Sequencing reactions were performed

Sequencing reactions were performed as described above using both pGem Bst 885 and pGem Bst 1143 DNA samples. The primers used in both sets of reactions were the SP6 and T7 promoter primers available from Promega Corp. (SEQ ID NOS: 15 and 16, respectively). These primers were specific for the SP6 and T7 promoter regions in the pGem vector, and were useful for sequencing the Bst amplicon inserts in both directions. The resulting amplicon sequences were aligned with the known Bca polymerase gene sequence and were found to be approximately 88% homologous in the overlapping regions. In addition, the sequences present in the overlap region of the two amplicons were the same, indicating that they had arisen from the same gene. The evidence therefore indicated that the amplicons represented true fragments of the Bst DNA polymerase gene.

The sequences obtained from the 885 and 1143 amplicon clones provided two pieces of information that would allow the isolation of gene fragments obtained from genomic Bst DNA. First, the sequence of the Bst polymerase gene in the regions corresponding to oligonucleotides 16, 17, 20 and 24 indicated that these oligonucleotides would be suitable for use as probes of genomic Bst DNA in Southern blots. Second, two restriction endonuclease sites within the Bst DNA polymerase gene were identified: an Sst I restriction site at Bca coordinate 1516 and a Hind III restriction site at Bca coordinate 1687. These sites provide a strategy for isolating fragments of the Bst polymerase gene from the genomic DNA.

Kết quả (Việt) 2:

Phản ứng giải trình tự được thực hiện như mô tả ở trên sử dụng cả hai pGem Bst 885 và pGem Bst mẫu 1143 DNA. Các mồi được sử dụng trong cả hai bộ phản ứng là SP6 và T7 promoter mồi sẵn từ Promega Corp (SEQ ID NOS: 15 và 16, tương ứng). Những đoạn mồi đã được cụ thể cho các SP6 và T7 promoter vùng trong vector pGem, và là hữu ích cho trình tự chèn amplicon Bst theo cả hai hướng. Các trình tự amplicon kết quả đã được liên kết với các trình tự gen polymerase BCA được biết đến và được tìm thấy có khoảng 88% tương đồng ở các vùng chồng lấn. Ngoài ra, các trình tự hiện diện trong khu vực chồng chéo của hai amplicon là như nhau, chỉ ra rằng họ đã phát sinh từ cùng một gen. Do đó, bằng chứng cho thấy các mảnh vỡ amplicon đại diện thực sự của các gene polymerase Bst DNA. Các trình tự thu được từ 885 và 1143 nhái amplicon cung cấp hai mẩu thông tin mà sẽ cho phép cô lập của các mảnh gene lấy từ gen Bst DNA. Đầu tiên, các trình tự gen polymerase Bst trong khu vực tương ứng với oligonucleotide 16, 17, 20 và 24 cho thấy những oligonucleotide có thể phù hợp để sử dụng như là thăm dò của gen Bst DNA trong blots Nam. Thứ hai, hai trang web hạn chế endonuclease trong gene polymerase Bst DNA đã được xác định: một trang web hạn chế SST tôi ở BCA phối hợp năm 1516 và một trang web giới hạn Hind III tại BCA phối hợp 1687. Những trang web này cung cấp một chiến lược để cô lập các mảnh vỡ của các gene polymerase Bst từ DNA của bộ gen.