4.3.3 Enumeration of Spore Populati

4.3.3 Enumeration of Spore Populations
The concentration of spores in the final spore crop suspension should be
determined so that selected aliquots can be used to form test suspensions
that will have the required spore populations. The enumeration should also
be extended to the test suspensions in order to verify populations prior to
their exposure to thermal treatment. Microbial enumeration is dependent
upon the methods employed. Many species require specific culture media,
the composition ofwhich must be carefully formulated and controlled, with
particular attention to pH, redox potential, and the like as well as the
incubation conditions, aerobic/anaerobic, temperature, and time.
There are two basic methods, one in which the number of colonies that
appear on or within the surface of a solid culture medium is counted and
expressed as colony forming units (cfu); the other of which is the most
probable number (MPN), which is derived from the presence or absence of
growth in specified dilutions of the inoculum in a culture medium. By
convention, the number of microorganisms in a population is equal to the
number of cfus counted times the dilution factor, or to a most probable
number derived from specific probability tables for this purpose and the
dilution factor. In both cases the medium and incubation conditions used
are generally chosen to obtain the maximum number ofmicroorganisms and
to which specific reference is made.
The spores must be permitted to germinate to form vegetative cells,
which are then grown on or in a suitable medium. In the germination the
spore becomes hydrated with reduced thermal resistance. With the initiation
of nucleic acid and protein synthesis, the vegetative cell emerges from the
spore casing followed by cellular expansion up to the point of the first
cellular division. In some instances, germination occurs spontaneously at the
end of sporulation, during the refining operations, and/or during storage. As
germinating spores have lost their heat resistance, their presence
proportionately reduces the spore population that is usable for heat
resistance tests. Initiation of germination requires the presence of specific
low molecular weight compounds (e.g ., glucose, certain amino acids, and
some nucleotides) in the culture medium whose composition tends to be
species and strain specific. The time required for the completion of the
germination varies from species to species, strain to strain, and even within
a spore crop, and it may require hours to many weeks to overcome what is
called spore dormancy. Both the speed of germination and the proportion
of the spores to germinate can frequently be increased by heat shocking (i.e.,
moderate preheating of the spores). This phenomenon, called heat
activation, is not always taken into consideration in the experimental

protocols for studying the destructive effects of thermal treatments. Its
o mission can affect the enumeration of the surviving spores as well as th e
interpretation of the results. This will be discussed in Section 4.4.1.

Kết quả (Việt) 2:

4.3.3 Phương pháp xác định Spore quần
Nồng độ của các bào tử trong việc đình chỉ vụ bào tử cuối cùng phải được
xác định để cho dung dòch lựa chọn có thể được sử dụng để tạo thành hệ thống treo kiểm tra
mà sẽ có các quần thể bào tử cần thiết. Việc liệt kê cũng cần
được mở rộng đến đình chỉ kiểm tra để xác minh các quần thể trước khi
tiếp xúc với họ để xử lý nhiệt. Điều tra vi sinh vật phụ thuộc
vào các phương pháp làm việc. Nhiều loài đòi hỏi phương tiện truyền thông văn hóa cụ thể,
các ofwhich thành phần phải được xây dựng một cách cẩn thận và kiểm soát, với
sự quan tâm đặc biệt đến pH, oxy hóa khử, và như thế cũng như các
điều kiện ủ bệnh, hiếu khí / kỵ khí, nhiệt độ và thời gian.
Có hai phương pháp cơ bản , một trong đó số lượng các thuộc địa mà
xuất hiện trên hoặc bên trong bề mặt của môi trường nuôi cấy rắn được tính và
thể hiện như hình thành các đơn vị thuộc địa (cfu); các khác là hầu hết các
số có xác suất (MPN), trong đó có nguồn gốc từ sự hiện diện hay vắng mặt của
tăng trưởng trong dung dịch pha loãng quy định của các nguồn bệnh trong môi trường nuôi cấy. Bởi
quy ước, số lượng vi sinh vật trong một dân số bằng với
số lần cfus tính hệ số pha loãng, hoặc cho một xác suất lớn nhất
số lượng có nguồn gốc từ các bảng xác suất cụ thể cho mục đích này và các
yếu tố pha loãng. Trong cả hai trường hợp vừa và ủ điều kiện sử dụng
thường được lựa chọn để có được những ofmicroorganisms số tối đa và
để mà cụ thể tham khảo được thực hiện.
Các bào tử phải được phép để nảy mầm để hình thành tế bào thực vật,
mà sau đó được trồng trên hoặc trong một môi trường thích hợp. Trong sự nảy mầm của
bào tử trở nên ngậm nước với giảm điện trở nhiệt. Với việc khởi đầu
của axit nucleic và tổng hợp protein, các tế bào sinh dưỡng nổi lên từ
vỏ bào tử tiếp theo là mở rộng di động cho đến thời điểm những người đầu tiên
phân chia tế bào. Trong một số trường hợp, sự nảy mầm xảy ra một cách tự nhiên ở
cuối hình thành bào tử, trong các hoạt động tinh chế, và / hoặc trong quá trình lưu trữ. Khi
bào tử nảy mầm đã mất khả năng chịu nhiệt của họ, sự hiện diện của họ
tương ứng giảm dân số bào tử mà là có thể sử dụng cho nhiệt
xét nghiệm kháng. Initiation nảy mầm đòi hỏi sự hiện diện của cụ thể
các hợp chất phân tử lượng thấp (ví dụ., Glucose, acid amin nhất định, và
một số nucleotide) trong môi trường nuôi cấy có thành phần có xu hướng được
các loài và chủng cụ thể. Thời gian cần thiết cho việc hoàn thành các
hạt nảy mầm khác nhau từ loài này sang loài, chủng chủng, và thậm chí trong
một vụ bào tử, và nó có thể yêu cầu giờ để nhiều tuần để vượt qua những gì được
gọi là bào tử ngủ. Cả hai tốc độ nảy mầm và tỷ lệ
của các bào tử nảy mầm thường xuyên có thể tăng lên do nhiệt gây sốc (tức là,
sấy sơ bộ vừa phải các bào tử). Hiện tượng này, được gọi là nhiệt
kích hoạt, không phải luôn luôn được xem xét trong các thử nghiệm giao thức để nghiên cứu các ảnh hưởng tiêu cực của phương pháp điều trị nhiệt. Mình sứ mệnh o có thể ảnh hưởng đến việc điều tra của các bào tử sống sót cũng như điện tử lần thứ diễn giải kết quả. Điều này sẽ được thảo luận trong phần 4.4.1.