ImmunohistochemistryThe immunohisto

Immunohistochemistry

The immunohistochemistry procedure was based on Janjatović et al. (2008). The embedded ileal tissues were sectioned at 5 μm and placed on the microslides. Anti- gen retrieval for porcine neutrophils was performed by heating the slides in 10 mmol/L of sodium citrate solu- tion (pH 6.0) for 20 min in a microwave, whereas that for porcine macrophages was treated with 0.1% trypsin for 20 min. Peroxidase activity was blocked by treating the slides with 0.3% aqueous hydrogen peroxide solu- tion for 30 min at room temperature. Slides were then respectively incubated for 30 min with porcine neutro- phil-specific antibody PM1 (BMA Biomedicals, Augst, Switzerland) diluted 1:200 with PBS or porcine macro- phage-specific antibody MAC387 (Abcam, Cambridge, MA) diluted 1:1,000 with PBS. Antibody binding was visualized by using the avidin-biotin complex, and the diaminobenzidine (DAB) chromogen (Biogenex, Fre- mont, CA). Hematoxylin (Biogenex) was applied as a counter stain. Slides incubated without the primary an- tibodies but with PBS were used as negative controls. Images were captured (NanoZoomer Digital Pathology System; Hamamatsu Co.), and all measurements were conducted in the associated NDP.view software. Fifteen straight and integrated ileal villi were selected for mea- surement. The unit was the number of cells per square millimeter.

Kết quả (Việt) 2:

Mô miễn dịch Các thủ tục miễn dịch dựa trên Janjatović et al. (2008). Các mô ruột hồi nhúng được khúc tại 5 mm và được đặt trên microslides. Chống gen hồi cho bạch cầu trung tính ở lợn đã được thực hiện bằng cách nung nóng các slide trong 10 mmol / L của sodium citrate solu- tion (pH 6.0) cho 20 phút trong lò vi sóng, trong khi đó đối với các đại thực bào ở lợn đã được điều trị bằng 0,1% trypsin trong 20 phút. Hoạt động peroxidase đã bị chặn bằng cách xử lý các slide với 0,3% dung dịch hydrogen peroxide tion solu- trong 30 phút ở nhiệt độ phòng. Slides sau đó lần lượt là ủ trong 30 phút với neutro- lợn kháng thể phil-PM1 cụ thể (BMA Biomedicals, Augst, Thụy Sĩ) pha loãng 1: 200 với PBS hoặc lợn vĩ mô thực khuẩn kháng thể đặc hiệu MAC387 (Abcam, Cambridge, MA) pha loãng 1: 1000 với PBS. Kháng thể ràng buộc được hình dung bằng cách sử dụng phức tạp avidin-biotin, và các diaminobenzidine (DAB) nhiễm sắc (Biogenex, mont Fre-, CA). Hematoxylin (Biogenex) đã được áp dụng như một vết truy cập. Slides ủ mà không tibodies An- chính, nhưng với PBS đã được sử dụng như điều khiển âm. Hình ảnh đã được chụp (Digital Hệ thống Bệnh NanoZoomer; Hamamatsu Co.), và tất cả các phép đo được thực hiện trong phần mềm NDP.view liên quan. Mười lăm thẳng và tích hợp vi nhung mao ruột hồi đã được chọn để đo lường mức độ surement. Các đơn vị là số lượng các tế bào trên mỗi milimet vuông.