8.4 INITIAL HPLC METHOD DEVELOPMENT

8.4 INITIAL HPLC METHOD DEVELOPMENT
During initial method development, a set of initial conditions (detector,
column, mobile phase) is selected to obtain the first “scouting” chromatograms
of the sample. In most cases, these are based on reversed-phase separations
on a C18 column with UV detection. A decision on developing either an isocratic or a gradient method should be made at this point.
8.4.1 Initial Detector Selection
For analytes having reasonable UV absorbance, the UV/Vis detector (or the
PDA detector) is the clear choice. As discussed in Chapter 4, UV/Vis detectors are reliable, sensitive, easy-to-use, and very precise. The actual monitoring wavelength is usually set at the maximum absorbance wavelength of the
analyte or at a far UV wavelength (i.e., 200–230 nm) to improve sensitivity
(Figure 8.1a–c). For nonchromophoric analytes (with low or no absorbance in
UV-Vis range), the choice is limited to refractive index (RI) detector or evaporative light scattering detector (ELSD) for gradient analysis. Mass spectrometry (MS) is a possible choice for “ionizable” analytes. Although MS (or

Kết quả (Việt) 2:

8.4 ĐẦU PHÁT TRIỂN PHƯƠNG PHÁP HPLC
Trong phương pháp phát triển ban đầu, một tập hợp các điều kiện ban đầu (detector,
cột, pha động) được lựa chọn để có được đầu tiên "trinh sát" sắc ký
của mẫu. Trong hầu hết các trường hợp, chúng được dựa trên sự phân ly trong giai đoạn đảo ngược
trên một cột với UV phát hiện C18. Một quyết định về phát triển hoặc một isocratic hoặc một phương pháp gradient nên được thực hiện vào thời điểm này.
8.4.1 ban đầu Detector Lựa chọn
Đối với chất phân tích có độ hấp thụ tia cực tím hợp lý, UV / Vis dò (hoặc các
máy dò PDA) là sự lựa chọn rõ ràng. Như đã thảo luận trong chương 4, UV / Vis dò là đáng tin cậy, nhạy cảm, dễ sử dụng, và rất chính xác. Các bước sóng theo dõi thực tế thường được đặt ở bước sóng hấp thụ tối đa của các
chất phân tích hoặc tại một bước sóng tia cực tím đến nay (tức là, 200-230 nm) để cải thiện độ nhạy cảm
(hình 8.1a-c). Đối với chất phân tích nonchromophoric (thấp hoặc không hấp thụ trong
phạm vi UV-Vis), sự lựa chọn được giới hạn chỉ số khúc xạ (RI) máy dò máy dò ánh sáng hoặc bay hơi phân tán (ELSD) để phân tích gradient. Khối phổ (MS) là một lựa chọn tốt cho chất phân tích "ionizable". Mặc dù MS (hoặc