INTRODUCTIONThe in vitro scratch as

INTRODUCTION
The in vitro scratch assay is a straightforward and economical method to study cell migrationin vitro 1
. This method is based on the observation that, upon creation of a new artificial gap, so called
‘‘scratch’’, on a confluent cell monolayer, the cells on the edge of the newly created gap will move toward the opening to close the ‘‘scratch’’ until new cell–cell contacts are established again. The basic steps involve creation of a ‘‘scratch’’ on monolayer cells,capture of images at the beginning and regular intervals during cell migration to close the scratch, and comparison of the images to determine the rate of cell migration.
One of the major advantages of this simple method is that it mimics to some extent migration of cellsin vivo.Forexample,removal of part of the endothelium in the blood vessels will induce
migration of endothelial cells (ECs) into the denuded area to close the wound
2
. Furthermore, the patterns of migration either as loosely connected population (e.g., fibroblasts) or as sheets of cells (e.g., epithelial and ECs) also mimic the behavior of these
cells during migrationin vivo. Another advantage of the in vitro scratch assay is its particular suitability to study the regulation of cell migration by cell interaction with extracellular matrix (ECM)
and cell–cell interactions. In other popular methods such as Boyden chamber assays, preparation of cells in suspension before the assays disrupts cell–cell and cell–ECM interactions. In addition,the in vitro scratch assay is also compatible with microscopy including live cell imaging, allowing analysis of intracellular signaling events (e.g., by visualization of green fluorescent protein (GFP)-tagged proteins for subcellular localization or fluorescent resonance
energy transfer for protein–protein interactions) during cell migration. On the other hand, it is also probably the simplest method to study cell migration in vitro and only uses the common and inexpensive supplies found in most laboratories capable of cell culturing.
Although it is developed and more suitable for measuring migration of population of cells, thein vitro scratch assay has also been combined with other techniques, such as microinjection
or gene transfection, to assess the effects of expression of exogenous
genes on migration of individual cells
3–5
. The migration path of
individual cells in the leading edge of the scratch is tracked with the
aid of time-lapse microscopy and image analysis software. Capturing of an image in the beginning of the experiment with fluorescence microscopy can mark the cells with expression of exogenous
gene or downregulation of endogenous genes by RNA interference (e.g., using a GFP marker). By comparing the tracks of these cells with surrounding control cells under the same experimental conditions allows determination of the role of a particular gene in the regulation of directional cell migration using the assay.

Kết quả (Việt) 1:

GIỚI THIỆUCác khảo nghiệm đầu trong ống nghiệm là một phương pháp đơn giản và kinh tế để nghiên cứu tế bào migrationin ống nghiệm 1. Phương pháp này dựa trên các quan sát rằng, sau khi tạo ra một khoảng cách nhân tạo mới, vì vậy gọi là'' đầu '', trên một monolayer confluent tế bào, các tế bào ở rìa của khoảng cách mới được tạo ra sẽ di chuyển về hướng cửa để đóng đầu '''' cho đến khi số liên lạc mới tế bào-tế bào được thành lập một lần nữa. Các bước cơ bản liên quan đến sáng tạo của một đầu '''' trên tế bào monolayer, chụp của hình ảnh ở đầu và các chu kỳ bình thường trong di động di chuyển để đóng đầu, và so sánh các hình ảnh để xác định tỷ lệ di động di chuyển.Một trong những lợi thế lớn của phương pháp này đơn giản là nó bắt chước để di chuyển một số mức độ của cellsin vivo. Forexample, loại bỏ một phần của nội mạc trong các mạch máu sẽ gây radi cư của các tế bào nội mô (ECs) vào khu vực denuded để đóng vết thương2. Hơn nữa, các mô hình của di chuyển là lỏng lẻo kết nối dân (ví dụ: fibroblasts) hoặc như tấm của tế bào (ví dụ:, biểu mô và ECs) cũng bắt chước hành vi của nhữngtế bào trong migrationin vivo. Một ưu điểm của các khảo nghiệm đầu trong ống nghiệm là của nó thích hợp cụ thể để nghiên cứu các quy định của di động di chuyển bằng di động tương tác với ngoại bào ma trận (ECM)và tế bào-tế bào tương tác. Trong phương pháp phổ biến khác chẳng hạn như Boyden phòng thử nghiệm, chuẩn bị của các tế bào trong hệ thống treo trước khi các thử nghiệm sẽ phá vỡ tế bào-tế bào và tế bào-ECM tương tác. Ngoài ra, các khảo nghiệm đầu trong ống nghiệm là cũng tương thích với kính hiển vi bao gồm cả hình ảnh sống di động, cho phép phân tích của sự kiện tín hiệu tế bào (ví dụ:, bởi kiểu trực quan của màu xanh lá cây huỳnh quang protein (GFP)-được dán protein cho địa phương hoá của hoặc cộng hưởng huỳnh quangnăng lượng chuyển cho tương tác protein-protein) trong khi di động di chuyển. Mặt khác, nó cũng có thể là phương pháp đơn giản nhất để học tập di động di chuyển trong ống nghiệm và chỉ sử dụng các nguồn cung cấp phổ biến và rẻ tiền được tìm thấy ở hầu hết các phòng thí nghiệm có khả năng di động nuôi.Mặc dù nó là phát triển và phù hợp hơn cho đo di cư của dân số tế bào, thein ống nghiệm đầu khảo nghiệm cũng đã được kết hợp với các kỹ thuật khác, chẳng hạn như microinjectionhoặc transfection gen, để đánh giá những tác động của các biểu hiện của ngoại sinhgen về di chuyển của các cá nhân tế bào3-5. Con đường di chuyểnCác tế bào cá nhân trong mép trong đầu theo dõi với cácTrợ giúp của thời gian trôi đi kính hiển vi và hình ảnh phần mềm phân tích. Thu giữ một hình ảnh ban đầu của thử nghiệm với kính hiển vi huỳnh quang có thể đánh dấu các tế bào với các biểu hiện của ngoại sinhgen hoặc downregulation của gen nội sinh bởi RNA can thiệp (ví dụ, bằng cách sử dụng một điểm đánh dấu GFP). Bằng cách so sánh các bài hát của các tế bào với xung quanh kiểm soát các tế bào theo các điều kiện cùng một thử nghiệm cho phép xác định vai trò của một gen cụ thể trong các quy định của di chuyển hướng di động bằng cách sử dụng các khảo nghiệm.