RESULTS Regeneration of microcalli

RESULTS Regeneration of microcalli
Formation of the cell wall and, subsequently, cell divisions (Figure 6) after 4–7 days of the culture and the regeneration of microcallus structures after four weeks of cultivation (Figure 7) was observed in all genotypes tested and in all biological replications (Table1). According to the statistical analysis of variance, the effect of a genotype on the regeneration of microcalli was significant, while the influence of individual biological replications and the interaction between genotypes and replication were not relevant (Table 3). The highest frequency of microcalli was obtained in the genotype BC-6 (31.4 × 10–2%). Significantly less efficient were genotypes BC-1 (22.3 × 10–2%) and BC Dodolla (18.9 × 10–2%), followed by BN-OP-01 (13.7 × 10–2%) and BN-SL-03/04 with 13.4 × 10–2% of regenerated microcalli per cultivated protoplasts (Figure 1). Homogeneous groups and contrast values derived from multiple comparisons between means of microcalli regeneration are shown in Table 1.
Regeneration of calli
Induction of callus structures with prolonged cells was detected in all genotypes tested. However, in some biological replications no conversion from microcalli to calli was observed in case of the genotype BN-SL- 03/04 (Table 1). These differences were confirmed by means of statistical calculations, where the effects of biological replications (and the genotype, respectively) were evaluated as significant (Table 4). In general, the efficiency of conversion from microcalli to calli was significantly the highest in the genotype BC-6 (23.6%); less efficient were genotypes BC-1 (13.6%) and BN-OP-01 (10.0%). Poor regeneration was observed in case of genotypes BC Dodolla and BN- SL-03/04, where the conversion rates from microcalli to callus structures was only 2.7 and 0.8% (Figure 2). Since there were some differences between biological replications, analyses for individual replications were made as well (Figure 3). Homogeneous groups and contrast values derived from multiple comparisons between means of the callus regeneration are shown in Table 1.
Plant regeneration
In total, sixteen plants with properly developed stems and leaves were regenerated from calli possessing meristematic structures (Figure 8) of genotypes BC-6, BC-1 and BN-OP-1 (Table 1, Figure 9 and 10). Plants with well-developed leaves, regenerated on the solid F medium were transferred to the medium MS without growth regulators. After one week of cultivation on the solid MS medium, regeneration of the root system entered. Plants with properly developed roots were then subsequently multiplied from nodal segments with axilary meristems (Figure 11 and 12). Calli of other genotypes tested were not responsible to regenerate shoots or even meristematic structures and shoot primordia in the callus tissue and turned brown after several subcultivations.
Protoplast fusion
Statistical calculations of the data on the efficiency of the PEG treatment demonstrate its significant impact on the fusion frequency between genotypes used (Table 5). Remarkable differences were detected between individual biological replicates as well (Table 5). In general, the best combinations of ‘PEG concentration × time duration’ were 25% for 20 minutes and both time duration (15 and 20 minutes) of 30% PEG with fusion frequencies 7.9, 7.8 and 9.1%, respectively. Other combinations were significantly less efficient (Figu- re 4). More detailed results, i.e. for individual biological replications are shown in Figure 5, homogeneous groups and contrast values based on multiple comparisons between means of the fusion frequency are demonstrated in Table 2. Calli, obtained from fusions between B. carinata BC-6 and B. napus BN-OP-01 turned yellow and stopped their development (Figure 13).
DISCUSSION
Although the formation of cell divisions and microcallus structures were detected in all genotypes used in our experiments and the progress of the development was similar to the discovery of other researchers (Glimelius, 1984; Hu et al., 1999; Chen et al., 2004, Deep Kaur et al., 2006) there were remarkable differences between particular genotypes not only in the productivity (i.e. in the number of microcalluses per cultivated protoplasts) but also in the morphological and physiological characteristics of obtained microcalli. While the genotype BC-6 proved to be the most productive (31.4 × 10–2% of regenerated microcalli per cultivated protoplasts), genotypes BN-OP-01 and BN- SL-03/04 demonstrated rather low level of regeneration ability. In addition, above mentioned, low productive genotypes often formed microcalli that gradually turned brown at early stages of development. Such structures may exude various substances, which can negatively affect the development of other, normally dividing microcalli (Chen et al., 2004). Strong impact of the genotype on the initialisation of cell divisions and further development of dedifferentiated tissue in the protopl

Kết quả (Việt) 1:

Kết QUẢ tái sinh của microcalli Sự hình thành của các tế bào và sau đó, đơn vị di động (hình 6) sau 4 – 7 ngày của các nền văn hóa và tái tạo cấu trúc microcallus sau bốn tuần của nghề trồng cây (con số 7) được quan sát thấy ở tất cả các kiểu gen được thử nghiệm và tất cả sinh học replications (Table1). Theo thống kê phân tích các phương sai, tác dụng của một kiểu gen ngày tái sinh của microcalli là quan trọng, trong khi ảnh hưởng của cá nhân sinh học replications và sự tương tác giữa kiểu gen và bản sao đã không có liên quan (bảng 3). Tần số cao nhất của microcalli nhận được trong kiểu gen BC-6 (31,4 × 10 – 2%). Đáng kể, kém hiệu quả hơn là kiểu gen BC-1 (22,3 × 10 – 2%) và BC Dodolla (18,9 × 10 – 2%), tiếp theo là BN-OP-01 (13,7 × 10 – 2%) và BN-SL-03/04 với 13,4 × 10 – 2% tái tạo microcalli cho trồng protoplasts (hình 1). Nhóm đồng nhất và giá trị tương bắt nguồn từ nhiều so sánh giữa phương tiện tái sinh microcalli được hiển thị trong bảng 1. Tái sinh của calli Cảm ứng của callus cấu trúc với kéo dài các tế bào được phát hiện trong tất cả các kiểu gen được thử nghiệm. Tuy nhiên, trong một số replications sinh học không có chuyển đổi từ microcalli sang calli được quan sát trong trường hợp kiểu gen BN-SL-03/04 (bảng 1). Những khác biệt này đã được xác nhận bằng các phương tiện tính toán thống kê, nơi các hiệu ứng sinh học replications (và kiểu gen, tương ứng) đã được đánh giá là đáng kể (bảng 4). Nhìn chung, hiệu quả chuyển đổi từ microcalli sang calli là đáng kể cao nhất trong kiểu gen BC-6 (23.6%); ít hiệu quả là kiểu gen BC-1 (13,6%) và BN-OP-01 (10,0%). Tái sinh kém được quan sát thấy trong trường hợp kiểu gen BC Dodolla và BN-SL-03/04, mà chuyển đổi tỷ giá từ microcalli đến callus cấu trúc chỉ 2,7 và 0,8% (hình 2). Kể từ khi có là một số sự khác biệt giữa sinh học replications, phân tích cho cá nhân replications đã được thực hiện cũng như (hình 3). Nhóm đồng nhất và giá trị tương bắt nguồn từ nhiều so sánh giữa phương tiện tái tạo callus được hiển thị trong bảng 1. Thực vật tái tạo Trong tổng số, mười sáu cây với đúng cách phát triển cành và lá đã được tái sinh từ calli có cấu trúc meristematic (hình 8) của kiểu gen BC-6, BC-1 và BN-OP-1 (bảng 1, con số 9 và 10). Cây với lá phát triển tốt, tái tạo trên phương tiện F rắn được chuyển sang MS trung bình mà không cần điều chỉnh tăng trưởng. Sau một tuần gieo trồng trên phương tiện MS rắn, tái tạo các hệ thống gốc đã nhập. Cây có nguồn gốc phát triển đúng cách đã rồi sau đó nhân từ nút phân đoạn với axilary meristems (hình 11 và 12). Calli khác kiểu gen thử nghiệm đã không chịu trách nhiệm để tái tạo cành hoặc thậm chí meristematic cấu trúc và bắn primordia trong mô callus và chuyển màu nâu sau khi một số subcultivations. Protoplast tổng hợp Các tính toán thống kê các dữ liệu trên hiệu quả của điều trị PEG chứng minh tác động đáng kể của nó trên tần số kết hợp giữa kiểu gen được sử dụng (bảng 5). Sự khác biệt đáng chú ý đã được phát hiện giữa các cá nhân sinh học sao chép cũng (bảng 5). Nói chung, sự kết hợp tốt nhất của 'PEG nồng × thời gian' là 25% cho 20 phút và thời gian cả hai (15-20 phút) 30% PEG với tần số fusion 7.9, 7.8 và 9,1%, tương ứng. Các kết hợp khác là đáng kể ít hiệu quả (Figu-re 4). Kết quả chi tiết hơn, tức là cho cá nhân sinh học replications được hiển thị trong hình 5, nhóm đồng nhất và giá trị tương dựa trên nhiều so sánh giữa các phương tiện của tần số phản ứng tổng hợp được thể hiện trong bảng 2. Calli, thu được từ các hợp nhất giữa B. carinata BC-6 và B. napus BN-OP-01 chuyển màu vàng và ngừng phát triển của họ (hình 13). THẢO LUẬN Mặc dù sự hình thành các tế bào phân chia và microcallus công trình đã được phát hiện trong tất cả các kiểu gen được sử dụng trong thử nghiệm của chúng tôi và sự tiến bộ của sự phát triển là tương tự như các phát hiện của các nhà nghiên cứu khác (Glimelius, 1984; Hồ et al., năm 1999; Chen et al, 2004, sâu Kaur et al., 2006) đã có sự khác biệt đáng kể giữa các kiểu gen đặc biệt không chỉ ở năng suất (tức là trong số các microcalluses cho trồng protoplasts) nhưng cũng có trong các đặc điểm hình Thái và sinh lý của microcalli thu được. Trong khi kiểu gen BC-6 đã chứng tỏ là hiệu quả nhất (31,4 × 10 – 2% tái tạo microcalli mỗi protoplasts trồng), kiểu gen 01 tháng OP BN và BN-SL-03/04 đã chứng minh trình độ khá thấp của khả năng tái sinh. Ngoài ra, ở trên đã đề cập, thấp kiểu gen sản xuất thường hình thành microcalli dần dần chuyển màu nâu ở giai đoạn đầu của sự phát triển. Cấu trúc như vậy có thể chảy ra chất khác nhau, có thể ảnh hưởng đến sự phát triển của microcalli khác, thường phân chia (Chen et al, 2004). Các tác động mạnh mẽ của kiểu gen trên initialisation của tế bào phân chia và phát triển các tế bào dedifferentiated trong protopl

Kết quả (Việt) 2:

KẾT QUẢ Tái sinh microcalli
hình thành của tế bào và, sau đó, phân chia tế bào (Hình 6) sau 4-7 ngày kể từ ngày văn hóa và tái tạo các cấu trúc microcallus sau bốn tuần lễ trồng trọt (Hình 7) đã được quan sát thấy trong tất cả các kiểu gen thử nghiệm và ở tất cả các lần lặp sinh học (Table1). Theo các phân tích thống kê không đúng, ảnh hưởng của một kiểu gen về sự tái sinh của microcalli là đáng kể, trong khi ảnh hưởng của lần lặp sinh học cá nhân và sự tương tác giữa kiểu gen và nhân rộng không có liên quan (Bảng 3). Tần số cao nhất của microcalli đã đạt được trong kiểu gen BC-6 (31,4 × 10-2%). Ít hơn đáng kể hiệu quả là kiểu gen BC-1 (22,3 × 10-2%) và BC Dodolla (18,9 × 10-2%), tiếp theo là BN-OP-01 (13,7 × 10-2%) và BN-SL-03 / 04 với 13,4 × 10-2% của microcalli tái sinh mỗi tế bào trần canh tác (Hình 1). Nhóm đồng nhất và giá trị tương phản xuất phát từ nhiều so sánh giữa các phương tiện tái sinh microcalli được thể hiện trong Bảng 1.
Tái tạo mô sẹo
cảm ứng của cấu trúc mô sẹo với các tế bào kéo dài đã được phát hiện trong tất cả các kiểu gen được thử nghiệm. Tuy nhiên, trong một số lần lặp sinh học không có chuyển đổi từ microcalli để mô sẹo đã được quan sát thấy trong trường hợp của các kiểu gen BN-SL- 03/04 (Bảng 1). Những khác biệt này đã được khẳng định bằng các phương tiện tính toán thống kê, nơi mà hậu quả của lần lặp sinh học (và các kiểu gen tương ứng) được đánh giá là đáng kể (Bảng 4). Nhìn chung, hiệu quả của chuyển đổi từ microcalli để mô sẹo là đáng kể nhất trong kiểu gen BC-6 (23,6%); kém hiệu quả hơn là kiểu gen BC-1 (13,6%) và BN-OP-01 (10,0%). Tái sinh nghèo được quan sát thấy trong trường hợp của các kiểu gen BC Dodolla và BN- SL-03/04, nơi có tỷ lệ chuyển đổi từ microcalli cho các cấu trúc mô sẹo chỉ là 2,7 và 0,8% (Hình 2). Kể từ khi có một vài sự khác biệt giữa các lần lặp sinh học, phân tích cho lần lặp cá nhân được thực hiện là tốt (hình 3). Nhóm đồng nhất và giá trị tương phản xuất phát từ nhiều so sánh giữa các phương tiện của sự tái tạo mô sẹo được thể hiện trong Bảng 1.
Nhà máy tái sinh
Trong tổng số, mười sáu cây có phát triển đúng cành và lá đã được tái sinh từ mô sẹo sở hữu cấu trúc mô phân sinh (Hình 8) của các kiểu gen BC-6 , BC-1 và BN-OP-1 (Bảng 1, Hình 9 và 10). Cây có lá phát triển tốt, tái sinh trên các phương tiện F rắn đã được chuyển giao cho các môi trường MS không có điều hòa sinh trưởng. Sau một tuần canh tác trên môi trường MS rắn, tái tạo của hệ thống rễ vào. Cây có rễ phát triển đúng được rồi sau đó nhân từ các phân đoạn nút với axilary mô phân sinh (Hình 11 và 12). Mô sẹo của các kiểu gen khác cho thấy chúng không chịu trách nhiệm để tái sinh chồi hoặc thậm chí cấu trúc mô phân sinh và bắn sơ khởi trong các mô sẹo và biến màu nâu sau vài subcultivations.
Phản ứng tổng hợp nguyên hình
tính toán thống kê của các dữ liệu về hiệu quả của việc điều trị PEG chứng minh tác động đáng kể trên kết hợp tần số giữa các kiểu gen được sử dụng (Bảng 5). Sự khác biệt đáng chú ý đã được phát hiện giữa lần nhắc lại sinh cá nhân cũng như (Bảng 5). Nhìn chung, sự kết hợp tốt nhất của 'nồng PEG × hạn thời gian' là 25% trong 20 phút và cả thời hạn thời gian (15 và 20 phút) của 30% PEG với tần số phản ứng tổng hợp 7,9, 7,8 và 9,1% tương ứng. Các kết hợp khác ít hơn đáng kể hiệu quả (Figu- lại 4). Kết quả chi tiết hơn, tức là để lặp sinh học cá nhân được thể hiện trong hình 5, các nhóm và các giá trị tương phản dựa trên nhiều so sánh giữa các phương tiện kết hợp tần số đồng nhất được thể hiện trong Bảng 2. Mô sẹo, thu được từ sự hợp nhất giữa B. carinata BC-6 và B . napus BN-OP-01 chuyển sang màu vàng và ngừng phát triển của họ (Hình 13).
THẢO LUẬN
Mặc dù sự hình thành các tế bào phân chia và các cấu trúc microcallus đã được phát hiện trong tất cả các kiểu gen được sử dụng trong các thí nghiệm của chúng tôi và sự tiến bộ của sự phát triển tương tự như sự phát hiện của các nhà nghiên cứu khác (Glimelius, 1984; Hồ et al, 1999;.. Chen et al, 2004, Deep Kaur et al., 2006) có sự khác biệt đáng kể giữa các kiểu gen đặc biệt không chỉ trong suất (tức là trong số microcalluses mỗi tế bào trần gieo trồng) mà còn ở các đặc điểm hình thái và sinh lý của microcalli thu được. Trong khi các kiểu gen BC-6 được chứng minh là hiệu quả nhất (31,4 × 10-2% của microcalli tái sinh mỗi tế bào trần gieo trồng), kiểu gen BN-OP-01 và BN- SL-03/04 đã chứng minh mức độ khá thấp về khả năng tái sinh. Ngoài ra, ở trên đã đề cập, kiểu gen năng suất thấp thường hình thành microcalli đó dần dần biến màu nâu ở giai đoạn đầu của sự phát triển. Cấu trúc này có thể chảy ra các chất khác nhau, trong đó có thể ảnh hưởng tiêu cực đến sự phát triển của khác, microcalli thường chia (Chen et al., 2004). Tác động mạnh mẽ của các kiểu gen trên khởi động của tế bào phân chia và phát triển hơn nữa của mô dedifferentiated trong protopl