The developed MA for kiwi PMEI were

The developed MA for kiwi PMEI were used in
immunofluorescence microscopy to analyse the in situ
localisation of kiwi PMEI on the cellular level. Although
immunomicroscopy is a well-established method, handling
plant material can be considered difficult and a number of
considerations have to be made (Marttila and Sante´n 2007).
The fixative, 4% paraformaldehyde and 0.3% glutaraldehyde,
in combination with cryosectioning was able to
preserve the position of the rather small and water-soluble
kiwi PMEI and to preserve the antigenicity of this protein.
The characterisation of the MA, as explained above,
allowed us to rule out the masking of kiwi PMEI by PME
as the MA could bind to kiwi PMEI in complex with
mature PME (tested in immunoprecipitation).
In the parenchyma cells of the kiwi fruit columella,
overall labelling of the cell-wall region was observed. The
majority of the cell walls were extensively swollen, which
is known to be pronounced for kiwi fruit (Redgwell et al.
1992a) and which is correlated with the degree of pectin
solubilisation (Redgwell et al. 1997). More detailed
immunofluorescent images of the kiwi fruit columella
showed labelling of the middle lamella as well as labelling
of the cell wall in proximity of the plasmalemma. The latter
observation is in accordance with the preliminary experiment
of Camardella et al. (2000), who pointed out that
immunological staining indicated PMEI to be concentrated
in a layer close to the cell membrane, although no result
was shown. Two types of labelling were observed in the
intercellular spaces: the kiwi PMEI label was located either
on the walls and junctions lining the intercellular space or
either throughout the whole cavity of the intercellular
space. Thus far, this is the first report made on the distribution
of kiwi PMEI on the cellular level. It is important to
emphasise that the kiwi PMEI as observed here probably
consists of the soluble kiwi PMEI. The negative control of
tissue samples soaked in water indicated a diffusion of
PMEI labelling into the cytoplasm, probably due to the
generated osmotic pressure. To make sure that the extraction
with water and high ionic strength buffer was complete,
the kiwi columella was pureed prior to extraction and
fixation. These negative controls indicated that after
removal of the soluble kiwi PMEI, labelling disappeared.
Thus, the kiwi PMEI which was present in the salt extract
of kiwi fruit might not be detected by the antibodies under
the experimental conditions used. Yet, the antibodies could
still bind to kiwi PMEI in complex with PME when tested
in immunoprecipitation, which is conducted on solutes of
pure proteins.

Kết quả (Việt) 1:

MA phát triển cho kiwi PMEI được sử dụng trongimmunofluorescence kính hiển vi để phân tích tại chỗLocalisation kiwi PMEI trên cấp độ tế bào. Mặc dùimmunomicroscopy là một phương pháp cũng thành lập, xử lývật liệu có thể được coi là khó khăn và một sốcân nhắc có thể được thực hiện (Marttila và Sante´n năm 2007).Định hình, 4% paraformaldehyde và 0,3% glutaraldehyde,kết hợp với cryosectioning đã có thểbảo vệ vị trí của khá nhỏ và hòa tan trong nướcKiwi PMEI và để bảo vệ antigenicity của protein này.Characterisation MA, như đã giải thích ở trên,cho phép chúng tôi để cai trị ra che kiwi PMEI bởi PMEnhư MA có thể liên kết với kiwi PMEI trong khu phức hợp vớitrưởng thành PME (kiểm tra trong immunoprecipitation).Trong các tế bào nhu mô của columella quả kiwi,ghi nhãn tổng thể của vùng vách tế bào được quan sát thấy. Cácđa số các thành tế bào đã rộng rãi sưng, màđược biết là được phát âm là cho trái cây kiwi (Redgwell et al.1992a) và đó là tương quan với mức độ pectinsolubilisation (Redgwell et al. năm 1997). Thêm chi tiếtCác hình ảnh immunofluorescent của columella quả kiwicho thấy, nhãn mác của các phiến kính trung cũng như nhãn máccủa tế bào ở gần nhau của plasmalemma. Loại thứ haiquan sát là phù hợp với các thí nghiệm sơ bộcủa Camardella et al. (2000), người đã chỉ ra rằngnhuộm miễn dịch chỉ định PMEI được tập trungtrong một lớp đóng cho màng tế bào, mặc dù không có kết quảđược hiển thị. Hai loại nhãn mác đã được quan sát thấy ở cácintercellular gian: kiwi PMEI hãng là nằm ở một trong haitrên các bức tường và nút lót không gian intercellular hoặchoặc là trong suốt toàn bộ khoang của các intercellularkhông gian. Vậy, đến nay, đây là báo cáo đầu tiên được thực hiện trên phân phốicủa kiwi PMEI trên cấp độ tế bào. Điều quan trọng lànhấn mạnh rằng kiwi PMEI như quan sát thấy ở đây có lẽbao gồm hòa tan kiwi PMEI. Kiểm soát tiêu cựcmẫu mô được ngâm trong nước chỉ ra một phổ biến củaPMEI ghi nhãn vào tế bào chất, có lẽ do cáctạo ra áp lực thẩm thấu. Để đảm bảo rằng việc khai thácvới nước và cường độ cao ion đệm đã được hoàn thành,kiwi columella được xay nhuyễn trước khi khai thác vàcố định. Những điều khiển này phủ định chỉ ra rằng sau khiloại bỏ kiwi hòa tan PMEI, nhãn mác đã biến mất.Như vậy, kiwi PMEI mà đã được trình bày trong muối giải néncủa kiwi trái cây có thể không được phát hiện bởi các kháng thể dướiCác điều kiện thử nghiệm sử dụng. Tuy vậy, các kháng thể có thểvẫn còn liên kết với kiwi PMEI trong khu phức hợp với PME khi thử nghiệmtrong immunoprecipitation, được tiến hành trên solutes củaprotein tinh khiết.

Kết quả (Việt) 2:

MA phát triển cho kiwi PMEI đã được sử dụng trong
kính hiển vi miễn dịch huỳnh quang để phân tích tại chỗ
nội địa hóa của kiwi PMEI trên cấp độ tế bào. Mặc dù
immunomicroscopy là một phương pháp được thiết lập tốt, xử lý
nguyên liệu thực vật có thể được coi là khó khăn và một số
cân nhắc đã được thực hiện (Marttila và Sante'n 2007).
Các định hình, 4% paraformaldehyde và 0,3% glutaraldehyde,
kết hợp với cryosectioning là có thể
giữ nguyên vị trí của khá nhỏ và tan trong nước
kiwi PMEI và để bảo tồn các kháng nguyên của protein này.
các đặc tính của MA, như đã giải thích ở trên,
cho phép chúng ta loại trừ các mặt nạ kiwi PMEI bởi PME
là MA có thể liên kết với Kiwi PMEI trong phức tạp với
PME trưởng thành (thử nghiệm trong immunoprecipitation).
trong các tế bào nhu mô của kiwi Columella trái cây,
ghi nhãn chung của khu vực thành tế bào đã được quan sát. Các
phần của thành tế bào là rộng rãi sưng lên, mà
được biết là được phát âm là cho trái kiwi (Redgwell et al.
1992a) và trong đó có tương quan với mức độ pectin
solubilisation (Redgwell et al. 1997). Nhiều chi tiết
hình ảnh miễn dịch huỳnh quang của Columella trái kiwi
cho thấy nhãn mác của các phiến kính trung cũng như nhãn mác
của các tế bào ở gần nhau của các plasmalemma. Sau đó
quan sát là phù hợp với các thí nghiệm sơ bộ
của Camardella et al. (2000), người đã chỉ ra rằng
nhuộm miễn dịch chỉ PMEI được tập trung
trong một lớp gần với màng tế bào, mặc dù kết quả không
được hiển thị. Hai loại nhãn mác đã được quan sát trong
không gian bào: các nhãn kiwi PMEI nằm hoặc
trên các bức tường và các nút giao lót khoang gian bào hoặc
một trong hai trong suốt toàn bộ khoang của bào
không gian. Như vậy đến nay, đây là báo cáo đầu tiên được thực hiện trên sự phân bố
của kiwi PMEI trên cấp độ tế bào. Điều quan trọng là phải
nhấn mạnh rằng kiwi PMEI như quan sát thấy ở đây có thể
bao gồm các hòa tan kiwi PMEI. Việc kiểm soát tiêu cực của
các mẫu mô ngâm trong nước cho thấy một sự khuếch tán của
nhãn PMEI vào tế bào chất, có thể là do
áp suất thẩm thấu tạo ra. Để chắc chắn rằng việc khai thác
nước và vùng đệm sức mạnh ion cao đã được hoàn tất,
các Columella kiwi đã xay nhuyễn trước khi khai thác và
định hình. Những điều khiển âm chỉ ra rằng sau khi
loại bỏ các hòa tan kiwi PMEI, ghi nhãn biến mất.
Như vậy, PMEI kiwi mà đã có mặt trong các chiết xuất muối
của trái kiwi có thể không được phát hiện bởi các kháng thể dưới
các điều kiện thí nghiệm được sử dụng. Tuy nhiên, những kháng thể có thể
bám vào kiwi PMEI trong phức tạp với PME khi thử nghiệm
trong immunoprecipitation, được thực hiện trên các chất hòa tan của
protein tinh khiết.