Previously, we have demonstrated el

Previously, we have demonstrated electrochemical
measurement for the LAMP product using Hoechst 33258 as an
electrochemically active species.39,40 The measurements were
carried out at the end point of the LAMP reaction for enzyme
activity inhibition of Hoechst 33258. The amplification of DNA
by PCR or RT-PCR was possible in the presence of MB in the
reaction solution.34–36 Here, for the first time, the amplification of
influenza virus RNA by the RT-LAMP reaction was carried out
in the presence of MB and the amplification was confirmed by
electrophoresis. Furthermore, the amplified DNA by RT-LAMP
or RT-PCR was compared. Influenza virus (45 FFU/mL) at the
same concentration in reaction mixture was amplified by
RT-LAMP or RT-PCR at various reaction times and cycles,
respectively. Aliquots of both reaction solutions (1 mL) were
electrophoreted on a 4% (w/v) agarose gel containing ethidium
bromide in running buffer and the amplified DNA was visualized
by UV illumination (Fig. 3). After 20 min of RT-LAMP reaction,
the characteristic ladder of multiple bands was observed. This
ladder pattern is characteristic of the LAMP amplification and
indicates that stem-loop DNA with inverted repeats of the target
sequence is produced. Though the characteristic ladder pattern
was not observed at 15 min of RT-LAMP reaction, a huge
volume of amplified DNA could be confirmed with a smear of
amplified DNA on the gel. In the case of RT-PCR, the 232 bp
target sequence of influenza virus was amplified. The specific 232
bp sequence was observed at 30 cycles but it was not clear. Fig. 3
shows undoubtedly that the RT-LAMP can amplify DNA effi-
ciently compared to RT-PCR. To make matters worse, a standardized
RT-PCR needs a long time in the RT reaction and PCR
cycles for amplifying DNA. The RT reaction for RT-PCR
commonly needs 30 min. After denaturation at 95 C for 2 min,
PCR cycles to amplify DNA starts. In RT-LAMP, RT and
LAMP reaction occur simultaneously because reverse transcriptase
and Bst DNA polymerase have an activity at 63 C.
These advantages of RT-LAMP are attractive in developing
a hand held electrochemical monitoring device with MB.

Kết quả (Việt) 1:

Trước đây, chúng tôi đã chứng minh điện hóađo lường cho sản phẩm đèn bằng cách sử dụng Hoechst 33258 như là mộtelectrochemically hoạt động species.39,40 các đo đạcthực hiện tại điểm cuối của phản ứng đèn cho enzymức chế hoạt động Hoechst 33258. Khuếch đại của DNAbởi Đảng Cộng sản Romania hoặc RT-PCR là có thể có sự hiện diện của MB trong cácphản ứng solution.34–36 ở đây, cho lần đầu tiên, khuếch đại củavirus cúm RNA bằng phản ứng RT-đèn được thực hiệnsự hiện diện của MB và khuếch đại đã được xác nhận bởiđiện. Hơn nữa, DNA khuếch đại của RT-đènhoặc RT-PCR được so sánh. Virus cúm (45 FFU/mL) tại cácCác nồng độ tương tự trong phản ứng hỗn hợp được khuếch đại bởiRT-đèn hoặc RT-Đảng Cộng sản Romania tại các thời gian phản ứng và chu kỳ,tương ứng. Aliquots của cả hai giải pháp phản ứng (1 mL)electrophoreted trên một gel agarose 4% (w/v) có ethidiumbromua trong chạy bộ đệm và DNA khuếch đại được hình dungbởi UV các chiếu sáng (hình 3). Sau 20 phút của RT-đèn phản ứng,Các bậc thang đặc trưng của nhiều ban nhạc được quan sát thấy. Điều nàyMô hình bậc thang là đặc tính của khuếch đại đèn vàchỉ ra rằng thân cây-vòng DNA với đảo ngược lặp đi lặp lại của các mục tiêutrình tự được sản xuất. Mặc dù các đặc tính Thang mô hìnhkhông được quan sát tại 15 phút của RT-đèn phản ứng, một lớnkhối lượng của khuếch đại DNA có thể được xác nhận với một smear củakhuếch đại DNA trên gel. Trong trường hợp của RT-Đảng Cộng sản Romania, 232 các bpmục tiêu thứ tự của vi rút cúm được khuếch đại. 232 cụ thểBP chuỗi được quan sát thấy tại chu kỳ 30, nhưng nó là không rõ ràng. Hình 3không nghi ngờ gì cho thấy rằng RT-đèn có thể khuyếch đại DNA thống-ciently so với RT-Đảng Cộng sản Romania. Để làm cho vấn đề tồi tệ hơn, một tiêu chuẩnĐảng Cộng sản Romania RT cần một thời gian dài trong RT phản ứng và Đảng Cộng sản Romaniachu kỳ cho khuyếch đại DNA. Phản ứng RT cho RT-PCRthường cần 30 phút. Sau khi denaturation tại 95 C cho 2 phút,Đảng Cộng sản Romania chu kỳ để khuyếch đại DNA bắt đầu. Ở RT-đèn, RT vàĐÈN phản ứng xảy ra đồng thời bởi vì reverse transcriptasevà Bst DNA polymerase có một hoạt động ở 63 C.Những lợi thế của RT-đèn là hấp dẫn trong việc phát triểnmột tay tổ chức điện thoại giám sát với MB.

Kết quả (Việt) 2:

Trước đây, chúng tôi đã chứng minh điện
đo lường đối với các sản phẩm ĐÈN sử dụng Hoechst 33.258 như một
species.39,40 electrochemically hoạt động Các phép đo được
thực hiện tại điểm cuối của phản ứng ĐÈN cho enzyme
ức chế hoạt động của Hoechst 33258. Các khuếch đại DNA
bằng PCR hoặc RT-PCR là có thể trong sự hiện diện của MB trong
solution.34-36 phản ứng đây, lần đầu tiên, sự khuếch đại của
vi rút cúm RNA bằng phản ứng RT-LAMP đã được thực hiện
trong sự hiện diện của MB và sự khuếch đại là xác nhận bằng
điện. Hơn nữa, các DNA khuếch đại bằng RT-LAMP
hoặc RT-PCR được so sánh. Virut cúm (45 FFU / mL) ở
cùng nồng độ trong hỗn hợp phản ứng được khuếch đại bằng
RT-LAMP hoặc RT-PCR ở thời gian phản ứng khác nhau và các chu kỳ,
tương ứng. Phân ước của cả hai giải pháp phản ứng (1 ml) được
electrophoreted trên 4% (w / v) gel agarose có chứa ethidium
bromide trong chạy đệm và DNA thu được hình dung
bằng cách chiếu sáng UV (Fig. 3). Sau 20 phút phản ứng RT-LAMP,
các bậc thang đặc trưng của nhiều ban nhạc đã được quan sát. Điều này
mô hình bậc thang là đặc trưng của khuếch đại LAMP và
chỉ ra rằng gốc-loop DNA với lặp đi lặp lại đảo ngược của mục tiêu
tự được sản xuất. Mặc dù mô hình bậc thang đặc trưng
không quan sát thấy ở 15 phút của phản ứng RT-LAMP, một lớn
khối lượng của DNA khuếch đại có thể được xác nhận bằng một smear của
DNA khuếch đại trên gel. Trong trường hợp của RT-PCR, 232 bp
chuỗi mục tiêu của virus cúm đã được khuếch đại. 232 cụ thể
trình tự bp đã được quan sát tại 30 chu kỳ, nhưng nó không rõ ràng. Sung. 3
chương trình chắc chắn rằng RT-LAMP có thể khuếch đại DNA effi-
ciently so với RT-PCR. Để làm cho vấn đề tồi tệ hơn, một tiêu chuẩn hóa
RT-PCR cần một thời gian dài trong các phản ứng RT và PCR
chu kỳ để khuếch đại DNA. Phản ứng RT cho RT-PCR
thường cần 30 phút. Sau khi biến tính ở 95 C trong 2 phút,
chu kỳ PCR để khuếch đại DNA bắt đầu. Trong RT-LAMP, RT và
phản ứng ĐÈN xảy ra đồng thời vì sao chép ngược
và Bst DNA polymerase có một hoạt động ở 63 C.
Những lợi thế của RT-LAMP là hấp dẫn trong việc phát triển
một thiết bị cầm tay giám sát điện với MB.