Difference gel electrophoresis (DIG

Difference gel electrophoresis (DIGE) is a form of gel electrophoresis where up to three different protein samples can be labeled with size-matched, charge-matched spectrally resolvable fluorescent dyes (for example Cy3, Cy5, Cy2) prior to two-dimensional electrophoresis.[1] Then, the three samples are mixed and loaded onto IEF for first dimension and the strip is transferred to a SDS PAGE. After the gel electrophoresis, the gel is scanned with the excitation wavelength of each dye one after the other, so we are able to see each sample separately (if we scan the gel at the excitation wavelength of the Cy3 dye, we will see in the gel only the sample that was labeled with that dye). This technique is used to see changes in protein abundance (for example, between a sample of a healthy person and a sample of a person with disease), post-translational modifications, truncations and any modification that might change the size or isoelectric point of proteins. The binary shifts might be left to right (change in isoelectric point), vertical (change in size) or diagonal (change in both size and isoelectric point). Reciprocal Labeling is done to make sure the changes seen are not due to dye-dependent interactions.

It overcomes limitations in traditional 2D electrophoresis that are due to inter-gel variation. This can be considerable even with identical samples. Since the proteins from the different sample types (e.g. healthy/diseased, virulent/non-virulent) are run on the same gel they can be directly compared. To do this with traditional 2D electrophoresis requires large numbers of time consuming repeats.

In experiments comprising several gels, a common technique is to include an internal standard in each gel. The internal standard is prepared by mixing together several or all of the samples in the experiment. This allows the measurement of the abundance of a protein in each sample relative to the internal standard. Since the amounts of each protein in the internal standard is known to be the same in every gel, this method reduces inter-gel variation

Kết quả (Việt) 1:

Sự khác biệt gel electrophoresis (DIGE) là một dạng gel electrophoresis nơi đến protein khác nhau ba mẫu có thể được dán nhãn với các kích thước kết hợp, kết hợp phí spectrally resolvable huỳnh quang nhuộm (ví dụ: Cy3, Cy5, Cy2) trước khi hai chiều electrophoresis. [1] sau đó, ba mẫu được trộn lẫn và tải lên IEF cho các kích thước đầu tiên và các dải được chuyển vào một trang dùng mũi SDS. Sau khi gel electrophoresis, gel là quét với bước sóng kích thích mỗi thuốc nhuộm một sau khi khác, do đó, chúng tôi có thể xem mỗi mẫu một cách riêng biệt (nếu chúng tôi quét các gel ở bước sóng kích thích của thuốc nhuộm Cy3, chúng ta sẽ thấy trong gel chỉ các mẫu được gắn nhãn với thuốc nhuộm đó). Kỹ thuật này được sử dụng để xem các thay đổi trong protein phong phú (ví dụ, từ một mẫu của một người khỏe mạnh và một mẫu của một người bị bệnh), sửa đổi post-translational, truncations và bất kỳ thay đổi nào có thể thay đổi kích thước hoặc isoelectric điểm của protein. Ca nhị phân có thể được từ trái sang phải (thay đổi ở isoelectric point), thẳng đứng (thay đổi kích thước) hoặc đường chéo (thay đổi kích thước và isoelectric điểm). Tình Labeling được thực hiện để đảm bảo những thay đổi thấy không do phụ thuộc vào thuốc nhuộm tương tác.Nó vượt qua giới hạn trong electrophoresis 2D truyền thống đó là do các biến thể liên gel. Điều này có thể được đáng kể ngay cả với giống hệt mẫu. Kể từ khi các protein từ các loại mẫu khác nhau (ví dụ: khỏe/bệnh, độc/không-độc) đang chạy trên gel cùng họ có thể được so sánh trực tiếp. Để làm điều này với electrophoresis 2D truyền thống đòi hỏi một lượng lớn thời gian lặp đi lặp lại.Trong thí nghiệm bao gồm một số gel, một kỹ thuật phổ biến là để bao gồm một tiêu chuẩn nội bộ trong mỗi gel. Các tiêu chuẩn nội bộ được điều chế bằng cách trộn với nhau một số hoặc tất cả các mẫu trong các thử nghiệm. Điều này cho phép đo lường của sự phong phú của một protein ở mỗi mẫu liên quan đến các tiêu chuẩn nội bộ. Kể từ khi số tiền của mỗi protein trong các tiêu chuẩn nội bộ được biết đến là giống nhau trong mỗi gel, phương pháp này làm giảm các biến thể liên gel

Kết quả (Việt) 2:

Sự khác biệt gel điện di (DIGE) là một dạng gel có nơi lên đến ba mẫu protein khác nhau có thể được dán nhãn, thuốc nhuộm huỳnh quang quang phổ phân giải phí hợp kích thước phù hợp (ví dụ Cy3, Cy5, CY2) trước khi điện di hai chiều. [1] Sau đó, ba mẫu được pha trộn và nạp vào IEF cho chiều kích đầu tiên và dải được chuyển giao cho một TRANG SDS. Sau khi điện di gel, gel được quét với bước sóng kích thích của mỗi thuốc nhuộm một sau khi khác, vì vậy chúng tôi có thể nhìn thấy mỗi mẫu riêng (nếu chúng tôi quét gel ở bước sóng kích thích của thuốc nhuộm Cy3, chúng ta sẽ thấy trong các gel chỉ có mẫu đã được dán nhãn với thuốc nhuộm). Kỹ thuật này được sử dụng để xem những thay đổi trong sự phong phú protein (ví dụ, giữa một mẫu của một người khỏe mạnh và một mẫu của một người mắc bệnh), sửa đổi hậu dịch, sự cắt và sửa đổi bất kỳ mà có thể thay đổi kích thước hoặc điểm đẳng điện của protein . Những thay đổi nhị phân có thể được trái sang phải (thay đổi trong điểm đẳng điện), dọc (thay đổi kích thước) hoặc chéo (thay đổi cả về quy mô và điểm đẳng điện). Ghi nhãn đối ứng được thực hiện để đảm bảo rằng những thay đổi nhìn thấy không phải do nhuộm phụ thuộc vào tương tác.

Nó vượt qua những hạn chế trong điện 2D truyền thống mà là do sự thay đổi liên gel. Đây có thể là đáng kể, ngay cả với các mẫu giống hệt nhau. Kể từ khi các protein từ các loại mẫu khác nhau (ví dụ như sức khỏe / bệnh, độc / không độc hại) đang chạy trên gel cùng họ có thể được so sánh trực tiếp. Để làm điều này với điện 2D truyền thống đòi hỏi một số lượng lớn tốn thời gian lặp đi lặp lại.

Trong thí nghiệm gồm nhiều gel, một kỹ thuật phổ biến là để bao gồm một tiêu chuẩn nội bộ trong từng gel. Các tiêu chuẩn nội bộ được chuẩn bị bằng cách trộn cùng một số hoặc tất cả các mẫu trong thí nghiệm. Điều này cho phép đo của sự phong phú của một protein trong mỗi mẫu so với các tiêu chuẩn nội bộ. Kể từ khi các số liệu của mỗi protein trong các tiêu chuẩn nội bộ được biết đến là giống nhau ở mọi gel, phương pháp này làm giảm sự biến đổi liên gel