Alpha toxin gene (cpa) oligonucleot

Alpha toxin gene (cpa) oligonucleotide primers were selected from published sequences (19):
5’ GCT AAT GTT ACT GCC GTT GACC 3’ and 3’ TCT GAT ACA TCG TGT AAG 5’.
PCR reactions were performed at a final volume of 50 µL with the following reagents: 10 mM
Tris-HCl, pH 8.3, 50 mM KCl, 50 mM MgCl2, 200 µM dNTP, 10 pmol of each primer, 2U
Taq DNA polymerase, and 5 µl of template DNA. Amplification mixture was incubated in a
thermalcycler PTC-200 DNA Engine. Samples were denatured at 95o
C for 5 minutes and then
submitted to 35 cycles of 1 min at 94o
C, 1 min at 53o
C, and 1 min at 72o
C, with a further
extension cycle of 10 min at 72o
C. C. perfringens type A ATCC 3624 was used as positive
control and water as negative control

Kết quả (Việt) 2:

Gen độc tố alpha (CPA) mồi oligonucleotide được lựa chọn từ các trình tự xuất bản (19):
5 'GCT AAT GTT ACT GCC GTT GACC 3' và 3 'TCT GAT ACA TCG TGT AAG 5'.
Phản ứng PCR được thực hiện ở một khối lượng cuối cùng của 50 ml với các thuốc thử sau: 10 mM
Tris-HCl, pH 8.3, 50 mM KCl, 50 mM MgCl2, 200 dNTP, 10 pmol của mỗi lớp sơn lót, 2U
Taq DNA polymerase, và 5 ml mẫu DNA. Hỗn hợp khuếch đại được ủ trong một
thermalcycler PTC-200 DNA Engine. Các mẫu được biến tính ở 95o
C trong 5 phút và sau đó
nộp cho 35 chu kỳ của 1 phút ở 94o
C, 1 phút ở 53o
C, và 1 phút ở 72o
C, với thêm
chu kỳ gia hạn 10 phút ở 72o
C. C. perfringens type A ATCC 3624 đã được sử dụng như là tích cực
kiểm soát và nước như kiểm soát tiêu cực