Lentiviral EBV miRNA reporters were

Lentiviral EBV miRNA reporters were cloned in the pSicoR backbone (Addgene plasmid 11579, Tyler Jacks Lab, MIT). For this, the CMV promoter was replaced with a human EF1A promoter that now drives expression of a PuroR-T2A-mCherry cassette allowing for selection and tracking of lentivirally transduced cells. Downstream of the PuroR-T2A-mCherry cassette we cloned single perfect miRNA target sites for the following EBV-encoded miRNAs: BART5-5p (5’-CGATGGGCAGCTATATTCACCTTG-3’), BART6-3p (5’-TCTAAGGCTAGTCCGATCCCCG-3’), and BART16-5p (5’-AGAGCACACACCCACTCTATCTAA-3’). All vectors were sequence verified.

Kết quả (Việt) 1:

Lentiviral EBV Tam phóng viên đã được nhân bản trong xương sống pSicoR (Addgene plasmid 11579, Tyler Jacks Lab, MIT). Đối với điều này, CMV promoter được thay thế bằng một promoter EF1A con người bây giờ ổ biểu hiện của một cassette PuroR-T2A-mCherry cho phép lựa chọn và theo dõi của các tế bào lentivirally transduced. Hạ lưu của băng PuroR-T2A-mCherry chúng tôi nhân bản các trang web mục tiêu duy nhất Tam hoàn hảo cho EBV mã hóa miRNAs sau: BART5 - 5p (5'-CGATGGGCAGCTATATTCACCTTG-3'), BART6 - 3p (5'-TCTAAGGCTAGTCCGATCCCCG-3'), và BART16 - 5p (5'-AGAGCACACACCCACTCTATCTAA-3'). Tất cả các vector là trình tự xác minh.

Kết quả (Việt) 2:

phóng viên lentivirus EBV miRNA được nhân bản trong xương sống pSicoR (Addgene plasmid 11.579, Tyler Jacks Lab, MIT). Đối với điều này, các promoter CMV đã được thay thế bằng một promoter EF1A con người mà bây giờ ổ đĩa biểu hiện của một băng PuroR-T2A-mCherry cho phép lựa chọn và theo dõi các tế bào lentivirally biến đổi. Hạ lưu các băng PuroR-T2A-mCherry chúng nhân bản hoàn hảo các trang web mục tiêu miRNA duy nhất cho các miRNA EBV-mã hóa sau đây: BART5-5p (5'-CGATGGGCAGCTATATTCACCTTG-3 '), BART6-3p (5'-TCTAAGGCTAGTCCGATCCCCG-3'), và BART16-5p (5'-AGAGCACACACCCACTCTATCTAA-3 '). Tất cả các vectơ đã tự xác minh.