DNA extraction: In this investigati

DNA extraction: In this investigation, blood was collected from 596 F2 animals during
slaughter. These animals were produced by outbred crossing using commercial sows
(18) and Brazilian native boars (2). The F2 animals were raised and slaughtered at the
Pig Breeding Farm, located at the Animal Science Department, Federal University of
Viçosa, Viçosa, Minas Gerais State, Brazil. DNA was extracted by the sodium chloride
protocol. After extraction, DNA was quantified in spectrophotometer (260 and 280 nm)
and diluted in 10 mM TRIS (pH 8.0) - 1mM EDTA (pH 8.0) solution to a working
concentration of 25 ng/µL and preserved at 4oC. The stock DNA was also diluted in
TRIS-EDTA solution and maintained at -20oC.
PSS gene amplification and mutation detection: DNA samples from the F2 animals
were amplified in a MJ Research PTC 100-96 thermocycler (MJ Research). The
amplification program consisted of the following steps: denaturation at 94oC, anneling
temperature at 64 oC, and extention at 72oC. This cycle was repeated 35 times. The
PCR reaction consisted of 1U of Taq DNA polymerase, 0.2 uM of each dNTP, 20 mM
TRIS-HCl (pH 8.3), 50 mM KCl, 2 mM MgCl2, primers forward and reverse 0.2 µM each
(forward - 5’-TCCAGTTTGCCACAGGTCCTACCA-3’ and reverse – 5’-
TTCACCGGAGTGGAGTCTCTGAGT-3’, O’BRIEN et al., 1993), and 25 ng of genomic DNA
in a volume of 20µL. The success of the PCR reactions was observed in 5% PAGE,
stained with silver nitrate when a 659 bp (base pairs) fragment was visualized. The
causative mutation of the PSS syndrome (C Þ T replacement at nucleotide 1843) was
detected by digestion of the 659 bp fragment with the restriction enzyme BsiHKA I
(New England Biolabs). After enzymatic digestion, genotypes were assigned as follow:
homozygous pigs for the mutation (nn) were characterized by fragments at 358 bp,
166 bp and 135 bp. For normal animals (NN), it was observed bands at 524 bp and
135 bp. Heterozygote carriers (Nn) for the mutation presented bands at 524 bp,
358bp, 166 bp and 135 bp.
Meat quality trait analysis: In this experiment 596 F2 animals slaughtered at 65 Kg of
live weight were analyzed for the following meat traits: pH 45 minutes (pH45) and pH
24 hours after slaughter (pHu), intra muscular fat (IMF), drip loss (DL), cooking loss
(CL), total loss (TL), objective tenderness (OT), lightness (L), redness (A), yellowness
(B), hue angle (h) and chroma (c). These analyses were conducted at the Meat Science
Laboratory, in the Food Science Department at the Federal University of Viçosa. Details
can be found at BENEVENUTO Jr. (2001).

Kết quả (Việt) 1:

DNA khai thác: trong điều tra này, máu được thu thập từ 596 F2 động vật tronggiết mổ. Các loài động vật đã được sản xuất bởi outbred vượt qua bằng cách sử dụng thương mại lợn nái(18) và Brazil bản xứ heo (2). Các loài động vật F2 đã lớn lên và tàn sát tại cácTrang trại chăn nuôi lợn, nằm ở động vật cho sở khoa học, đại học liên bang củaViçosa, Viçosa, Minas Gerais State, Bra-xin. DNA được chiết xuất bởi clorua natrigiao thức. Sau khi khai thác, DNA được định lượng ở phối (260 và 280 nm)và pha loãng trong 10 mM TRIS (pH 8,0) - 1mM EDTA (pH 8,0) giải pháp để làm việc mộtnồng độ của 25 ng/ml và bảo tồn tại 4oC. Các cổ phiếu DNA cũng được pha loãng trongTRIS-EDTA giải pháp và duy trì ở - 20oC.Phát hiện khuếch đại và đột biến gen PSS: mẫu DNA từ động vật F2đã được mở rộng trong một MJ nghiên cứu PTC 100-96 thermocycler (MJ nghiên cứu). Cáckhuếch đại chương trình bao gồm các bước sau đây: denaturation tại 94oC, annelingnhiệt độ tại 64 oC, và nhánh tại 72oC. Chu kỳ này được lặp đi lặp lại 35 lần. CácĐảng Cộng sản Romania phản ứng bao gồm 1U Taq DNA polymerase, 0.2 uM của mỗi dNTP, 20 mMTRIS-HCl (pH 8.3), 50 mM KCl, 2 mM MgCl2, chất nền, mồi chuyển tiếp và đảo ngược cách 0.2 μm mỗi(chuyển tiếp - 5'-TCCAGTTTGCCACAGGTCCTACCA-3' và đảo ngược-5' -TTCACCGGAGTGGAGTCTCTGAGT-3', O'BRIEN et al., 1993), và 25 của gen DNAtrong một tập của 20µL. Sự thành công của các phản ứng PCR được quan sát thấy ở 5% trang,màu với AgNO3 khi một mảnh bp (cặp cơ sở) 659 hình dung. CácCác đột biến gây bệnh của hội chứng PSS (C Þ T thay thế tại nucleotide 1843) làđược phát hiện bởi tiêu hóa các đoạn bp 659 với hạn chế enzyme BsiHKA tôi(New England Biolabs). Sau khi tiêu hóa enzym, kiểu gen được bố trí như sau:màu lợn đột biến (nn) được đặc trưng bởi các mảnh vỡ lúc 358 bp,166 bp và 135 bp. Cho động vật bình thường (NN), nó được quan sát thấy các ban nhạc tại 524 bp và135 bp. Heterozygote tàu sân bay (Nn) cho các đột biến trình bày ban nhạc tại 524 bp,358bp, 166 bp và 135 bp.Thịt chất lượng đặc điểm phân tích: trong thử nghiệm động vật F2 596 tàn sát tại 65 Kgtrọng lượng sống được phân tích cho các đặc điểm thịt sau: pH 45 phút (pH45) và pH24 giờ sau khi giết mổ (pHu), chất béo cơ bắp nội (IMF), nhỏ giọt mất (DL), nấu ăn mất mát(CL), tổng số thiệt hại (TL), mục tiêu đau (OT), nhẹ nhàng (L), đỏ (A), yellowness(B), Huế góc (h) và sắc màu (c). Những phân tích được tiến hành tại khoa học thịtPhòng thí nghiệm, tại sở khoa học thực phẩm tại Đại học liên bang Viçosa. Thông tin chi tiếtcó thể được tìm thấy tại BENEVENUTO Jr (2001).

Kết quả (Việt) 2:

Chiết DNA: Trong cuộc điều tra này, máu được lấy từ 596 con vật F2 trong
giết mổ. Những con vật này được sản xuất bởi qua outbred sử dụng lợn nái thương mại
(18) và lợn bản địa của Brazil (2). Các loài động vật F2 được nuôi và giết mổ tại các
trang trại chăn nuôi lợn, đặt tại Cục Thú Khoa học, Đại học Liên bang
vicosa, vicosa, Minas Gerais State, Brazil. DNA được chiết xuất bằng natri clorua
giao thức. Sau khi khai thác, DNA đã được định lượng trong quang phổ (260 và 280 nm)
và pha loãng trong 10 mM Tris (pH 8,0) - 1mm EDTA (pH 8,0) giải pháp cho một làm việc
tập trung của 25 ng / ml và bảo quản ở 4oC. Các DNA chứng khoán cũng đã được pha loãng trong
dung dịch Tris-EDTA và duy trì ở -20oC.
PSS khuếch đại gen và đột biến phát hiện: các mẫu DNA từ các loài động vật F2
được khuếch đại trong một MJ Research PTC 100-96 thermocycler (MJ Research). Các
chương trình khuếch đại bao gồm các bước sau: biến tính ở 94oC, anneling
nhiệt độ 64 oC, và tính năng máy tại 72oC. Chu trình này được lặp đi lặp lại 35 lần. Các
phản ứng PCR gồm 1U Taq DNA polymerase, 0,2 um của mỗi dNTP, 20 mM
Tris-HCl (pH 8.3), 50 mM KCl, 2 mM MgCl2, sơn lót phía trước và ngược 0.2 mM mỗi
(forward - 5'-TCCAGTTTGCCACAGGTCCTACCA- 3 'và ngược lại - 5'-
TTCACCGGAGTGGAGTCTCTGAGT-3 ', O'BRIEN et al, 1993) 25 ng DNA của bộ gen, và.
trong một thể tích 20μL. Sự thành công của các phản ứng PCR đã được quan sát ở 5% TRANG,
nhuộm với nitrate bạc khi một 659 bp (cặp base) mảnh được hình dung. Các
đột biến gây bệnh của hội chứng PSS (C Þ T thay thế tại nucleotide 1843) đã được
phát hiện bởi hệ tiêu hóa của đoạn 659 bp với enzyme giới hạn BsiHKA tôi
(New England Biolabs). Sau khi tiêu hóa enzyme, kiểu gen đã được phân công như sau:
lợn đồng hợp tử đối với đột biến (nn) được đặc trưng bởi các mảnh vỡ tại 358 bp,
166 bp và 135 bp. Đối với động vật bình thường (NN), nó được quan sát thấy các ban nhạc tại 524 bp và
135 bp. Hãng dị hợp tử (Nn) cho các ban nhạc đột biến được trình bày tại 524 bp,
358bp, 166 bp và 135 bp.
phân tích Thịt đặc điểm chất lượng: Trong thí nghiệm 596 con vật F2 giết thịt ở 65 kg
trọng lượng sống được phân tích những đặc điểm thịt sau: pH 45 phút (pH45) và pH
24 giờ sau khi giết mổ (Phú), nội mỡ cơ bắp (IMF), mất nhỏ giọt (DL), không nấu
(CL), tổng số lỗ (TL), dịu dàng quan (OT), độ sáng (L), đỏ (A), độ vàng
(B), góc màu (h) và sắc độ (c). Những phân tích này đã được tiến hành tại Khoa Thịt
phòng thí nghiệm, tại Sở Khoa học thực phẩm tại Đại học Liên bang vicosa. Thông tin chi tiết
có thể được tìm thấy tại BENEVENUTO Jr. (2001).