For detection of anti-Toxocara spp.

For detection of anti-Toxocara spp. IgG antibodies, TES and dTES antigens were separated by SDS-PAGE and electro-transferred to a 0
45-lm pore size, 8 9 8 cm NC sheets (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) in a Mini Trans-blot apparatus II (Bio-Rad) at a constant voltage of 100 V for 60 min at 4°C. Then, the NC sheets were washed for 30 min with PBS-T, cut into 3-mm-wide strips and stored at 20°C until use. The NC strips were blocked with 1% BSA and 3% skim milk in PBS -T for 60 min at room temperature (RT) and rinsed for 5 min with PBS-T. The strips were incubated with human serum samples diluted at 1/50 in blocking solution for 120 min at RT, under constant stirring. After three washings with PBS-T for 7 min each, the strips were incubated with peroxidase-conjugated anti-human IgG for 90 min at RT diluted at 1/6000 in blocking solution. After three new washes with PBS-T for
7 min each, the strips were incubated with a chromogenic solution (0
0005% 3,30-diaminobenzidine tetrahydrochloride, 0
01% hydrogen peroxide in PBS, pH 7
2) for 3 min at RT and the reaction was stopped by rinsing with tap water. Positive reactions were determined by the visualization of defined brown bands. All stages of this procedure were carried out in constant stirring using a volume of 1 mL, and positive and negative control sera were used as reaction controls in all assays.

Kết quả (Việt) 1:

Để phát hiện kháng thể IgG anti-Toxocara spp., kháng nguyên TES và dTES đã được tách ra bằng cách dùng mũi SDS-TRANG và điện chuyển giao cho một kích thước lỗ chân lông 45-lm 0, 8 9 8 cm NC tờ (Bio Rad, Hercules, CA, USA) trong một bộ máy Mini Trans-blot II (Bio-Rad) tại một điện áp không đổi 100 V trong 60 phút tại 4° C. Sau đó, các tấm NC rửa trong 30 phút với PBS-T, cắt thành 3 mm, rộng dải và được lưu trữ ở 20° C cho đến khi sử dụng. Các dải NC đã chặn với 1% BSA và 3% sữa skim trong PBS -T trong 60 phút ở nhiệt độ phòng (RT) và rửa cho 5 phút với PBS-T. Các dải được ủ với nhân huyết thanh mẫu pha loãng tại 1/50 trong chặn các giải pháp cho 120 phút tại RT, theo khuấy liên tục. Sau khi ba nhà rửa với PBS-T trong 7 phút, vào dải được ủ với peroxidase-chia chống con IgG cho 90 phút tại RT pha loãng tại 1/6000 trong chặn giải pháp. Sau khi ba mới rửa với PBS-T cho7 phút mỗi, các dải được ủ với một giải pháp chromogenic (0 0005% 3,30-diaminobenzidine tetrahydrochloride, 0 01% hydrogen peroxide trong PBS, pH 7 2) cho 3 phút tại RT và phản ứng đã dừng lại bằng cách rửa với nước máy. Phản ứng tích cực đã được xác định bởi hình dung của dải màu nâu được xác định. Tất cả các giai đoạn của thủ tục này được thực hiện trong liên tục khuấy bằng cách sử dụng một khối lượng 1 mL, và tích cực và tiêu cực điều khiển sera đã được sử dụng như là phản ứng điều khiển trong tất cả các thử nghiệm.

Kết quả (Việt) 2:

Để phát hiện anti-Toxocara spp. IgG kháng thể, TES và dTES kháng nguyên đã được tách bằng điện di SDS-PAGE và electro-chuyển giao cho một 0 kích thước lỗ chân lông? 45-lm, 8 9 8 tờ NC cm (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) trong một Thống Trans-blot bộ máy II (Bio-Rad) tại một điện áp 100 V cho 60 phút ở 4 ° C. Sau đó, các tấm NC được rửa trong 30 phút với PBS-T, cắt thành các dải 3 mm rộng và được lưu trữ tại? 20 ° C cho đến khi sử dụng. Các dải NC đã bị chặn với 1% BSA và 3% sữa tách kem trong PBS -T cho 60 phút ở nhiệt độ phòng (RT) và rửa sạch trong 5 phút bằng PBS-T. Các dải được ủ với mẫu huyết thanh của người pha loãng tại 1/50 trong việc ngăn chặn giải pháp cho 120 phút ở RT, dưới khuấy liên tục. Sau ba rửa bằng PBS-T cho mỗi 7 phút, các dải được ủ với chống con người IgG peroxidase liên hợp trong 90 phút tại RT pha loãng vào 1/6000 trong giải pháp ngăn chặn. Sau ba lần giặt mới với PBS-T cho
mỗi 7 phút, các dải được ủ với một giải pháp chromogenic (0? 0005% 3,30-diaminobenzidine tetrahydrochloride, 0? 01% hydrogen peroxide trong PBS, pH 7? 2) trong 3 phút tại RT và phản ứng đã được ngừng lại bằng cách rửa với nước máy. Phản ứng tích cực đã được xác định bởi sự hình dung của các ban nhạc nâu xác định. Tất cả các giai đoạn của quy trình này được thực hiện ở khuấy liên tục sử dụng một khối lượng 1 ml, và tích cực và tiêu cực kiểm soát huyết thanh đã được sử dụng như điều khiển phản ứng trong tất cả các xét nghiệm.