Western blot analysisA western blot

Western blot analysis
A western blotting assay was performed to analyse the MA
towards PMEI in denatured conditions. The same samples
analysed through SDS-PAGE followed by silver stain were
1:2 diluted for this western blotting assay: purified PMEI
(12.5 lg/mL), kiwi water extract (1:2 dilution), kiwi salt
extract (1:10 dilution) and purified kiwi PME (25 lg/mL).
The samples were separated on a 10–15% gradient gel by
SDS-PAGE analysis as described above. To mark the
molar mass, the EasyWestern Protein Standard marker
(GenScript Corporation, Piscataway, NJ, USA) was used.
Instead of staining, the gel was transferred to a nitrocellulose
membrane and blocked with 10% non-fat dry milk
solution (w/v) in tris-buffered saline (TBS) (20 mM Trisbase,
137 mM NaCl, 0.1% Tween 20, pH 7.6). Next, the
membrane was incubated with the primary antibody
(25 lg/mL in TBS with 1% non-fat dry milk (w/v)),
washed and incubated with the secondary antibody, goat–
anti-mouse-HRP (Bio-Rad, Hercules, CA, USA), diluted
1:2,000 in TBS with 1% non-fat dry milk (w/v). After a
final wash with TBS, the development was finished using
the ECL staining kit (GE Healthcare) for chemiluminescence
signal detection.

Kết quả (Việt) 1:

Phân tích phương Tây blotMột khảo nghiệm thấm phía tây đã được thực hiện để phân tích MAĐối với PMEI trong điều kiện biến tính. Các mẫu tương tựphân tích thông qua dùng mũi SDS-TRANG tiếp theo vết bạc đã1:2 pha loãng cho khảo nghiệm thấm Tây này: tinh khiết PMEI(12,5 lg/mL), chiết xuất nước kiwi (1:2 pha loãng), kiwi muốiExtract (1:10 pha loãng) và tinh khiết kiwi PME (25 lg/mL).Các mẫu đã được tách ra trên một gel gradient 10 – 15% bởiDùng mũi SDS-TRANG phân tích như mô tả ở trên. Để đánh dấu cáckhối lượng Mol, đánh dấu EasyWestern Protein tiêu chuẩn(GenScript Corporation, Piscataway, NJ, MỸ) đã được sử dụng.Thay vì nhuộm, gel được chuyển sang một nitrocellulosemàng tế bào và chặn với 10% mỡ sữagiải pháp (w/v) trong dung dịch muối đệm tris (TBS) 20 mM (Trisbase,137 mM NaCl, 0.1% giữa 20, pH 7,6). Tiếp theo, cácmàng được ủ với kháng thể chủ yếu(25 lg/mL ở TBS với 1% mỡ sữa bột (w/v)),rửa sạch và ủ với kháng thể Trung, dê-chống-mouse-HRP (bio Rad, Hercules, CA, USA), pha loãng1:2,000 trong TBS với 1% mỡ sữa bột (w/v). Sau khi mộtcuối cùng rửa với TBS, sự phát triển đã hoàn thành bằng cách sử dụngECL nhuộm kit (GE Healthcare) cho chemiluminescencephát hiện tín hiệu.

Kết quả (Việt) 2:

Phân tích Western blot
Một thử nghiệm thấm phía tây được thực hiện để phân tích MA
hướng PMEI trong điều kiện biến tính. Các mẫu cùng
phân tích thông qua SDS-PAGE sau nhuộm bạc là
1: 2 pha loãng để khảo nghiệm thấm tây này: tinh khiết PMEI
(12,5 lg / mL), chiết xuất từ nước kiwi (1: 2 pha loãng), muối kiwi
chiết xuất (1:10 ) và PME kiwi tinh khiết (25 lg / mL).
Các mẫu được tách ra trên một gradient gel 10-15% bằng cách
phân tích SDS-PAGE như mô tả ở trên. Để đánh dấu các
khối lượng phân tử, các EasyWestern Protein tiêu chuẩn đánh dấu
(GenScript Corporation, Piscataway, NJ, USA) đã được sử dụng.
Thay vì nhuộm, gel đã được chuyển giao cho một nitrocellulose
màng và bị chặn với sữa khô 10% mỡ
giải pháp (w / v) trong tris-đệm nước muối (TBS) (20 mM Trisbase,
137 mM NaCl, 0,1% Tween 20, pH 7.6). Tiếp theo, các
màng được ủ với kháng thể chính
(25 lg / mL trong TBS với 1% sữa không béo (w / v)),
rửa sạch và ủ với kháng thể thứ cấp, goat-
chống chuột-HRP (sinh học Rad, Hercules, CA, USA), pha loãng
1: 2000 trong TBS với 1% sữa không béo (w / v). Sau một
rửa cuối cùng với TBS, sự phát triển đã sử dụng xong
nhuộm bộ ECL (GE Healthcare) cho Chemiluminescence
phát hiện tín hiệu.