The observation that the trypsin in

The observation that the trypsin inhibitory activity in the crude extracts of these seeds is stable at 700C for 10 min has led to the use of this treatment as the first step in the purification of the inhibitor. This step also helps in the removal of the endogenous proteolytic activity present in the seed extracts [32]. About 50 % of the proteins present in the crude extract were removed by this step. When the ammonium sulphate fraction was subjected to CM-cellulose column chromatography, protease inhibitory activity was found to be associated with the protein eluted from the column by 0.3M NaCl. SNTI has been found to be homogeneous by the criteria of native PAGE and gel filtration. HPLC analysis revealed a single peak which represents the purity of the compound.

Protease inhibitors have been separated by several gel electrophoretic methods. Anionic inhibitors have been examined by the Davis method [43], cationic inhibitors by the Reisfeld method [32] and neutral inhibitors by Weber and Osborn [44] and Laemmli [45] methods. While these methods have proved useful for establishing the purity and determining the molecular weight of proteins, they cannot be used to distinguish isoinhibitors or compare the activity of the particular inhibitor against different proteolytic enzymes. SNTI in all the fractions during its purification showed a single inhibitory band specific to trypsin on gelatin PAGE. A single inhibitory band also signifies the absence of isoforms which are common in many sources [46], [47], [48].

The molecular weight of SNTI as determined by SDS-PAGE was 29 kDa. This is close to the value 28.5 kDa obtained for the inhibitor by gel filtration on Sephadex G-100. Some protease inhibitors have exhibited anomalous behavior on Sephadex gel columns due to the existence of oligomeric forms of inhibitors arising from monomer– dimer – trimer equilibrium [49], [50], [51] or due to the presence of carbohydrate moieties. The subunit nature of SNTI has been analyzed by the SDS – PAGE technique. The inhibitor showed a single sharp band on SDS – PAGE when stained with silver supporting the monomeric nature of the protein. Further SNTI did not give positive result with PAS stain suggesting it free from carbohydrate moieties. Most of the trypsin inhibitors are non-glycoproteins. Papain inhibitor from potato tubers is a glycoprotein with a molecular weight of 80 kDa [52]. Shakuntala [53] first identified a glycoprotein trypsin inhibitor from Jack fruit seeds and to possess lectin activity.

The unusual stability of protease inhibitors, in general, is their most remarkable property. SNTI showed similarities to other protease inhibitors from soy bean [54] in their stability. The low cysteine content [35] in these inhibitors negates the possibility of the stability of the inhibitors rendered due to extensive intra-peptide cross - linking. However, the unusual stability of the inhibitor may be due to strong hydrophobic interactions forming an inner core in the protein.

The result of the investigation of the inhibitory specificity of SNTI has shown it to be a serpin and is strongly active against bovine trypsin and porcine elastase. SNTI was ineffective against other proteases such as papain (thiol), pepsin (carboxyl) and thermolysin (metallo). Majority of plant protease inhibitors isolated so far have been found to be specific for serine proteases [55]. However, there are reports of plant protease inhibitors inhibiting other classes of proteases. The trypsin/ chymotrypsin inhibitor from broad beans inhibits the sulphydryl enzyme papain [56]. Serine protease inhibitors such as barley subtilisin inhibitor [57] and wheat germ protease K inhibitor [58] are found to be active against α – amylases. The human LEKTI has 15 domains and inhibits plasmin, trypsin, elastase, subtilisin A and cathepsin G [59].

As regards the mechanism of action, SNTI has shown a non-competitive type of inhibition. Although a few like soybean trypsin inhibitor has shown the competitive type of inhibition, the majority of the inhibitors follows non-competitive inhibition kinetics [46]. Jack fruit seed protease inhibitor isolated by Annapurna et al., [42] also showed non-competitive enzyme inhibition but the one isolated by Bhat [60] exhibited uncompetitive inhibition. The Ki value of SNTI was found to be 0.75+0.05x10-10 M. The low Ki value indicates high affinity of SNTI towards trypsin.

The formation of stable trypsin inhibitor complex has been demonstrated by Sephadex G-100 gel filtration studies. The results obtained suggest that the inhibitor binds to trypsin in a 1:1 molar ratio. SNTI is a mono-headed inhibitor with a site for trypsin. Double-headed inhibitors with overlapping or non-overlapping binding sites are reported from plant sources [42], [53].

Protein modelling is now widely used in docking studies which paved way for the availability of disease causing target proteins in living organisms. SNTI has a stretch of 278 amino acids and the gut proteases from H. armigera and S. frugiperda are 119 and 254 amino acid residues respectively. In the present study two different modeling approaches homology and threading were used based on the availability of the template. The protein SNTI was modeled using the homology modeling approach as the sequence similarity between the template and target is more than 40 % whereas for the gut proteases from insects the structure was modeled using threading approach. The main difference between the homology modeling and threading is that in homology modeling the structure is built based on the sequence of the template whereas in threading it uses the knowledge of folds. Upon validation of the modeled proteins the structures are found to be reliable for subjecting to docking as about more than 80 % of amino acids fall in favorable regions of Ramachandran plot. The protein-protein docking and interaction analysis have indicated that the interacting residues between the surfaces of the docked proteins are the same residues that were predicted by Site Map. As the interactions involves the binding site residues with strong hydrogen bond and Van der Walls forces, these studies indicate that SNTI have shown potent activity against the gut proteases. Further evaluation of the study using wet lab techniques could bring out a natural source of bio-pesticide.SNTI belongs to the Serine Cereal super family and was found to exhibit both anti-bacterial and anti-fungal activity [61]. SNTI was reported to have anti-bacterial and anti-fungal activity but till date no adequate literature is available on insecticidal activity of SNTI, but SSTI was shown to exhibit insecticidal activity. As SNTI was reported to have anti-bacterial and anti-fungal activity, it might also possess insecticidal activity and hence was evaluated using various in silico tools. The sequence of SNTI obtained from MALDI-TOF [35] and the gut proteases of H. armigera and S. frugiperda were subjected to modeling. The resultant structures were validated and then subjected for protein-protein docking to understand the inhibitory role of SNTI on larval gut proteases.

Conclusion
Results demonstrate that SNTI is a very stable, purified and highly potent trypsin inhibitor. Inhibitors of proteinases have been successfully engineered for protection of plants against pests and microorganisms. Protease inhibitors are proficient in interfering with digestive enzymes of insect gut and hence are able to control them. The overall structural quality of three proteins SNTI, Kazal type serine protease and trypsin protease validated by ERRAT server was found to be 86.02, 86.96 and 81.04 %. Docking results reveal that SNTI strongly interacts by hydrogen bonds and Vander Waals forces with the gut proteases at their active sites. SNTI binds at the active sites of gut protease enzymes which renders them inactive. This blocks the process of breaking down of nutrient proteins thereby causing malnourishment of the larvae leading to lethality. Hence Protease inhibitors can be commonly used as natural bio-pesticides in controlling pests.

Further analysis of structure, protein-protein interactions and diverse biological activities of SNTI on different proteases of diverse biological origins need to be carried out to confirm the biotechnological potential of SNTI as a bio control agent and its therapeutic potentials. Compromises between increased complexity, pharmacokinetic profiles, and drug affordability will challenge biochemists to find new general methods for the simple creation of new inhibitors, which are potent, selective and bioavailable or to find better methods for efficient delivery of protein inhibitors against proteases. We hope that this endeavor can help to stimulate new efforts towards achieving such goals.

Kết quả (Việt) 1:

Quan sát các trypsin ức chế hoạt động trong các chất chiết xuất thô của các hạt giống là ổn định ở 700C cho 10 phút đã dẫn đến việc sử dụng của điều trị này như là bước đầu tiên trong thanh lọc chất ức chế. Bước này cũng giúp trong việc loại bỏ proteolytic nội sinh hoạt động có trong chiết xuất hạt giống [32]. Khoảng 50% các protein trong các chiết xuất dầu thô được tháo dỡ bởi bước này. Khi amoni sulfat phần đã phải chịu để CM-cellulose cột sắc kí, protease ức chế hoạt động đã được tìm thấy được liên kết với protein eluted từ cột bằng cách 0.3 M NaCl. SNTI đã được tìm thấy để được đồng nhất bằng tiêu chí của bản xứ trang và gel lọc. Hệ HPLC phân tích cho thấy một đỉnh cao duy nhất đại diện cho sự tinh khiết của các hợp chất.Chất ức chế protease đã được tách ra bởi một số gel electrophoretic phương pháp. Anion ức chế đã được kiểm tra bởi Davis phương pháp [43], cation ức chế bằng phương pháp Reisfeld [32] và trung lập ức chế bởi Weber và Osborn [44] và Laemmli [45] phương pháp. Trong khi các phương pháp này đã tỏ ra hữu ích cho việc thiết lập độ tinh khiết và xác định trọng lượng phân tử protein, họ không thể được sử dụng để phân biệt isoinhibitors hoặc so sánh các hoạt động của chất ức chế cụ thể chống lại khác nhau proteolytic enzym. SNTI trong tất cả các phần phân đoạn trong thanh lọc của nó cho thấy một ban nhạc duy nhất ức chế cụ thể cho trypsin trên gelatin trang. Một ban nhạc ức chế duy nhất cũng có nghĩa là sự vắng mặt của isoforms được phổ biến trong nhiều nguồn [46], [47], [48].Trọng lượng phân tử của SNTI được xác định bởi dùng mũi SDS-trang là 29 kDa. Điều này là gần với giá trị 28.5 kDa thu được cho chất ức chế bởi gel lọc trên Sephadex G-100. Một số chất ức chế protease có trưng bày các hành vi bất thường trên Sephadex gel cột do sự tồn tại của các hình thức oligomeric của các chất ức chế phát sinh từ monomer-dimer-trimer cân bằng [49], [50] [51] hoặc do sự hiện diện của carbohydrate moieties. Bản chất tiểu đơn vị của SNTI đã được phân tích bằng cách dùng mũi SDS-trang kỹ thuật. Chất ức chế cho thấy một ban nhạc sắc nét duy nhất trên dùng mũi SDS-trang khi màu với bạc hỗ trợ monomeric bản chất của protein. Thêm SNTI không cho kết quả dương tính với PAS vết cho thấy nó miễn phí từ carbohydrate moieties. Hầu hết các chất ức chế trypsin là glycoprotein phòng không. Papain chất ức chế từ củ khoai tây là một glycoprotein với trọng lượng phân tử của 80 kDa [52]. Shakuntala [53] lần đầu tiên xác định một chất ức chế trypsin glycoprotein từ Jack trái cây hạt giống và có lectin hoạt động.Sự ổn định bất thường của chất ức chế protease, nói chung, là tài sản đáng chú ý nhất của họ. SNTI đã cho thấy điểm tương đồng để ức chế protease khác từ đậu nành đậu [54] sự ổn định của họ. Nội dung thấp cysteine [35] trong các chất ức chế phủ nhận khả năng của sự ổn định của chất ức chế kết xuất do mở rộng nội-peptide cross - liên kết. Tuy nhiên, sự ổn định bất thường của chất ức chế có thể là do mạnh tương tác kỵ nước tạo thành một lõi trong trong protein.Kết quả của việc điều tra của các đặc trưng ức chế của SNTI đã cho thấy nó để là một serpin và hoạt động mạnh mẽ chống lại bò trypsin và porcine elastase. SNTI là không hiệu quả chống lại các protease chẳng hạn như papain (sulfhydryl), pepsin (carboxyl) và thermolysin (metallo). Phần lớn các chất ức chế protease thực vật bị cô lập cho đến nay đã được tìm thấy là cụ thể cho serine protease [55]. Tuy nhiên, có những báo cáo thực vật chất ức chế protease ức chế các lớp học khác của protease. Trypsin / chất ức chế chymotrypsin từ broad đậu ức chế enzym sulphydryl papain [56]. Serine protease ức chế chẳng hạn như lúa mạch subtilisin chất ức chế [57] và mầm lúa mì chất ức chế protease K [58] được tìm thấy hoạt động chống lại α-Amylase. LEKTI của con người có 15 tên miền và ức chế kích, trypsin, elastase, subtilisin A và cathepsin G [59].Đối với cơ chế hoạt động, SNTI đã cho thấy một loại không cạnh tranh của sự ức chế. Mặc dù một vài như đậu tương chất ức chế trypsin có hiển thị các loại cạnh tranh của sự ức chế, phần lớn các chất ức chế sau sự ức chế không cạnh tranh động học [46]. Jack trái cây hạt giống protease chất ức chế cô lập bởi Annapurna et al., [42] cũng cho thấy sự ức chế enzym không cạnh tranh nhưng một cô lập bởi Bhat [60] trưng bày uncompetitive ức chế. Giá trị Ki của SNTI được tìm thấy là 0,75 + 0,05 x 10-10 M. Giá trị Ki thấp chỉ ra mối quan hệ cao của SNTI đối với trypsin.Sự hình thành của chất ức chế ổn định trypsin phức tạp đã được chứng minh bởi Sephadex G-100 gel lọc nghiên cứu. Kết quả thu được đề nghị rằng chất ức chế liên kết với trypsin theo tỉ lệ 1:1 phân tử. SNTI là một chất ức chế mono đứng đầu với một trang web cho trypsin. Ức chế đôi đứng đầu với chồng chéo hoặc không chồng chéo ràng buộc các trang web được báo cáo từ nguồn thực vật [42], [53].Protein mô hình được bây giờ rộng rãi sử dụng trong ụ tàu nghiên cứu đó đã mở đường cho sự sẵn có của bệnh gây ra mục tiêu protein trong sinh vật sống. SNTI có một căng 278 axit amin và protease ruột từ H. armigera và S. frugiperda là dư lượng axit amin 119 và 254 tương ứng. Trong nghiên cứu hiện nay hai khác nhau mô hình đồng điều phương pháp tiếp cận và luồng được sử dụng dựa trên sự sẵn có của các mẫu. Protein SNTI được mô hình bằng cách sử dụng tương đồng mô hình hóa cách tiếp cận như sự tương tự giữa các mẫu và mục tiêu là hơn 40% trong khi cho protease ruột từ côn trùng cấu trúc được mô hình bằng cách sử dụng phương pháp tiếp cận luồng. Sự khác biệt chính giữa tương đồng mô hình hóa và luồng là rằng trong tương đồng mô hình cấu trúc được xây dựng dựa trên trình tự của các mẫu trong khi trong luồng nó sử dụng các kiến thức về nếp gấp. Sau khi xác nhận của các protein modeled các cấu trúc được tìm thấy là đáng tin cậy cho subjecting để lắp ghép như về nhiều hơn 80% axit amin rơi vào các khu vực thuận lợi của Ramachandran cốt truyện. Protein-protein lắp ghép và tương tác phân tích đã chỉ ra rằng dư lượng tương tác giữa các bề mặt của các protein cập cảng là các dư lượng tương tự đã được dự đoán bởi bản đồ trang web. Như các tương tác liên quan đến dư lượng trang web liên kết với mạnh mẽ hydro trái phiếu và các bức tường Van der lực lượng, các nghiên cứu chỉ ra rằng SNTI đã cho thấy các hoạt động mạnh chống lại protease ruột. Thêm đánh giá của nghiên cứu bằng cách sử dụng kỹ thuật phòng thí nghiệm ẩm ướt có thể đưa ra một nguồn tự nhiên của thuốc trừ sâu sinh học. SNTI thuộc về ngũ cốc Serine siêu gia đình và đã được tìm thấy để triển lãm hoạt động cả chống vi khuẩn và chống nấm [61]. SNTI có hoạt động chống vi khuẩn và chống nấm nhưng đến nay không có văn học đầy đủ có sẵn trên các hoạt động chống côn trùng của SNTI, nhưng thiệu được hiển thị để triển lãm các hoạt động chống côn trùng. Như SNTI được thông báo là có hoạt động chống vi khuẩn và chống nấm, nó có thể cũng có hoạt động chống côn trùng và do đó được đánh giá bằng cách sử dụng khác nhau trong silico công cụ. Trình tự của SNTI thu được từ MALDI-TOF [35] và protease ruột của H. armigera và S. frugiperda đã phải chịu để mô hình hóa. Các cấu trúc kết quả đã được xác nhận và sau đó phải chịu cho protein-protein ụ tàu để hiểu vai trò ức chế của SNTI vào protease ấu trùng đường ruột.Kết luậnKết quả chứng minh rằng SNTI là một chất ức chế rất ổn định, tinh khiết và rất mạnh trypsin. Ức chế của proteinases đã được thiết kế thành công để bảo vệ chống lại sâu bệnh và vi sinh vật thực vật. Chất ức chế protease có đặc biệt trong can thiệp với enzyme tiêu hóa của côn trùng đường ruột và do đó có thể để kiểm soát chúng. Chất lượng tổng thể cấu trúc của ba protein SNTI, Kazal loại serine protease và trypsin protease xác nhận bởi máy chủ ERRAT được tìm thấy là 86.02, 86.96 và 81.04%. Ổ cắm cho kết quả cho thấy rằng SNTI tương tác mạnh mẽ của liên kết hydro và Vander Waals lực lượng với protease ruột lúc trang web hoạt động của họ. SNTI liên kết với các trang web hoạt động của các enzym protease ruột mà làm cho chúng không hoạt động. Điều này ngăn chặn quá trình phá vỡ của protein dinh dưỡng do đó gây ra đôi của ấu trùng dẫn đến mức độ sát thương. Do đó ức chế Protease có thể được sử dụng phổ biến như sinh học tự nhiên-thuốc trừ sâu trong kiểm soát sâu bệnh.Tiếp tục phân tích cấu trúc, protein-protein tương tác và hoạt động đa dạng sinh học của SNTI vào protease khác nhau về nguồn gốc đa dạng sinh học cần thiết để được thực hiện để xác nhận tiềm năng doanh của SNTI như là một tác nhân kiểm soát sinh học và tiềm năng điều trị của nó. Thỏa hiệp giữa tăng phức tạp, pharmacokinetic hồ sơ, và khả năng chi trả thuốc sẽ thách thức các nhà hóa sinh để tìm phương pháp tổng hợp mới cho việc tạo ra đơn giản ức chế mới, mà là mạnh, chọn lọc và bioavailable hoặc để tìm các phương pháp tốt hơn cho phân phối hiệu quả các protein ức chế chống lại protease. Chúng tôi hy vọng rằng nỗ lực này có thể giúp để kích thích các nỗ lực mới hướng tới việc đạt được mục tiêu đó.

Kết quả (Việt) 2:

Các quan sát hoạt động ức chế trypsin trong chiết xuất dầu thô của các hạt giống là ổn định ở 700C trong 10 phút đã dẫn đến việc sử dụng của điều trị này là bước đầu tiên trong việc làm sạch các chất ức chế. Bước này cũng giúp trong việc loại bỏ các nội sinh hiện hoạt động phân giải protein trong các chiết xuất từ hạt [32]. Khoảng 50% trong số các protein có trong dịch chiết thô đã được gỡ bỏ bước này. Khi phần amoni sulfat đã bị sắc ký cột CM-cellulose, hoạt động ức chế protease đã được tìm thấy được liên kết với các protein được tách rửa từ cột bằng 0.3M NaCl. SNTI đã được tìm thấy là đồng nhất theo các tiêu chí của TRANG bản địa và lọc gel. Phân tích HPLC cho thấy một đỉnh cao duy nhất đại diện cho sự thuần khiết của hợp chất. Các chất ức chế protease đã được tách ra bởi một số phương pháp điện di gel. Các chất ức chế anion đã được kiểm tra bằng phương pháp Davis [43], các chất ức chế cation theo phương pháp Reisfeld [32] và các chất ức chế trung lập bởi [45] Phương pháp Weber và Osborn [44] và Laemmli. Trong khi các phương pháp đã được chứng minh rất hữu ích cho việc thiết lập độ tinh khiết và xác định trọng lượng phân tử của protein, họ không thể được sử dụng để phân biệt isoinhibitors hoặc so sánh hoạt động của các chất ức chế đặc biệt đối với các enzym thủy phân protein khác nhau. SNTI trong tất cả các phân số trong sạch của nó cho thấy một băng ức chế duy nhất cụ thể để trypsin trên TRANG gelatin. Một ban nhạc ức chế duy nhất cũng có nghĩa là sự vắng mặt của đồng dạng được phổ biến tại nhiều nguồn [46], [47], [48]. Các trọng lượng phân tử của SNTI như được xác định bởi SDS-PAGE là 29 kDa. Điều này là gần với giá trị 28,5 kDa thu được cho các chất ức chế bằng cách lọc gel Sephadex G-trên 100. Một số thuốc ức chế protease đã trưng bày hành vi bất thường trên các cột gel Sephadex do sự tồn tại của các hình thức oligomeric các chất ức chế phát sinh từ dimer monomer- - cân bằng tam phân [49], [50], [51] hoặc do sự hiện diện của các gốc carbohydrate. Bản chất của tiểu đơn vị SNTI đã được phân tích bởi SDS - PAGE kỹ thuật. Các chất ức chế cho thấy một băng nhọn duy nhất trên SDS - PAGE khi nhuộm bằng bạc hỗ trợ tính chất monomeric của protein. Hơn nữa SNTI đã không cho kết quả dương tính với PAS vết cho thấy nó miễn phí từ các gốc carbohydrate. Hầu hết các chất ức chế trypsin là phi-glycoprotein. Papain chất ức chế từ củ khoai tây là một glycoprotein có trọng lượng phân tử 80 kDa [52]. Shakuntala [53] đầu tiên xác định được một chất ức chế trypsin glycoprotein từ hạt trái cây Jack và có hoạt tính lectin. Sự ổn định bình thường của các chất ức chế protease, nói chung, là tài sản đáng chú ý nhất của họ. SNTI cho thấy điểm tương đồng với các chất ức chế protease khác từ đậu nành [54] trong sự ổn định của họ. Các nội dung cysteine ​​thấp [35] trong những chất ức chế phủ nhận khả năng của sự ổn định của các thuốc ức chế kết xuất do cross nội peptide rộng - liên kết. Tuy nhiên, sự ổn định bất thường của các chất ức chế có thể là do tương tác kỵ nước mạnh hình thành một lõi bên trong protein. Kết quả của cuộc điều tra về các đặc tính ức chế của SNTI đã cho thấy đó là một serpin và đang hoạt động mạnh mẽ chống lại trypsin trâu, bò và lợn elastase. SNTI không có hiệu quả chống lại các protease khác như papain (thiol), pepsin (cacboxyl) và thermolysin (metallo). Đa số các chất ức chế protease thực vật bị cô lập cho đến nay đã được tìm thấy là cụ thể cho các protease serine [55]. Tuy nhiên, có những báo cáo của các chất ức chế protease thực vật ức chế các lớp học khác của protease. Các chất ức chế trypsin / chymotrypsin từ đậu tằm ức chế enzym papain sulphydryl [56]. Các chất ức chế serine protease như lúa mạch subtilisin chất ức chế [57] và mầm lúa mì protease inhibitor K [58] được tìm thấy khả năng chống lại α - amylase. Các LEKTI con người có 15 lĩnh vực và ức chế plasmin, trypsin, elastase, subtilisin A và cathepsin G [59]. Về cơ chế hoạt động, SNTI đã thể hiện một kiểu không cạnh tranh ức chế. Mặc dù một vài giống như chất ức chế trypsin của đậu nành đã cho thấy là kiểu cạnh tranh ức chế, phần lớn các chất ức chế sau động học ức chế không cạnh tranh [46]. Jack hạt giống cây thuốc ức chế protease bị cô lập bởi Annapurna et al., [42] cũng cho thấy sự ức chế enzyme không cạnh tranh nhưng một bị cô lập bởi Bhat [60] trưng bày ức chế cạnh tranh. Các giá trị của Ki SNTI đã được tìm thấy là 0,75 + 0.05x10-10 M. Các Ki giá trị thấp chỉ ra ái lực cao của SNTI hướng trypsin. Sự hình thành ổn định phức tạp trypsin inhibitor đã được chứng minh bởi Sephadex G-100 nghiên cứu lọc gel. Các kết quả thu được cho thấy rằng các chất ức chế liên kết với trypsin trong một tỉ lệ 1: 1 mol. SNTI là một chất ức chế mono đầu với một trang web cho trypsin. Hai đầu ức chế với chồng chéo hoặc không chồng chéo các trang web liên kết được báo cáo từ các nguồn thực vật [42], [53]. Protein mô hình hiện nay được sử dụng rộng rãi trong các nghiên cứu docking mở đường cho sự sẵn có của bệnh gây ra các protein đích trong cơ thể sống. SNTI có dải 278 axit amin và các protease từ ruột H. armigera và S. frugiperda là 119 và 254 amino acid tương ứng. Trong nghiên cứu hai mô hình khác nhau tiếp cận tương đồng và luồng được sử dụng dựa trên sự sẵn có của các mẫu. Các protein SNTI được mô hình hóa bằng cách sử dụng phương pháp tiếp cận mô hình hóa tương đồng như sự tương tự giữa các mẫu và mục tiêu là hơn 40% trong khi đối với các protease ruột từ côn trùng, công trình được mô phỏng bằng các phương pháp tiếp cận luồng. Sự khác biệt chính giữa các mô hình tương đồng và luồng là trong mô hình hóa tương đồng cấu trúc được xây dựng dựa trên trình tự của mẫu trong khi luồng nó sử dụng các kiến thức của các nếp gấp. Sau khi xác nhận của các protein mô hình cấu trúc được tìm thấy là đáng tin cậy cho phải chịu để docking là khoảng hơn 80% acid amin rơi ở vùng thuận lợi của Ramachandran âm mưu. Các docking protein-protein và phân tích tương tác đã chỉ ra rằng dư lượng tương tác giữa các bề mặt của protein cập cảng là dư lượng tương tự đã được dự đoán bởi Site Map. Như sự tương tác liên quan đến các dư lượng trí gắn với liên kết hydro mạnh mẽ và Van der Walls lực lượng, các nghiên cứu chỉ ra rằng SNTI đã cho thấy hoạt động mạnh chống lại các protease ruột. Đánh giá thêm về các nghiên cứu sử dụng kỹ thuật phòng thí nghiệm ẩm ướt có thể đưa ra một nguồn tự nhiên của sinh học pesticide.SNTI thuộc về gia đình siêu Serine ngũ cốc và đã được tìm thấy để triển lãm cả chống vi khuẩn và chống nấm hoạt động [61]. SNTI được báo cáo là có tác dụng chống vi khuẩn và chống nấm hoạt động, nhưng cho đến nay chưa có tài liệu đầy đủ có sẵn trên hoạt động của côn SNTI, nhưng SSTI được hiển thị để triển lãm hoạt động côn. Như SNTI được báo cáo là có hoạt tính kháng khuẩn và chống nấm, nó cũng có thể có hoạt tính diệt côn trùng và do đó được đánh giá bằng cách sử dụng các công cụ khác nhau trong silico. Trình tự của SNTI thu được từ MALDI-TOF [35] và các protease ruột của H. armigera và S. frugiperda đã phải chịu đến người mẫu. Các cấu trúc kết quả đã được xác nhận và sau đó được cho docking protein-protein để hiểu được vai trò ức chế của SNTI trên protease ruột của ấu trùng. Kết luận Kết quả chứng minh rằng SNTI là một chất ức chế trypsin rất ổn định, tinh khiết và hiệu lực cao. Các chất ức chế của proteinases đã được thiết kế thành công cho bảo vệ của cây chống lại côn trùng và vi sinh vật. Các chất ức chế protease là thành thạo trong can thiệp với các enzym tiêu hóa của ruột côn trùng và do đó có thể kiểm soát chúng. Chất lượng kết cấu tổng thể của ba protein SNTI, Kazal loại serine protease và trypsin protease xác nhận bởi máy chủ ERRAT đã được tìm thấy là 86,02, 86,96 và 81,04%. Kết quả Docking tiết lộ rằng SNTI tương tác mạnh của liên kết hydro và lực lượng Vander Waals với các protease ruột tại các địa điểm hoạt động của họ. SNTI liên kết tại địa điểm hoạt động của ruột enzyme protease mà lại làm cho chúng hoạt động. Điều này ngăn chặn các quá trình phá vỡ các protein dinh dưỡng gây suy dinh dưỡng của ấu trùng dẫn đến chết người. Do đó các chất ức chế Protease có thể được sử dụng như chất tự nhiên sinh học thuốc trừ sâu trong sâu kiểm soát. Phân tích sâu hơn về cấu trúc, các tương tác protein-protein và hoạt tính sinh học đa dạng của SNTI trên protease khác nhau về nguồn gốc sinh học đa dạng cần phải được thực hiện để khẳng định tiềm năng công nghệ sinh học của SNTI như một tác nhân kiểm soát sinh học và tiềm năng chữa bệnh của nó. Thỏa hiệp giữa việc gia tăng phức tạp, hồ sơ dược động học, và khả năng chi trả thuốc sẽ thách thức các nhà hóa sinh để tìm phương pháp tổng quát hơn để tạo đơn giản của các chất ức chế mới, đó là mạnh, chọn lọc và sinh học hoặc để tìm phương pháp tốt hơn để cung cấp hiệu quả của các chất ức chế protein chống lại các protease. Chúng tôi hy vọng rằng nỗ lực này có thể giúp kích thích nỗ lực mới nhằm đạt được các mục tiêu đó.