and
Western blotting, which used antibodies raised
against recombinant LITAF produced inEscherichia
coli. This antibody was also used to localize LITAF
production in infected cells, where it was found to
be associated with mitochondria. To examine the
role in pathogenesis, cells were transfected with a
LITAF plasmid. Overexpression of LITAF induced
apoptosis, resulting in the depolarization of mitochondrial
membranes and activation of caspase 3.
Using a reported gene system, increased activity of
the transcription factors NF-κβ and NFAT was seen
in LITAF-expressing cells. These transcription factors
are involved in the regulation of cell cycles,
cell differentiation, apoptosis, as well as immune
response to virus. Taken together, these data provide
evidence that LITAF is important in viral replication,
transmission between cells, and possible evasion of
the host immune response (Huang et al. 2008).
Morpholinos are a commonly used knockdown
system, especially in embryological studies. They
are synthetic molecules that act by steric blocking
(binding to a target sequence within RNA) and physically
interfering with other molecules that would
normally interact with the RNA. This system has
been used to study gene function in two iridoviruses,
SGIV, and ISKNV (Wang et al. 2008a, 2008b). With
respect to SGIV, high abundances of the protein
encoded by the gene ORF018R were identified in
proteomic studies of SGIV, suggesting an important
role in infection (Song et al. 2004, 2006; Chen
et al. 2008). In addition, bioinformatic analysis of
this gene identified a partial serine/threonine kinase
domain, suggesting that the protein may be involved
in phosphorylation. Wang et al. (2008a) used an antisense
morpholino oligonucleotide (asMO) to knock
down SGIV ORF018R expression in virus growing
in an embryonic grouper cell line. They were
able to demonstrate dramatically reduced expression
of ORF018R, and corresponding partial inhibition
of expression of other SGIV genes normally
expressed during late stages of infection, blocking
of viral infection, effects on viral DNA packaging,
and virion assembly and enhanced phosphorylation
(Wang et al. 2008a). Effects on viral and host protein
phosphorylation state were confirmed by proteomics
analysis (2DE-MS). asMOs have also seen application
in studies of iridovirus gene function of other
groups of animals. For example, Sample et al. (2007)
used asMOs to examine the function of three genes
of the frog virus referred to as frog virus 3 (FV3)
growing in a fathead minnow (Pimephales promelas)
cell line. Using asMOs, these authors were able
to transiently knockdown the expression of genes
believed to be involved in a variety of points in this
virus’s lifecycle. These included the major capsid
protein (MCP), an 18 kDa immediate-early protein
(18K) and the FV3 homolog of the largest subunit
of RNA polymerase (vPol-IIα). Using transmission
electron microscopy to examine virus growth, the
authors were able to identify phenotypic changes
associated with the knockdown of MCP, as well
as the importance of MCP and vPol-IIα in the
replication of FV3 in this cell line. Collectively,
these studies provided a good demonstration of the
value of using asMOs to study the gene function in
pathogens

Kết quả (Việt) 1:

Kết quả RT-Đảng Cộng sản Romania, họ báo cáo các biểu hiện nàygen muộn trong quá trình bị nhiễm trùng (48 HPI), màlà các mô hình của biểu hiện gen này trong báo cáokhác iridoviruses. Mặc dù họ chứng minh rằnggen này là chức năng trong nhiễm trùng RBIV, nó vẫn cònđược xác định những gì, nếu có, vai trò nó đóng trong virussao chép hoặc tránh của phản ứng miễn dịch máy chủ lưu trữ.Virus đã phát triển các phương pháp để điều chỉnh máy chủ lưu trữcon đường tín hiệu, do đó đảm bảo sự sống còn của họvà tuyên truyền trong các máy chủ lưu trữ tế bào. Một trong nhữngphương pháp liên quan đến điều chế của hoại tử khối uyếu tố (TNF). Thông qua phân tích bioinformatic,Hoàng et al. (2008) đã có thể xác định một giả địnhgây ra lipopolysaccharide TNF-α (LITAF)homolog trong bộ gen của SGIV. Biểu mẫugen này được nghiên cứu bởi Đảng Cộng sản Romania RT vàTây thấm, sử dụng kháng thể lớn lênĐối với LITAF tái tổ hợp sản xuất inEscherichiacoli. Kháng thể này cũng được sử dụng để bản địa hoá LITAFsản xuất trong các tế bào bị nhiễm bệnh, nơi nó đã được tìm thấyđược liên kết với ti thể. Để kiểm tra cácvai trò trong bệnh sinh, tế bào đã được transfected với mộtLITAF plasmid. Tế của LITAF gây raquá trình chết rụng, dẫn đến depolarization của ti thểmàng tế bào và kích hoạt caspase 3.Sử dụng một hệ thống báo cáo gen, tăng hoạt động củasao chép yếu tố NF-κβ và NFAT đã được nhìn thấytrong các tế bào LITAF thể hiện. Những yếu tố phiên mãtham gia vào các quy định của chu kỳ tế bào,sự khác biệt tế bào, quá trình chết rụng, cũng như các miễn dịchphản ứng vi rút. Lấy nhau, những dữ liệu này cung cấpbằng chứng rằng LITAF là quan trọng trong nhân rộng virus,truyền giữa các tế bào, và có thể trốn củaCác máy chủ lưu trữ miễn dịch phản ứng (hoàng et al. 2008).Morpholinos là một knockdown thường được sử dụngHệ thống, đặc biệt là trong các nghiên cứu embryological. Họlà tổng hợp các phân tử hoạt động bằng cách ngăn chặn steric(ràng buộc để một chuỗi các mục tiêu trong RNA) và thể chấtcan thiệp với các phân tử khác nàobình thường tương tác với RNA. Hệ thống này cóđược sử dụng để nghiên cứu gen chức năng trong hai iridoviruses,SGIV, và ISKNV (Wang et al. 2008a, 2008b). VớiĐối với SGIV, cao phát của proteinmã hóa bởi gen ORF018R đã được xác định trongproteomic nghiên cứu của SGIV, cho thấy một quan trọngvai trò trong nhiễm trùng (bài hát et al. 2004, 2006; Chenet al. 2008). Ngoài ra, bioinformatic phân tích củagen này xác định một kinase serine/threonine một phầntên miền, gợi ý rằng các protein có thể được tham giaở phosphorylation. Wang et al. (2008a) sử dụng một antisensemorpholino oligonucleotide (asMO) để gõxuống SGIV ORF018R biểu hiện trong virus phát triểntrong một dòng tế bào phôi cá. Họ đãcó thể chứng minh đáng kể giảm biểu hiệnORF018R, và ức chế một phần tương ứngbiểu hiện của các gen SGIV bình thườngthể hiện trong các giai đoạn cuối của nhiễm trùng, chặnviral nhiễm trùng, các hiệu ứng trên virus ADN bao bì,và virion hội và tăng cường phosphorylation(Wang et al. 2008a). Hiệu ứng về virus và lưu trữ các proteinphosphorylation bang đã được xác nhận bởi proteomicphân tích (2DE-MS). asMOs cũng thấy ứng dụngtrong các nghiên cứu của iridovirus gen chức năng khácNhóm động vật. Ví dụ, mẫu et al. (2007)sử dụng asMOs để kiểm tra các chức năng của ba genếch virus được gọi là ếch virus 3 (FV3)phát triển trong một fathead minnow (Pimephales promelas)dòng tế bào. Sử dụng asMOs, các tác giả đã có thểđể mặt knockdown sự biểu hiện của gencho là tham gia vào một số điểm ở đâyvòng đời của vi rút. Chúng bao gồm capsid lớnprotein (MCP), một protein ngay lập tức đầu 18 kDa(18K) và homolog FV3 của tiểu đơn vị lớn nhấtcủa RNA-polymerase (vPol-IIα). Bằng cách sử dụng truyềnkính hiển vi điện tử để kiểm tra tốc độ tăng trưởng của vi rút, cáctác giả đã có thể để xác định các kiểu hình thay đổiliên kết với knockdown MCP, cũngnhư tầm quan trọng của MCP và vPol-IIα trong cácbản sao của FV3 trong dòng tế bào này. Nói chung,Các nghiên cứu này cung cấp một cuộc biểu tình tốt của cácgiá trị của việc sử dụng asMOs để nghiên cứu các chức năng gene trongtác nhân gây bệnh

Kết quả (Việt) 2:

Kết quả RT-PCR, họ báo cáo này biểu hiện của
gen trễ trong quá trình lây nhiễm (48 HPI), đó
là dạng biểu hiện báo cáo của gen trong
iridoviruses khác. Mặc dù họ đã chứng minh rằng
gen này là chức năng trong nhiễm RBIV, nó vẫn
được xác định những gì, nếu có, vai trò của nó trong virus
sao chép hoặc tránh các phản ứng miễn dịch của vật chủ.
virus đã phát triển các phương pháp để điều chỉnh máy chủ
con đường tín hiệu, do đó đảm bảo sự sống còn của họ
và tuyên truyền trong tế bào vật chủ. Một trong những
phương pháp liên quan đến việc điều chế các khối u hoại tử
yếu tố (TNF). Thông qua phân tích tin sinh học,
Huang et al. (2008) đã có thể xác định một giả định
lipopolysaccharide gây ra TNF-α (LITAF)
homolog trong hệ gen của SGIV. Mô hình biểu hiện
của gen này đã được nghiên cứu bằng RT-PCR và
Western blotting, trong đó sử dụng các kháng thể nâng lên
chống tái tổ hợp sản xuất LITAF inEscherichia
coli. Kháng thể này cũng được sử dụng để bản địa hoá LITAF
sản xuất trong các tế bào bị nhiễm, nơi nó được tìm thấy
được liên kết với ty thể. Để kiểm tra các
vai trò sinh bệnh học, các tế bào được transfected với một
plasmid LITAF. Quá mức của LITAF gây ra
apoptosis, dẫn đến quá trình khử cực của ti thể
màng và kích hoạt caspase 3.
Sử dụng một hệ thống gen được báo cáo, tăng hoạt động của
các yếu tố phiên mã NF-κβ và NFAT đã được nhìn thấy
trong các tế bào LITAF diễn đạt. Những yếu tố phiên mã
có liên quan đến các quy định của chu kỳ tế bào,
phân chia tế bào, quá trình apoptosis, cũng như miễn dịch
phản ứng với virus. Gộp chung lại, những dữ liệu này cung cấp
bằng chứng rằng LITAF là quan trọng trong sự sao chép của virus,
lây truyền giữa các tế bào, và có thể trốn trong
các phản ứng miễn dịch của vật chủ (Huang et al. 2008).
Morpholinos là một knockdown thường được sử dụng
hệ thống, đặc biệt là trong các nghiên cứu phôi thai. Họ
là những phân tử tổng hợp có tác động bằng cách ngăn chặn steric
(liên kết với một chuỗi mục tiêu trong phạm vi RNA) và thể chất
can thiệp với các phân tử khác sẽ
thường tương tác với các RNA. Hệ thống này đã
được sử dụng để nghiên cứu chức năng gen ở hai iridoviruses,
SGIV, và ISKNV (Wang et al. 2008a, 2008b). Với
sự tôn trọng để SGIV, phong phú cao của protein
được mã hóa bởi các gen ORF018R đã được xác định trong
các nghiên cứu của proteomic SGIV, cho thấy một quan trọng
trong vai trò nhiễm (Song et al 2004, 2006;. Chen
et al 2008).. Ngoài ra, phân tích tin sinh học của
gen này đã xác định một kinase serine / threonine một phần
miền, cho thấy rằng các protein có thể được tham gia
vào sự phosphoryl hóa. Wang et al. (2008a) đã sử dụng một antisense
oligonucleotide morpholino (asMO) gõ
xuống biểu SGIV ORF018R trong virus phát triển
trong một dòng tế bào phôi cá mú. Họ đã
có thể chứng minh giảm đáng kể biểu hiện
của ORF018R, và tương ứng ức chế một phần
biểu hiện của gen SGIV khác thường
thể hiện trong giai đoạn cuối của nhiễm trùng, ngăn chặn
lây nhiễm virus, các hiệu ứng trên bao bì virus DNA,
và lắp ráp virion và tăng cường sự phosphoryl hóa
(Wang et al 2008a.). Tác dụng trên virus và protein chủ
nhà nước đã được xác nhận bởi sự phosphoryl hóa protein
phân tích (2DE-MS). asMOs cũng đã thấy ứng dụng
trong các nghiên cứu về chức năng gen của iridovirus khác
nhóm động vật. Ví dụ, Mẫu et al. (2007)
sử dụng asMOs để kiểm tra các chức năng của ba gen
của virus ếch gọi là vi rút ếch 3 (FV3)
ngày càng tăng trong một minnow đần độn (Pimephales promelas)
dòng tế bào. Sử dụng asMOs, các tác giả đã có thể
để thoáng rời sự biểu hiện của gen
được cho là tham gia vào một loạt các điểm trong này
vòng đời của virus. Chúng bao gồm các chính capsid
protein (MCP), một protein 18 kDa ngay-đầu
(18K) và homolog FV3 của tiểu đơn vị lớn nhất
của RNA polymerase (vPol-IIα). Sử dụng truyền tải
hiển vi điện tử để kiểm tra sự phát triển virus, các
tác giả đã có thể xác định những thay đổi kiểu hình
gắn liền với knockdown của MCP, cũng
như tầm quan trọng của MCP và vPol-IIα trong
nhân rộng FV3 ở dòng tế bào này. Chung,
các nghiên cứu này cung cấp một trình diễn tốt của các
giá trị của việc sử dụng asMOs để nghiên cứu chức năng gen trong
các mầm bệnh