No signs for off-target activity of

No signs for off-target activity of anti-HSV-1 gRNAs.
To assess the activity of the three most potent anti-HSV-1 gRNAs towards potential off-target sites within the human genome, the top three predicted off-target sites (as assessed by the CRISPR design tool crispr.mit.edu) were PCR amplified from gRNA-expressing and controls cells. These were subsequently subjected to standard Sanger sequencing. CRISPR/Cas9-mediated genome-editing normally results in the emergence of a mixed read in the sequencing histogram initiating 3 basepairs upstream the PAM sequence (the Cas9 cleavage site). Since there are no apparent mixed reads visible at the Cas9 cleavage sites, it can be concluded that no overt off-target editing has occurred at these sites. Similar conclusions can be drawn from deep-sequencing analysis of 18 additional off-target sites for six gRNAs targeting HCMV and EBV (S3 Table).
doi:10.1371/journal.ppat.1005701.s002

Kết quả (Việt) 1:

Không có dấu hiệu cho tắt mục tiêu hoạt động của chống-HSV-1 gRNAs.Để đánh giá hoạt động của chống-HSV-1 gRNAs mạnh nhất ba hướng tới các trang web ra mục tiêu tiềm năng trong bộ gen của con người, đầu ba dự đoán ra mục tiêu trang web (như đánh giá bởi CRISPR thiết kế công cụ crispr.mit.edu) đã là Đảng Cộng sản Romania khuếch đại từ bày tỏ gRNA và kiểm soát các tế bào. Những sau đó đã phải chịu sự tiêu chuẩn Sanger trình tự. CRISPR/Cas9-mediated gen-chỉnh sửa thường kết quả trong sự xuất hiện của một hỗn hợp đọc trong biểu đồ sắp bắt đầu 3 basepairs ngược dòng dãy PAM (Cas9 cleavage trang web). Kể từ khi không có không có lần đọc hỗn hợp rõ ràng có thể nhìn thấy ở trang web cleavage Cas9, nó có thể được kết luận rằng không có chỉnh sửa chệch mục tiêu công khai đã xảy ra tại các trang web. Kết luận tương tự có thể được rút ra từ phân tích trình tự sâu 18 các trang web ra mục tiêu bổ sung cho sáu gRNAs nhắm mục tiêu HCMV và EBV (S3 bảng).Doi:10.1371/Journal.ppat.1005701.s002

Kết quả (Việt) 2:

Không có dấu hiệu cho hoạt động off-mục tiêu chống HSV-1 gRNAs.
Để đánh giá các hoạt động của ba mạnh nhất chống HSV-1 gRNAs vào tiềm năng trang web off-mục tiêu trong hệ gen của con người, ba người đứng đầu dự đoán các trang ngoài mục tiêu ( theo đánh giá của crispr.mit.edu CRISPR công cụ thiết kế) đã được PCR khuếch đại từ gRNA-thể hiện và điều khiển các tế bào. Những sau đó đã phải chịu Sanger trình tự chuẩn. CRISPR / Cas9 qua trung gian bộ gen chỉnh sửa bình thường dẫn đến sự xuất hiện của một hỗn hợp đọc theo của biểu đồ bắt đầu 3 basepairs ngược dòng chuỗi PAM (vị trí phân cắt Cas9). Vì không có rõ ràng hỗn hợp lần đọc nhìn thấy ở các trang web chia tách Cas9, có thể kết luận rằng không có công khai biên tập off-mục tiêu đã xảy ra tại các trang web này. Kết luận tương tự có thể được rút ra từ phân tích sâu trình tự bổ sung 18 điểm off-mục tiêu cho sáu gRNAs nhắm mục tiêu HCMV và EBV (S3 Bảng).
Doi: 10,1371 / journal.ppat.1005701.s002