Standard procedures for recombinant

Standard procedures for recombinant DNA experiments were used (6). The plasmid pFOSl was constructed by fusing pBAC (Shizuya et al., in preparation), an F replicon based plasmid with lambda cosN site, to pUCcos, a pUC derivative containing cosN site, by homologous recombination in E. coli through the shared cosN site (Figure 1). pBAC and pUCcos were transformed to the strain C600r-m+ sequentially, and the transformants grown on LB plates containing ampicillin and chloramphenicol were picked. Miniprep plasmid DNA prepared from the transformant containing fused replicons was diluted and transformed to the strain D 1OpolA-, in which pUC replication origin cannot function and therefore only the plasmids containing the F factor replication origin can survive. Colonies resistant to both ampicillin and choloramphenicol were picked, and screened by miniprep and restriction digestion. pFOSl DNA thus obtained was transferred to the pop2136 strain (7) for large quantity preparation.

Kết quả (Việt) 1:

thủ tục tiêu chuẩn cho các thí nghiệm DNA tái tổ hợp đã được sử dụng (6). các pfosl plasmid được xây dựng bằng cách nung chảy pbac (shizuya et al., đang chuẩn bị), một e Replicon dựa plasmid với lambda cosn trang web, để puccos, một dẫn xuất PUC chứa trang web cosn, bằng cách tái tổ hợp tương đồng trong điện tử. coli thông qua các trang web chia sẻ cosn (hình 1).pbac và puccos được chuyển thành các dòng c600r m tuần tự, và biến nạp trồng trên tấm lb chứa ampicillin và chloramphenicol đã được chọn. miniprep DNA plasmid được chuẩn bị từ transformant chứa replicons hợp nhất đã được pha loãng và chuyển thành sự căng thẳng d-1opola,trong đó nguồn gốc sao chép PUC không thể hoạt động và do đó chỉ các plasmid có chứa các yếu tố e nguồn gốc sao chép có thể sống sót. thuộc địa chống lại cả ampicilin và choloramphenicol đã được chọn, và kiểm tra bởi miniprep và hạn chế tiêu hóa. pfosl DNA do đó thu được đã được chuyển giao cho các dòng pop2136 (7) để chuẩn bị số lượng lớn.

Kết quả (Việt) 2:

Các thủ tục tiêu chuẩn cho các thí nghiệm tái tổ hợp DNA đã được sử dụng (6). Plasmid pFOSl được xây dựng bằng cách nung chảy pBAC (Shizuya et al., để chuẩn bị), một plasmid replicon dựa trên F với lambda cosN trang web, pUCcos, bắt nguồn từ pUC có chứa cosN trang web, theo gen tương đồng trong E. coli thông qua trang web chia sẻ cosN (hình 1). pBAC và pUCcos đã được chuyển đến sự căng thẳng C600r-m tuần tự, và transformants phát triển trên LB đĩa có chứa ampicillin, chloramphenicol đã được chọn. Miniprep plasmid DNA chuẩn bị sẵn sàng từ transformant có replicons hợp nhất đã được pha loãng và chuyển đến các căng thẳng D 1OpolA-, trong đó nhân rộng pUC nguồn gốc không thể hoạt động và do đó chỉ các plasmid có nguồn gốc bản sao F yếu tố có thể tồn tại. Thuộc địa của khả năng chống ampicillin và choloramphenicol đã được chọn, và được hộ tống bởi miniprep và hạn chế tiêu hóa. pFOSl DNA do đó thu được được chuyển đến sự căng thẳng pop2136 (7) để chuẩn bị số lượng lớn.