In genetics, pBluescript (pBS) or p

In genetics, pBluescript (pBS) or pBluescript II is a commercially available phagemid containing several useful sequences for use in cloning with bacteriophage. The sequences include a multiple cloning site sequence (MCS), antibiotic resistance sequence to ampicillin and an E. coli and f1 helper phage origin of replication. The multiple cloning site sequence is located within a LacZ controlled gene designed to provide a blue coloration when expressed in bacteria. This is usually achieved via X-gal found in agarose growth media used to culture bacteria with pBS. If the gene is disrupted by successful insertion of a DNA sequence, the bacteria exhibit a white coloration in Blue white screening, distinguishing successful recombination from those phagemids which were not altered. These recombinant plasmids can then be used in a variety of molecular techniques. Determining expression and developing genomic libraries are some applications for which the pBS recombinants can be used.

The pBluescript II phagemids (plasmids with a phage origin) are cloning vectors designed to simplify commonly used cloning and sequencing procedures, including the construction of nested deletions for DNA sequencing, generation of RNA transcripts in vitro and site-specific mutagenesis and gene mapping. The pBluescript II phagemids have an extensive multiple cloning site with 21 unique restriction enzyme recognition sites. Flanking the multiple cloning site are T7 and T3 RNA polymerase promoters that can be used to synthesize RNA in vitro. 1, 2

The choice of promoter used to initiate transcription determines which strand of the insert cloned into the multiple cloning site will be transcribed. Circular maps and lists of features for the pBluescript II phagemids are shown in figures 1 and 2. The multiple cloning site and T7 and T3 RNA polymerase promoter sequences are present in the N-terminal portion of a lacZ gene fragment. A total of 131 amino acids of β-galactosidase coding sequence is present in the pBluescript II phagemid, but the coding sequence is interrupted by the large multiple cloning site. (There are 36 amino acids from the initiator Met sequence to the EcoR I site.) pBluescript II phagemids having no inserts in the multiple cloning site will produce blue colonies in the appropriate strains of bacteria (i.e., strains containing lacZΔM15 on an F´ episome, such as XL1-Blue MRF´, among others). pBluescript II phagemids that have inserts will produce white colonies using the same strain, because the inserts disrupt the coding region of the lacZ gene fragment. pBluescript II (+) and (–) are available with two multiple cloning site orientations designated as either KS or SK using the following convention: (1) in the KS orientation, the Kpn I restriction site is nearest the lacZ promoter and the Sac I restriction site is farthest from the lacZ promoter; and (2) in the SK orientation, the Sac I site is the closest restriction site to the lacZ promoter and the Kpn I site is the farthest. Flanking the T3 and T7 promoters are BssH II sites. This rare six-base cutter will allow the insert plus the T phage RNA promoters to be excised and used for gene mapping. pBluescript II phagemids can be rescued as single-stranded (ss) DNA. pBluescript II phagemids contain a 454-bp filamentous f1 phage intergenic region (M13 related), which includes the 307-bp origin of replication. The (+) and (–) orientations of the f1 intergenic region allow the rescue of sense or antisense ssDNA by a helper phage. This ssDNA can be used for dideoxynucleotide sequencing (Sanger method) or site-specific mutagenesis

Kết quả (Việt) 1:

Trong di truyền học, pBluescript (pBS) hay pBluescript II là một phagemid thương mại có sẵn có chứa một số chuỗi hữu ích để sử dụng trong nhân bản với bacteriophage. Các chuỗi bao gồm một nhiều nhân bản trang web trình tự (MCS), kháng kháng sinh tự ampicillin và E. coli và f1 helper thực khuẩn nguồn gốc của sự sao chép. Nhiều trình tự nhân bản của trang web nằm ở một gen LacZ kiểm soát được thiết kế để cung cấp một màu xanh khi bày tỏ trong vi khuẩn này. Điều này thường đạt được thông qua X-gal tìm thấy trong agarose tăng trưởng phương tiện truyền thông được sử dụng với văn hóa vi khuẩn với pBS. Nếu gen bị gián đoạn do chèn thành công của một trình tự ADN, các vi khuẩn triển lãm một màu trắng trắng màu xanh kiểm tra, phân biệt gen thành công từ những phagemids mà không được thay đổi. Những plasmid tái tổ hợp sau đó có thể được sử dụng trong một loạt các kỹ thuật phân tử. Xác định biểu hiện và phát triển thư viện gen là một số ứng dụng mà pBS recombinants có thể được sử dụng.PBluescript II phagemids (plasmid với một nguồn gốc thực bào phage) nhân bản vectơ được thiết kế để đơn giản hóa nhân bản thường được sử dụng và thủ tục trình tự, bao gồm xây dựng trong lồng nhau xoá ADN xác định trình tự, các thế hệ của RNA bảng điểm trong ống nghiệm và trang mutagenesis và lập bản đồ gen. PBluescript II phagemids có một mở rộng nhiều nhân bản trang web với 21 độc đáo hạn chế enzyme công nhận các trang web. Sườn nhiều nhân bản trang web là T7 và T3 RNA polymerase quảng bá có thể được sử dụng để tổng hợp RNA trong ống nghiệm. 1, 2Sự lựa chọn của promoter được sử dụng để bắt đầu sao chép sẽ xác định sợi chèn nhân bản thành nhiều nhân bản trang web sẽ được phiên âm. Thông tư bản đồ và danh sách các tính năng cho pBluescript II phagemids được hiển thị trong hình 1 và 2. Nhân bản vô tính nhiều trang web và T7 và T3 RNA polymerase promoter chuỗi đang hiện diện trong phần N thiết bị đầu cuối của một mảnh gen lacZ. Tổng cộng 131 axit amin của β-hoá mã hóa chuỗi được trình bày trong pBluescript II phagemid, nhưng trình tự mã hóa bị gián đoạn bởi nhiều lớn nhân bản trang web. (Có những 36 axit amin từ xướng Met chuỗi để EcoR tôi trang web.) pBluescript II phagemids có không chèn vào trang web nhiều nhân bản sẽ sản xuất các thuộc địa màu xanh ở thích hợp các chủng vi khuẩn (tức là, chủng có lacZΔM15 trên một F´ episome, chẳng hạn như MRF´ XL1 màu xanh, trong số những người khác). pBluescript II phagemids đã chèn sẽ sản xuất thuộc địa trắng bằng cách sử dụng cùng một căng thẳng, bởi vì các chèn phá vỡ trong vùng mã hóa lacZ gen mảnh. pBluescript II (+) và (-) được cung cấp với hai nhiều nhân bản trang web định hướng là KS hoặc SK bằng cách sử dụng công ước sau: (1) trong định hướng KS, Kpn tôi hạn chế trang web là gần nhất lacZ promoter và túi tôi hạn chế trang web là farthest from lacZ promoter; và (2) trong định hướng SK, túi tôi trang web là nơi có hạn chế gần nhất để lacZ promoter và Kpn tôi trang web là các xa nhất. Sườn T3 và T7 quảng bá những trang web BssH II. Này cắt sáu cơ sở hiếm sẽ cho phép chèn cộng với quảng bá RNA phage T được excised và được sử dụng để lập bản đồ gen. pBluescript II phagemids có thể được cứu thoát như đĩa đơn-stranded (ss) DNA. pBluescript II phagemids chứa một 454-bp sợi nhỏ f1 phage intergenic vùng (M13 liên quan), có nguồn gốc 307-bp của nhân rộng. (+) Và định hướng (-) của vùng intergenic f1 cho phép giải cứu của cảm giác hoặc antisense ssDNA bởi một helper thực khuẩn. SsDNA này có thể được sử dụng cho dideoxynucleotide trình tự (Sanger phương pháp) hoặc trang mutagenesis

Kết quả (Việt) 2:

Trong di truyền học, pBluescript (PBS) hoặc pBluescript II là một phagemid thương mại sẵn có chứa một số trình tự hữu ích để sử dụng trong nhân bản vô tính với vi khuẩn. Các trình tự bao gồm một chuỗi nhiều site nhân bản (MCS), trình tự kháng kháng sinh ampicillin và E. coli và f1 helper phage nguồn gốc của bản sao. Trình tự nhân bản nhiều trang web nằm trong vòng kiểm soát gen lacZ một thiết kế để cung cấp một màu xanh khi thể hiện trong vi khuẩn. Điều này thường được thực hiện thông qua X-gal được tìm thấy trong môi trường phát triển agarose được sử dụng để vi khuẩn nuôi cấy với PBS. Nếu gen bị phá vỡ bằng cách chèn thành công của một chuỗi DNA, các vi khuẩn hiện một màu trắng trong sàng lọc trắng xanh, phân biệt tái tổ hợp thành công từ những phagemids mà không được thay đổi. Những plasmid tái tổ hợp sau đó có thể được sử dụng trong một loạt các kỹ thuật phân tử. Xác định biểu hiện và phát triển thư viện gen được một số ứng dụng mà các thể tái tổ hợp PBS có thể được sử dụng. Các phagemids pBluescript II (Plasmid có nguồn gốc thực khuẩn) là vectơ nhân bản được thiết kế để đơn giản hóa thường được sử dụng các thủ tục nhân bản và trình tự, bao gồm cả việc xây dựng các xóa bỏ lồng cho DNA trình tự, thế hệ của phiên mã RNA trong ống nghiệm và đột biến gen và lập bản đồ địa điểm cụ thể. Các phagemids pBluescript II có một trang web nhân bản nhiều sâu rộng với 21 khu công nhận độc đáo enzyme hạn chế. Chầu site nhân bản nhiều là T7 và T3 RNA polymerase quảng bá có thể được sử dụng để tổng hợp RNA trong ống nghiệm. 1, 2 Sự lựa chọn của promoter được sử dụng để bắt đầu phiên mã xác định sợi chèn nhân bản vào trang web nhân bản nhiều sẽ được sao chép lại. Thông tư bản đồ và danh sách các tính năng cho người phagemids pBluescript II được thể hiện ở con số 1 và 2. Các trang web nhân bản nhiều và T7 và T3 RNA chuỗi polymerase promoter có mặt trong phần N-terminal của một đoạn gen lacZ. Tổng cộng có 131 axit amin của chuỗi mã hóa β-galactosidase có mặt trong phagemid pBluescript II, nhưng trình tự mã hóa bị gián đoạn bởi các trang web nhân bản lớn nhiều. (Có 36 axit amin từ khởi Met trình tự để các trang web EcoR tôi.) PBluescript II phagemids không có chèn trong các site nhân bản nhiều sẽ tạo khuẩn lạc màu xanh trong các chủng vi khuẩn thích hợp (ví dụ, chủng chứa lacZΔM15 trên một episome F' như XL1-Blue MRF', trong số những người khác). phagemids pBluescript II có chèn sẽ tạo khuẩn lạc màu trắng bằng cách sử dụng cùng một dòng, vì chèn phá vỡ vùng mã hóa của gen lacZ mảnh. pBluescript II (+) và (-) có sẵn với hai nhiều định hướng trang web nhân bản được xem như là một trong hai KS hoặc SK sử dụng các quy ước sau đây: (1) trong định hướng KS, các trang web hạn chế KPN tôi là khu vực gần các promoter lacZ và Sac tôi trang web hạn chế là xa nhất từ các promoter lacZ; và (2) trong định hướng SK, các trang web Sac tôi là trang web hạn chế gần gũi nhất với các promoter lacZ và các trang web KPN tôi là xa nhất. Chầu T3 và T7 promoter là BssH trang web II. Hiếm sáu cơ sở cắt này sẽ cho phép chèn thêm các quảng bá phage RNA T để được cắt bỏ và được sử dụng để lập bản đồ gen. phagemids pBluescript II có thể được cứu sống như sợi đơn (ss) DNA. phagemids pBluescript II chứa một sợi phage f1 vùng intergenic 454-bp (M13 liên quan), trong đó bao gồm nguồn gốc 307-bp nhân rộng. The (+) và (-) định hướng của khu vực intergenic f1 cho phép giải cứu ý nghĩa hoặc antisense ssDNA bởi một thể thực khuẩn helper. SsDNA này có thể được sử dụng cho dideoxynucleotide trình tự (phương pháp Sanger) hoặc trang web cụ thể gây đột biến